薄層色譜基礎(chǔ)知識及斑點異常

薄層色譜基礎(chǔ)知識Zhuhaikangabc及斑點異常的原因和克服1當前第1頁\共有53頁\編于星期六\10點

薄層色譜操作的流程結(jié)果判定顯色展開點樣薄層板2當前第2頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備什么是固定相？固定相3當前第3頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備常用固定相1、聚酰胺2、硅膠3、硅澡土4、氧化鋁5、纖維素6、其他4當前第4頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備聚酰胺1、什么是聚酰胺？2、聚酰胺適合那些化合物的分離？適用于多元酚類化合物分離，如黃酮，醌類，酚酸，含羰基的化合物等5當前第5頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備硅膠1、什么是硅膠2、硅膠適合酸性和堿性等化合物的分離6當前第6頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備硅膠硅膠G硅膠H/硅膠N硅膠GF245硅膠HF2543、實驗室硅膠有哪些型號硅膠S7當前第7頁\共有53頁\編于星期六\10點硅膠G和硅膠S薄層板的制備1.硅膠G是指硅膠粉+15%煅石膏。2.硅膠S是指硅膠粉+15%淀粉。8當前第8頁\共有53頁\編于星期六\10點硅膠H或硅膠N薄層板的制備是指純硅膠粉，沒有添加任何粘合劑9當前第9頁\共有53頁\編于星期六\10點硅膠H和硅膠G的應(yīng)用薄層板的制備1物質(zhì)是有色的，在日光看2物質(zhì)沒有顏色但可以利用顯色劑顯色3.可以熒光顯色10當前第10頁\共有53頁\編于星期六\10點硅膠HF254和硅膠GF254薄層板的制備1.是指添加了熒光劑，如硫化鎘等。

2.應(yīng)用范圍：物質(zhì)有熒光，在254波長紫外下看其熒光；物質(zhì)沒熒光，在254波長紫外下看暗斑（熒光淬滅）11當前第11頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備無黏合劑自制板含黏合劑12當前第12頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的配制先將稱好的CMC-Na加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,再加熱煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過程中不易形成顆粒,煮沸時間短.

13當前第13頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的濃度溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實際操作中0.4％～0.5％最為實用，濃度高了將來顯色時如果有加熱過程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低了鋪出來的板子不結(jié)實，不好保存

14當前第14頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的存放注意放置時間太長的CMC-Na溶液可能會發(fā)黃，而且可能有霉菌出現(xiàn)，最好不要使用。

15當前第15頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層板的制備操作：除另有規(guī)定外，是指將1份固定相和3份水溶液，研磨混合，置玻璃板上使涂布均勻，平臺上于室溫下晾干，活化后，置有干燥器中備用。制板16當前第16頁\共有53頁\編于星期六\10點注意點1.沿同一方向研磨混合，避免產(chǎn)生氣泡2.厚度為0.2－0.3mm，涂層薄，點樣容易過載；涂層厚，顯色不那么明顯3.室溫下在水平位置放置，待薄層發(fā)白近干

薄層板的制備17當前第17頁\共有53頁\編于星期六\10點注意點5.研磨時間6.鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進一步影響上樣量。

薄層板的制備18當前第18頁\共有53頁\編于星期六\10點活化2.在105－110度活化30分鐘。3.一般檢識水溶性成分或一些極性大的成分時，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活化即可貯存?zhèn)溆谩?/p>

薄層板的制備1.薄層板為何要進行“活化”？19當前第19頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的點樣點樣器20當前第20頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的點樣潔凈、干燥點樣環(huán)境21當前第21頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的點樣點樣的形狀1、圓點2、條帶狀22當前第22頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的點樣點樣的距離10－15mm8－10mm>5mm直徑不大于2mm寬度4－8mm>8mm直徑不大于4mm寬度5－10mm自制板高效板23當前第23頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的點樣點樣的注意點1.不要弄破薄層板2.點樣量大時，少量多次，3.點好樣的薄層板用電吹風吹干或放入干燥器里晾干24當前第24頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的展開展開將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜，密封25當前第25頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的展開展開劑配制2.混合展開劑要求新鮮配制，不要多次反復使用,如需分層，則按要求放置分層后取需要的一相（上層或下層），備用

1.把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。最好不要把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑。26當前第26頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的展開預(yù)飽和、預(yù)平衡展開缸如需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡，可在缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持15－30分鐘27當前第27頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的展開展開距離展開至規(guī)定距離（一般為8～15cm）28當前第28頁\共有53頁\編于星期六\10點薄層色譜的顯色顯色與檢視1.供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。2.有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在356nm紫外光燈下觀察熒光色譜。3.對于可見光下無色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板（如GF254板），在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜29當前第29頁\共有53頁\編于星期六\10點1、拖尾現(xiàn)象2、邊緣效應(yīng)3、S形及波形斑點

4、念珠狀斑點

5、斑點與對照品對不上薄層色譜中斑點的異常異常現(xiàn)象6、其它30當前第30頁\共有53頁\編于星期六\10點拖尾原因斑點異常1.點樣量過載2.點樣圓點未重合3.展開劑4.薄層析5.其他31當前第31頁\共有53頁\編于星期六\10點拖尾斑點異常與克服1.點樣量過載任何吸附劑，它們的負載化合物的能力是有一定限度的，因此點樣過量而超載后，過剩的化合物被拋在后面，形成拖尾現(xiàn)象克服方法：A.點樣時可以點成條帶狀B.選用稍厚一點的板32當前第32頁\共有53頁\編于星期六\10點拖尾斑點異常與克服2.點樣圓心未重合樣點雖然在同一垂直線上但樣點上下圓心沒有重合，致使樣點呈近橢圓形，也是形成拖現(xiàn)象的原因之一

克服方法：點樣位置要準確，預(yù)先設(shè)計好點樣的位置，然后用鉛筆作好標記，每次點樣對準圓點33當前第33頁\共有53頁\編于星期六\10點拖尾斑點異常與克服3.展開劑的配制34當前第34頁\共有53頁\編于星期六\10點拖尾斑點異常與克服4.薄層板為了提高樣品的分離度和減少斑點的拖尾，鋪板時在硅膠中加入某些酸（如硼酸，草酸），堿（如氫氧化鈉），鹽（如磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉）等將硅膠板改性

克服方法：硅膠預(yù)制板可用浸板的辦法改性

35當前第35頁\共有53頁\編于星期六\10點邊緣效應(yīng)2、薄層板3、展開劑未預(yù)飽和斑點異常1、點樣邊距4、其他36當前第36頁\共有53頁\編于星期六\10點邊緣效應(yīng)斑點異常與克服1.點樣邊距37當前第37頁\共有53頁\編于星期六\10點邊緣效應(yīng)斑點異常與克服2.薄層板薄層板厚薄不均勻，兩邊厚或者兩邊薄都是形成邊邊緣效應(yīng)的原因之一克服方法：選用符合要求的薄層板。（符合要求的薄層板應(yīng)該在反射光下板面平滑均勻，無氣泡，灰塵或顆粒，透射光下薄層紋理均勻細膩）38當前第38頁\共有53頁\編于星期六\10點邊緣效應(yīng)斑點異常與克服3.預(yù)飽和在薄層板上一般是邊緣上的展開劑較容易揮發(fā),如果這幾個有機溶劑的揮發(fā)性能差異比較大,那么就會造成薄層板上邊緣和中間展開劑比例的差異而產(chǎn)生展開速度不一致的現(xiàn)象克服方法：展開前要充分飽和

39當前第39頁\共有53頁\編于星期六\10點波形斑點S形斑點斑點異常S形及波形斑點40當前第40頁\共有53頁\編于星期六\10點S形斑點斑點異常S形斑點是指含多咱成分的樣品層析時，其斑點不是順次分布于原點至展開前沿的垂直線上，而是呈S形分布于垂直線兩側(cè)。41當前第41頁\共有53頁\編于星期六\10點波形斑點

斑點異常波形斑點：是指某些含多種成分的樣品液，順次點于同一起始線上，展開后，這些成分相同的斑點不吃不開直線狀平行于起始線，而是呈波浪形。42當前第42頁\共有53頁\編于星期六\10點S形及波形斑點斑點異常2.為避免上述現(xiàn)象的出現(xiàn)，應(yīng)選用厚薄均勻的薄層板1.產(chǎn)生原因：多數(shù)是因為薄層板厚薄不勻。43當前第43頁\共有53頁\編于星期六\10點念珠狀斑點斑點異常念珠狀斑點是指化合物斑點之間距離小，相互連接呈念珠狀44當前第44頁\共有53頁\編于星期六\10點念珠狀斑點異常與克服產(chǎn)生原因及克服方法1.樣品中成分過多，在下定長度的薄層板上，排布不開，彼此重疊。可適當增加層析板長度，使斑點距離加大或采用雙向?qū)游觯顾煞窒騼蓚€方向展開可以避免念珠狀斑點的出現(xiàn)。

2.多次點樣時，點樣中心不重合，形成復斑。應(yīng)以適當濃度供試液一次點樣，若多次點樣，點樣中心必須重合。45當前第45頁\共有53頁\編于星期六\10點Rf值不穩(wěn)定斑點異常1.溫度2.濕度3.手工制板4.溶劑質(zhì)量46當前第46頁\共有53頁\編于星期六\10點Rf值不穩(wěn)定斑點異常與克服1.溫度溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。47當前第47頁\共有53頁\編于星期六\10點Rf值不穩(wěn)定斑點異常與克服2.濕度48當前第48頁\共有53頁\編于星期六\10點Rf值不穩(wěn)定斑點異常與克服2.濕度濕度的影響，主要是影響薄層板的吸附能力，導致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸49當前第49頁\共有53頁\編于星期六\10點Rf值不穩(wěn)定斑點異常與克服濕度的控制50當前第50頁\共有53頁\編于星期六\10點Rf值不穩(wěn)定斑點異常與克服手工制板由于手工制的板的技巧不同，所制備的薄層板的質(zhì)量不同造成重現(xiàn)性差51