病原性球菌及桿菌課件

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.示教觀察葡萄球菌、鏈球菌的形態(tài)2.觀察腸道桿菌在SS培養(yǎng)基的生長情況及菌落特征，以及腸道桿菌的雙糖發(fā)酵3.化膿性球菌的鑒定⑴三種葡萄球菌的色素觀察⑵甲、乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察4.甘露醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)5.血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)1.葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物示教

普通瓊脂平板血平板

菌落形狀色素溶血性

金葡圓形凸起光滑中等大小金黃色+檸葡同上檸檬色-白葡同上白色-

表1葡萄球菌分類按照色素不同金黃色葡萄球菌（金黃色）表皮葡萄球菌（白色）腐生葡萄球菌（檸檬色）三種葡萄球菌的主要性狀性狀金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落色素

金黃色

白色白色或檸檬色血漿凝固酶+--甘露醇+--溶血性

β溶血--SPA+--耐熱核酸酶+--致病性

強(qiáng)

弱

無

血平板甲型鏈球菌針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)

(α溶血即不完全溶血）乙型鏈球菌針尖小菌落、透明寬大溶血環(huán)（β溶血即完全溶血）

巧克力血平板腦膜炎雙球菌菌落透明似露滴狀

表2

表3（傷寒桿菌、痢疾桿菌）（β溶血即完全溶血）若細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中硫酸亞鐵作用,形成黑色的硫化鐵呈黑色。配合半固體培養(yǎng)基可觀察腸道桿菌中的細(xì)菌動力。葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物(α溶血即不完全溶血）檸葡同上檸檬色-配合半固體培養(yǎng)基可觀察腸道桿菌中的細(xì)菌動力。Salmonella-ShigellaMediun++兔血漿兔血漿巧克力血平板原理：能產(chǎn)生血漿凝固酶的菌株傾入機(jī)體后使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白導(dǎo)致血漿凝固（致病性葡萄球菌產(chǎn)生血漿凝固酶）原理：能產(chǎn)生血漿凝固酶的菌株傾入機(jī)體后使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白導(dǎo)致血漿凝固（致病性葡萄球菌產(chǎn)生血漿凝固酶）SS平板：為強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基，內(nèi)含膽鹽、枸櫞酸鈉和煌綠，可抑制大腸桿菌和非腸道桿菌的生長；還含有乳糖和中性紅，一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，產(chǎn)生堿性物質(zhì)，故菌落呈淡黃色。普通瓊脂平板血平板++甲型鏈球菌針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖,分解葡萄糖后所生成的少量酸可使底層pH降低；草綠色鏈球菌不溶血鏈球菌溶血性鏈球菌多為條件致病菌致病力強(qiáng)無致病性α溶血(狹窄草綠色溶血環(huán)

)β溶血（寬大透明溶血環(huán)）乙型溶血性鏈球菌溶血環(huán)大腸桿菌（非致病菌）在SS培養(yǎng)基上可形成相對較大，不透明，紅色的菌落。傷寒桿菌在SS培養(yǎng)基上形成相對較小，半透明，無色或淡黃色的菌落，產(chǎn)生硫化氫的細(xì)菌菌落中心呈黑色。痢疾桿菌在SS培養(yǎng)基上形成的菌落與傷寒桿菌菌落相似。SS平板：為強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基，內(nèi)含膽鹽、枸櫞酸鈉和煌綠，可抑制大腸桿菌和非腸道桿菌的生長；還含有乳糖和中性紅，一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，產(chǎn)生堿性物質(zhì)，故菌落呈淡黃色。大腸桿菌發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸使指示劑變紅，故菌落呈紅色。大腸桿菌痢疾桿菌雙糖鐵培養(yǎng)基含葡萄糖、乳糖、硫酸亞鐵。指示劑為酚紅。葡萄糖與乳糖的比例為1:10。若細(xì)菌分葡萄糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。（大腸桿菌)

若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖,分解葡萄糖后所生成的少量酸可使底層pH降低；而上層少量酸因接觸空氣而氧化，并因細(xì)菌生長繁殖利用含氮物質(zhì)生成堿性化合物，呈紅色。（傷寒桿菌、痢疾桿菌）若細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中硫酸亞鐵作用,形成黑色的硫化鐵呈黑色。（傷寒桿菌）配合半固體培養(yǎng)基可觀察腸道桿菌中的細(xì)菌動力。

Salmonella-ShigellaMediun主要成分基礎(chǔ)營養(yǎng)乳糖指示劑抑制劑分解乳糖不分解乳糖產(chǎn)酸PH指示劑變紅色紅色大菌落大腸桿菌等無明顯變化無色半透明小菌落志賀菌等甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)（示教）分別取金葡、白葡菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。金黃色葡萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。血漿凝固酶試驗(yàn)--玻片法（操作，1人/組）原理：能產(chǎn)生血漿凝固酶的菌株傾入機(jī)體后使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白導(dǎo)致血漿凝固（致病性葡萄球菌產(chǎn)生血漿凝固酶）方法：

兔血漿兔血漿12金葡白葡++凝集顆粒（+）不凝集（-）4、血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法）

金葡菌白葡菌

++

兔血漿兔血漿

37℃30′水浴觀察

凝集為陽性（膠凍樣凝固狀態(tài)）不凝集為陰性示教凝固酶實(shí)驗(yàn)（試管法）1.葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物示教

普通瓊脂平板血平板

菌落形狀色素溶血性

金葡圓形凸起光滑中等大小金黃色+檸葡同上檸檬色-白葡同上白色-

表1

血平板甲型鏈球菌針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)

(α溶血即不完全溶血）乙型鏈球菌針尖小菌落、透明寬大溶血環(huán)（β溶血即完全溶血）

巧克力血平板腦膜炎雙球菌菌落透明似露滴狀

表2

表3還含有乳糖和中性紅，一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，產(chǎn)生堿性物質(zhì)，故菌落呈淡黃色。++葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物血漿凝固酶試驗(yàn)--玻片法而上層少量酸因接觸空氣而氧化，并因細(xì)菌生長繁殖利用含氮物質(zhì)生成堿性化合物，呈紅色。甲型鏈球菌針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)而上層少量酸因接觸空氣而氧化，并因細(xì)菌生長繁殖利用含氮物質(zhì)生成堿性化合物，呈紅色。SS平板：為強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基，內(nèi)含膽鹽、枸櫞酸鈉和煌綠，可抑制大腸桿菌和非腸道桿菌的生長；傷寒桿菌在SS培養(yǎng)基上形成相對較小，半透明，無色或淡黃色的菌落，產(chǎn)生硫化氫的細(xì)菌菌落中心呈黑色。Salmonella-ShigellaMediun檸葡同上檸檬色-腦膜炎雙球菌菌落透明似露滴狀大腸桿菌發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸使指示劑變紅，故菌落呈紅色。三種葡萄球菌的主要性狀中，置37℃培養(yǎng)箱，若細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中硫酸亞鐵作用,形成黑色的硫化鐵呈黑色。葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物配合半固體培養(yǎng)基可觀察腸道桿菌中的細(xì)菌動力。普通瓊脂平板血平板白葡同上白色-雙糖鐵培養(yǎng)基含葡萄糖、乳糖、硫酸亞鐵。（傷寒桿菌、痢疾桿菌）若細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中硫酸亞鐵作用,形成黑色的硫化鐵呈黑色。金葡圓形凸起光滑中等大小金黃色+腦膜炎雙球菌菌落透明似露滴狀若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖,分解葡萄糖后所生成的少量酸可使底層pH降低；⑴三種葡萄球菌的色素觀察檸葡同上檸檬色-⑵甲、乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察金葡圓形凸起光滑中等大小金黃色+4、血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法）Salmonella-ShigellaMediun(α溶血即不完全溶血）大腸桿菌發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸使指示劑變紅，故菌落呈紅色。白葡同上白色-白葡同上白色-還含有乳糖和中性紅，一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，產(chǎn)生堿性物質(zhì)，故菌落呈淡黃色。金葡白葡葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖,分解葡萄糖后所生成的少量酸可使底層pH降低；抑制劑檸葡同上檸檬色-（傷寒桿菌、痢疾桿菌）金葡圓形凸起光滑中等大小金黃色+還含有乳糖和中性紅，一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，產(chǎn)生堿性物質(zhì)，故菌落呈淡黃色。而上層少量酸因接觸空氣而氧化，并因細(xì)菌生長繁殖利用含氮物質(zhì)生成堿性化合物，呈紅色。白葡同上白色-血平板大腸桿菌（非致病菌）在SS培養(yǎng)基上可形成相對較大，不透明，紅色的菌落。Salmonella-ShigellaMediun原理：能產(chǎn)生血漿凝固酶的菌株傾入機(jī)體后使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白導(dǎo)致血漿凝固（致病性葡萄球菌產(chǎn)生血漿凝固酶）菌落形狀色素溶血性葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物Salmonella-ShigellaMediun++Salmonella-ShigellaMediun檸葡同上檸檬色-SS平板：為強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基，內(nèi)含膽鹽、枸櫞酸鈉和煌綠，可抑制大腸桿菌和非腸道桿菌的生長；菌落形狀色素溶血性（傷寒桿菌、痢疾桿菌）雙糖鐵培養(yǎng)基含葡萄糖、乳糖、硫酸亞鐵。雙糖鐵培養(yǎng)基含葡萄糖、乳糖、硫酸亞鐵。大腸桿菌發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸使指示劑變紅，故菌落呈紅色。（β溶血即完全溶血）Salmonella-ShigellaMediun巧克力血平板++凝固酶實(shí)驗(yàn)（試管法）Salmonella-ShigellaMediun兔血漿兔血漿兔血漿兔血漿三種葡萄球菌的主要性狀檸葡同上檸檬色-大腸桿菌發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸使指示劑變紅，故菌落呈紅色。若細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中硫酸亞鐵作用,形成黑色的硫化鐵呈黑色。菌落形狀色素溶血性若細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中硫酸亞鐵作用,形成黑色的硫化鐵呈黑色。⑵甲、乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察4、血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法）乙型鏈球菌針尖小菌落、透明寬大溶血環(huán)若細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中硫酸亞鐵作用,形成黑色的硫化鐵呈黑色。葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物普通瓊脂平板血平板血平板37℃30′水浴觀察（β溶血即完全溶血）還含有乳糖和中性紅，一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，產(chǎn)生堿性物質(zhì)，故菌落呈淡黃色。還含有乳糖和中性紅，一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，產(chǎn)生堿性物質(zhì)，故菌落呈淡黃色。腦膜炎雙球菌菌落透明似露滴狀普通瓊脂平板血平板血平板基礎(chǔ)營養(yǎng)(α溶血即不完全溶血）乙型鏈球菌針尖小菌落、透明寬大溶血環(huán)普通瓊脂平板血平板兔血漿兔血漿示教觀察葡萄球菌、鏈球菌的形態(tài)若細(xì)菌只