蟲草的一種培養(yǎng)條件的研究

畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）題目：蟲草的一種培養(yǎng)條件的研究TITLE；acultureconditionsofCordyceps學(xué)生姓名：學(xué)號(hào)：—專業(yè)：生物技術(shù)指導(dǎo)教師：二零一二年六月Designgraduates(Papers)TITLE；acultureconditionsofCordycepsNameNumberMajorBiotechnologyInstructorJune2012摘要為研究蛹蟲草菌絲生長(zhǎng)最適生長(zhǎng)等人工栽培過程中所必須的適宜氮源、碳源、溫度、PH、礦質(zhì)元素，比較觀察了常見的氮源、碳源、溫度、PH、礦質(zhì)元素對(duì)菌種質(zhì)量、菌絲生長(zhǎng)狀況、發(fā)菌情況的影響。結(jié)果表明，各種氮源、碳源、不同PH、不同礦質(zhì)元素、在不同的溫和溫度下蛹蟲草菌絲體都能生長(zhǎng)，在蛋白胨、葡萄糖、24℃、PH6.7、磷酸二氫鉀加硫酸鎂組合下生長(zhǎng)最佳。關(guān)鍵詞：蛹蟲草；人工栽培；氮源；碳源；溫度；PH；礦質(zhì)元素ABSTRACTCordycepsmilitarisgrowthoptimumgrowthmustbeintheartificialcultivationoftheprocessofsuitablenitrogensource,carbonsource,temperature,PH,mineralelementcomparativeobservationofcommonelementsofnitrogen,carbonsource,temperature,PH,mineralstrainthequalityofmycelialgrowthconditions,madethesituationinbacteria.Theresultsshowedthatthenitrogensource,carbonsource,differentthePH,thedifferentmineralelementsinthemoderatetemperaturemycelialcangrow,peptone,glucose,24°C,PH6.7,potassiumdihydrogenphosphateandgrownundermagnesiumsulfatecombination.Keywords:Cordyceps militaris;artificial cultivation;nitrogen;carbonsource;temperature;thePH;mineralelements目錄緒論目錄緒論1蛹蟲草概述 1.蛹1蟲草生境特征 .蛹2蟲草形態(tài)特征 .蛹3蟲草的研究現(xiàn)狀 本論 2材料和方法 .材1料 主.要1儀器設(shè)備 2.1培.養(yǎng)2基及試劑 2.實(shí)2驗(yàn)方法 2.2蛹.蟲1草的菌種活化 2.2儀.器2的殺毒滅菌 2.2各.種3不同培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的配置.2.2倒.平4皿 2.2接.種5 2.2恒.溫6培養(yǎng)觀察與記錄 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果 小結(jié)與結(jié)論 致謝 參考文獻(xiàn) 錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義書簽。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。.錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。

附錄錯(cuò).誤.！.未.定.義.書.簽.。附錄緒論1蛹蟲草概述1.1蛹蟲草生境特征中國(guó)于1958年在吉林省首次發(fā)現(xiàn)，通過鑒定，認(rèn)為它與冬蟲夏草是同一個(gè)屬，定名為蛹草。主產(chǎn)于云南（昆明、安寧、江川）、吉林（安圖、永吉）、遼寧（沈陽）、內(nèi)蒙古（哲里木盟），生于針、闊葉林或混交林地表土層中鱗翅目昆蟲的蛹體上。蛹蟲草形態(tài)特征蛹蟲草；中文學(xué)名：蛹蟲草綱：子囊菌拉丁學(xué)名：Cordycepsmilitaris目：肉座菌科：別稱：北冬蟲夏草屬：界：真菌界麥角菌蟲草門：蛹蟲草百科名片蛹蟲草蛹蟲草為子囊菌亞門，麥角菌目，麥角菌科、蟲草屬的模式種。學(xué)名為Cordycepsmilitaris,又名北冬蟲夏草、北蛹蟲草、蟲草等。世界性分布天然資源數(shù)量很少。由子座（即草部分）與菌核（即蟲的尸體部分）兩部分組成的復(fù)合體。冬季幼蟲蟄居土里,菌類寄生其中,吸取營(yíng)養(yǎng),幼蟲體內(nèi)充滿菌絲而死。到了夏季,自幼蟲尸體之上生出幼苗,形似草,夏至前后采集而得。子座單生或數(shù)個(gè)一起從寄生蛹體的頭部或節(jié)部長(zhǎng)出，顏色為橘黃或橘紅色，全長(zhǎng)2—8厘米，蛹體顏色為紫色，長(zhǎng)約1.5—2厘米。1.菌絲體菌絲體蛹蟲草蛹蟲草的菌絲是一種子囊菌，其無性型為蛹草擬青霉。其菌體成熟后可形成子囊孢子（繁殖單位），孢子散發(fā)后隨風(fēng)傳播,孢子落在適宜的蟲體上,便開始萌發(fā)形成菌絲體。菌絲體一面不斷地發(fā)育,一面開始向蟲體內(nèi)蔓延，于是蛹蟲就會(huì)被真菌感染，分解蛹體內(nèi)的組織，以蛹體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)作為其生長(zhǎng)發(fā)育的物質(zhì)和能量來源，最后將蛹體內(nèi)部完全分解。2.子實(shí)體子實(shí)體一般當(dāng)蛹蟲草的菌絲把蛹體內(nèi)的各種組織和器官分解完畢后，菌絲體發(fā)育也進(jìn)入了一個(gè)新的階段。菌絲體由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)開始轉(zhuǎn)為生殖生長(zhǎng),最后扭結(jié)后從蛹體空殼的頭部、胸部、近尾部等處伸出,形成橘黃色或橘紅色的頂部略膨大的呈棒狀的子座（子實(shí)體）蛹蟲草的研究現(xiàn)狀冬蟲夏草是我國(guó)三大名貴中藥材之一,具有提高免疫功能及抗腫瘤作用,同時(shí)對(duì)慢性支氣管炎、高脂血癥、心血管疾病、男性性功能障礙等有很好的療效。天然的冬蟲夏在主要產(chǎn)于四川、西藏、云南、青海等?。▍^(qū)）的海拔3000m以上的寒冷地帶，由于其生長(zhǎng)條件的限制及過度采挖,產(chǎn)量很低,所以價(jià)格昂貴。因此,為彌補(bǔ)天然蟲草資源的不足,國(guó)內(nèi)外學(xué)者紛紛開展人工培養(yǎng)蟲草的研究,其中以蛹蟲草的研究和應(yīng)用最多。蛹蟲草有多種藥理作用：一；抗腫瘤作用,二；降血脂及降血壓作用,三；鎮(zhèn)靜及激素樣作用,四；耐缺氧和抗疲勞作用蛹蟲草-藥理作用現(xiàn)代科學(xué)論證科茸蛹蟲草不僅具有特殊的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,而且有明顯的藥用價(jià)值。其中尤以蟲草酸、蟲草素、蟲草多藥理作用糖和SOD等多種生物活性物質(zhì)的藥用價(jià)值最為顯著。蟲草酸（甘露醇）可以顯著地降低顱壓,促進(jìn)機(jī)體新陳代謝,因而使腦溢血和腦血栓病癥得到緩解因?yàn)橛枷x草具有多種藥用功能,可以作為食品直接食用,可以加工成保健品,更可以研制成藥品雖然蛹蟲草的人工培養(yǎng)在我國(guó)已獲得成功并進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化階段,但產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中仍存在一定的難題,突出的一點(diǎn)是蛹蟲草的退化問題,因?yàn)樗鼘?duì)生長(zhǎng)基質(zhì)及生態(tài)環(huán)境與一般的食用菌不同,而且長(zhǎng)期采用無性繁殖及多次轉(zhuǎn)管的蛹蟲草品種,其母種基因容易變異,變現(xiàn)為出草畸形甚至不出草,產(chǎn)量和質(zhì)量都不穩(wěn)定,生物轉(zhuǎn)化率較低,所以,必須研究和摸索出一種有效的防治蟲草菌退化的方法,從而確保蟲草的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)順利進(jìn)行,目前雖然市場(chǎng)上有一些蛹蟲草的產(chǎn)品，但這些產(chǎn)品多數(shù)停留在粗加工水平，缺乏市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，因此，要確保蛹蟲草產(chǎn)業(yè)能夠持續(xù)穩(wěn)定的發(fā)展，就必須要提高其加工產(chǎn)品的科技含量。據(jù)報(bào)道，美國(guó)已將蟲草的主要成分蟲草素提純，研制成針劑用于治療白血病和癌癥，并已進(jìn)入III期臨床。所以，對(duì)于我們來說，相關(guān)方面的研究還有待于進(jìn)一步加強(qiáng)。本論材料和方法菌種蛹蟲草(Cordycepsmilitaris),由東華理工大學(xué)生物系微生物實(shí)驗(yàn)室提供。培養(yǎng)基研究氮源培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1g，VB0.11g,瓊脂20g，蒸餾水定容至1000mL,平均分為四份，分別加入硝酸鉀3.75g，牛肉膏3.75g，硫酸銨3.75g，蛋白胨3.75g，pH自然,121℃滅菌30min。研究碳源培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂2g，VB0.11g,瓊脂20g，蛋白胨15g，蒸餾水定容至1000mL,平均分為四份，分別加入葡萄糖5g，麥芽糖5g，乳糖5g，蔗糖5g，pH自然,121℃滅菌30min。研究溫度培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1g，VB0.11g,瓊脂20g，蛋白胨15g，蒸餾水定容至1000mL,平均分為四份，pH自然，121℃滅菌30min。研究PH培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1g，VB0.11g,瓊脂20g，蛋白胨15g，蒸餾水定容至1000mL,平均分為四份，分別調(diào)節(jié)：pH55PH59PH65PH7.0，121℃滅菌30min。研究礦質(zhì)元素培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，VB0.11g,瓊脂20g，蛋白胨15g，蒸餾水定容至1000mL，平均分為四份，分別放入：礦1?磷酸二氫鉀0.75g和硫酸鎂0.25g，礦2~磷酸二氫鉀0.75g和硫酸鈣0.283g，礦3~磷酸二氫鈉0.66g和硫酸鎂0.25g，pH自然，121℃滅菌30min。試劑和原料蒸餾水，鹽酸，氫氧化鈉儀器設(shè)備和裝置1000ml燒杯，小刀，紗布，玻璃棒，膠頭滴管，牛皮紙，PH試紙，橡皮經(jīng)加熱器，報(bào)紙若干，1000ml錐形瓶，250ml錐形瓶，培養(yǎng)皿57個(gè)電子天平Bs22oZs;恒溫干燥箱0一1型上海英松工礦設(shè)備儀器有限公司；蒸汽滅菌鍋D—1型北京發(fā)恩科貿(mào)有限公司；潔凈工作臺(tái)A工RTEHCus—130L0—u型蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱YPX—DHS一50又65上海市躍正醫(yī)療器械廠實(shí)驗(yàn)方法2．5．1培養(yǎng)基的配置氮源培養(yǎng)基的配置：將預(yù)先準(zhǔn)備好的土豆洗干凈并去皮，在天平上稱取200g，切成薄片放入1000ml燒杯中，并加水至600ml，放于加熱器上加熱，在煮的過程中（要時(shí)刻注意攪拌，人不可離開，以免受熱不均爆沸炸裂燒杯和加熱器發(fā)生意外），待土豆到熟而不爛的程度時(shí)，停止加熱，四層紗布過濾，加入適量水繼續(xù)加熱，在加熱的過程中放入葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1g，VB0.11g，瓊脂20g，待各試劑徹底溶解,加水定容至1000ml，并分裝入四個(gè)250ml的錐形瓶中，分別加入硝酸鉀3.75g，牛肉膏3.75g，硫酸銨3.75g，蛋白胨3.75g，用牛皮紙橡皮經(jīng)包好，準(zhǔn)備殺菌碳源培養(yǎng)基的配置：將預(yù)先準(zhǔn)備好的土豆洗干凈并去皮，在天平上稱取200g，切成薄片放入1000ml燒杯中，并加水至600ml，放于加熱器上加熱，在煮的過程中（要時(shí)刻注意攪拌，人不可離開，以免受熱不均爆沸炸裂燒杯和加熱器發(fā)生意外），待土豆到熟而不爛的程度時(shí)，停止加熱，四層紗布過濾，加入適量水繼續(xù)加熱，在加熱的過程中放入，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂2g，VB0.11g，瓊脂20g，蛋白胨15g，待各試劑徹底溶解,加水定容至1000ml，并分裝入四個(gè)250ml的錐形瓶中，分別加入葡萄糖5g，麥芽糖5g，乳糖5g，蔗糖5g，用牛皮紙橡皮經(jīng)包好，準(zhǔn)備殺菌溫度培養(yǎng)基的配置：將預(yù)先準(zhǔn)備好的土豆洗干凈并去皮，在天平上稱取200g，切成薄片放入1000ml燒杯中，并加水至600ml，放于加熱器上加熱，在煮的過程中（要時(shí)刻注意攪拌，人不可離開，以免受熱不均爆沸炸裂燒杯和加熱器發(fā)生意外），待土豆到熟而不爛的程度時(shí)，停止加熱，四層紗布過濾，加入適量水繼續(xù)加熱，在加熱的過程中放入，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1g，VB0.11g，瓊脂20g，蛋白胨15g，待各試劑徹底溶解，加水定容至1000ml，引流至1000ml錐形瓶中，用牛皮紙橡皮經(jīng)包好，準(zhǔn)備殺菌PH培養(yǎng)基的配置:將預(yù)先準(zhǔn)備好的土豆洗干凈并去皮，在天平上稱取200g，切成薄片放入1000ml燒杯中，并加水至600ml，放于加熱器上加熱，在煮的過程中（要時(shí)刻注意攪拌，人不可離開，以免受熱不均爆沸炸裂燒杯和加熱器發(fā)生意外），待土豆到熟而不爛的程度時(shí)，停止加熱，四層紗布過濾，加入適量水繼續(xù)加熱，在加熱的過程中放入，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1g，VB0.11g，瓊脂20g，蛋白胨15g，待各試劑徹底溶解，加水定容至1000ml，平分為四分倒入250ml錐形瓶中，用鹽酸，氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH；5.5、5.9、6.5、7.0，用牛皮紙橡皮經(jīng)包好，準(zhǔn)備殺菌礦質(zhì)元素培養(yǎng)基的配置：將預(yù)先準(zhǔn)備好的土豆洗干凈并去