設(shè)施番茄根結(jié)線蟲病抗性評價技術(shù)規(guī)程

設(shè)施番茄根結(jié)線蟲病抗性評價技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了設(shè)施番茄根結(jié)線蟲病抗性評價技術(shù)中的設(shè)施內(nèi)空氣環(huán)境與培養(yǎng)條件、鑒定材料、育苗與移苗、培養(yǎng)、線蟲接種液制備、接種、調(diào)查、抗性評價方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于設(shè)施內(nèi)番茄對根結(jié)線蟲病的抗性鑒定和評價。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB8079蔬菜種子NY/T1858.8番茄主要病害抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程第8部分：番茄抗南方根結(jié)線蟲病鑒定技術(shù)規(guī)程3設(shè)施內(nèi)空氣環(huán)境與培養(yǎng)條件3.1設(shè)施內(nèi)空氣環(huán)境設(shè)施內(nèi)空氣環(huán)境質(zhì)量要求符合GB3095的規(guī)定。3.2培養(yǎng)條件光周期為16h光照、8h黑暗、白天溫度28℃、夜間溫度22℃、相對濕度70%。鑒定材料鑒定材料種子質(zhì)量應(yīng)符合GB8079的規(guī)定。5育苗與移苗5.1育苗將待評價的番茄種子播種在裝有無菌蛭石的培養(yǎng)缽中，每個品種在每缽內(nèi)播種30粒，常規(guī)管理。5d~7d后種子萌發(fā)出幼苗，剔除生長不良的植株，保留生長一致的20株幼苗備用。5.2移苗將經(jīng)濕熱滅菌（121℃高溫蒸汽滅菌1.5h）的沙和土（V沙：V土=2：1）混合裝入直徑為12cm、深度為12cm的一次性塑料培養(yǎng)缽內(nèi)，每缽澆水50ml。將20株備用幼苗分別移栽到浸濕的沙土內(nèi)，每缽內(nèi)移入1株幼苗，每10盆為一次重復(fù)試驗。6培養(yǎng)移栽后的番茄苗于溫室中，每天根據(jù)天氣和盆栽蒸發(fā)量進行澆水，每周澆5mL霍格蘭氏營養(yǎng)液，番茄株高長至10cm時備用。7線蟲接種液制備7.1擴繁線蟲從當(dāng)?shù)厥卟舜笈飪?nèi)分離的根結(jié)線蟲，由實驗室經(jīng)單卵塊培養(yǎng)和大量擴繁后鑒定為南方根結(jié)線蟲（Meloidogyneincognita），用感病番茄品種——中蔬4號于溫室內(nèi)繁殖，接種培養(yǎng)45d后備用。接種體制備卵懸液的制備：取被南方根結(jié)線蟲侵染45d后的番茄根系，將洗凈的番茄根放入1%的次氯酸鈉溶液中（NaClO溶液體積是根系體系的2倍～3倍），振蕩3min～4min。然后將根及溶液一起倒入從上到下依次為200目和500目的篩子上，用高壓水槍沖洗。收集500目篩子上的卵至燒杯中，制成卵懸液，用磁力攪拌器將卵懸液混合均勻，在顯微鏡下調(diào)查卵的濃度，重復(fù)3次取平均值，計算線蟲卵懸液的濃度，備用。8接種在番茄植株兩側(cè)分別用1mL的微量移液器槍頭打孔，孔的直徑為7mm，孔深約4cm～5cm，根結(jié)線蟲接種劑量為1000個卵/株，接種后覆滅菌沙土。接種后的番茄在溫室繼續(xù)培養(yǎng)。9調(diào)查番茄接種40d～42d扣盆，將根部清洗干凈，調(diào)查番茄根系被線蟲危害后的發(fā)病情況。根據(jù)番茄根被根結(jié)線蟲侵染并形成根結(jié)占整個根系的比例進行定級，根結(jié)線蟲病的病情分級指標(biāo)：0級無根結(jié)1級1%～5%的根系上有根結(jié)2級6%～20%的根系上有根結(jié)3級21%～40%的根系上有根結(jié)4級41%～70%的根系上有根結(jié)5級71%～100%的根系上有根結(jié)10抗性評價方法抗性評價方法應(yīng)按NY/T1858.8執(zhí)行，病情指數(shù)按照（A.1）計算，鑒定調(diào)查表參見附錄表A.1。病情指數(shù)=∑（各級植株數(shù)×級值）×100/調(diào)查總株數(shù)×最高級值……（A.1）番茄抗性分級指標(biāo)：病情指數(shù)：0為免疫（I）；1～20為高抗（HR）；21～35為抗（R）；36～50中抗（MR）；51～75為感（S）；76～100為高感（HS）。附錄A（規(guī)范性附錄）表A.1對根結(jié)線蟲病抗性評價表日期：編號材料名稱根結(jié)線蟲病發(fā)病級別病情指數(shù)抗性12345678910平均123