中藥制劑的含量測(cè)定

中藥制劑的含量測(cè)定第一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二第一節(jié)定量測(cè)定的目的與意義含量測(cè)定是中藥制劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)測(cè)定對(duì)象：有效成分、指標(biāo)成分、毒性成分目的：判定藥物的優(yōu)劣，保證臨床用藥的安全、有效注意點(diǎn)：與西藥含量測(cè)定的區(qū)別觀點(diǎn)：指標(biāo)成分有效成分單一成分多指標(biāo)成分/有效成分第二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二第一節(jié)定量測(cè)定樣品的處理樣品處理的作用充分釋放被測(cè)成分除雜純化富集濃縮或衍生化使樣品形式、溶劑符合測(cè)定要求第三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二一.

樣品的粉碎樣品粉碎的目的：保證所取樣品均勻且有代表性較快且完全地提取被測(cè)成分粉碎設(shè)備：粉碎機(jī)、研缽、食品處理機(jī)高速勻漿機(jī)或玻璃勻漿器。第四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二二.

樣品的提取冷浸法適用：熱不穩(wěn)定的樣品方法：稱取一定量樣品置于帶塞容器內(nèi)，加入適量溶劑（樣品量的10～50倍），稱重，浸泡提取，浸泡時(shí)間12～24小時(shí)。浸泡后再稱重，補(bǔ)足溶劑。測(cè)定：部分測(cè)定法（等量法）全部測(cè)定法（總量測(cè)定法）優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)、費(fèi)溶劑、不易提取完全第五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二回流提取法適用：熱穩(wěn)定性的成分方法：以單一溶劑或混合溶劑于水浴/電熱套加熱回流提取優(yōu)點(diǎn)：提取效率比冷浸法高，提取時(shí)間短，缺點(diǎn)：提取雜質(zhì)較多不宜用于熱不穩(wěn)定或揮發(fā)性的成分第六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二連續(xù)回流提取法

（索氏提取）適用：熱穩(wěn)定性的成分方法：樣品置索氏提取器中，用遇熱可以揮發(fā)的溶劑進(jìn)行反復(fù)提取優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，所需溶劑少提取雜質(zhì)少，操作簡(jiǎn)便缺點(diǎn)：受熱易分解的成分不宜使用第七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二超聲提取法適用：熱穩(wěn)定性的成分方法：樣品置適當(dāng)容器中，加入提取溶劑，放入超聲振蕩器中提取。

優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，提取速度快，操作簡(jiǎn)便注意：超聲頻率、提取時(shí)間、溫度需考察第八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二超臨界流體提取法（SFE）適用：主要用于熱不穩(wěn)定成分或揮發(fā)性成分，也可熱穩(wěn)定性成分主要用于非極性、弱極性化合物，也可極性化合物——加入極性改性劑（甲醇、氯仿、苯），增加其溶解能力。方法：超臨界流體萃取儀

優(yōu)點(diǎn)：萃取效率高、速度快、準(zhǔn)確度高、選擇性較高、節(jié)省溶劑、易于自動(dòng)化，可避免使用易燃，有毒的有機(jī)溶劑，并能與色譜和光譜等儀器聯(lián)用。

第九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二二.

樣品的分離凈化沉淀法：利用某些試劑與被測(cè)成分或雜質(zhì)生成沉淀，分離沉淀或保留溶液的精制方法蒸餾法：利用某些被測(cè)成分具有揮發(fā)性，采用蒸餾法，收集餾出液進(jìn)行含量測(cè)定；或某些成分經(jīng)蒸餾分解成揮發(fā)性成分，利用分解產(chǎn)物（要求結(jié)構(gòu)明確）進(jìn)行測(cè)定。最常用：水蒸氣蒸餾法適用：揮發(fā)油，小分子生物堿優(yōu)化：蒸餾液中加入一定量無(wú)機(jī)鹽（鹽析作用），使揮發(fā)性成分更完全地蒸餾出來(lái)第十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二液一液萃取法

⒈直接萃取法：利用被測(cè)成分與干擾成分在有機(jī)溶劑（萃取劑）中的溶解度不同，通過多次萃取達(dá)到分離凈化的目的。萃取次數(shù)：實(shí)驗(yàn)考察（回收率符合）溶劑的選擇：根據(jù)被測(cè)組分疏水性的相對(duì)強(qiáng)弱選擇極性適當(dāng)?shù)娜軇┧鄍H的控制：弱酸性成分pH≤Ka-2

弱堿性成分pH≥PKa+2鹽析作用：水相用NaCl飽和，提高提取率。第十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.離子對(duì)萃取法適用：高度離解的有機(jī)酸、有機(jī)堿中藥制劑分析主要用于生物堿（B）離子對(duì)試劑：常為酸性染料（In-）如：溴百里酚藍(lán)（BTB）和溴甲酚綠（BCG）注意：水相pH值的控制離子對(duì)試劑的選擇。

第十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二色譜法最常用：經(jīng)典微柱色譜（固相萃取、液—固萃?。┓椒ǎ簩悠啡芤杭拥窖b有合適固定相的色譜柱中，將被測(cè)成分保留于柱上，洗去雜質(zhì)后，再洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定?；蛘撸菏闺s質(zhì)強(qiáng)烈保留于柱上，直接洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定。適用于：總類成分的含量測(cè)定

進(jìn)展：商品LSE柱作為GC、HPLC的預(yù)處理柱第十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二LSE常用填料：⒈硅膠、氧化鋁等：

傳統(tǒng)吸附劑

不極性吸附作用

氧化鋁：用于生物堿、苷類等堿性、中性成分的測(cè)定，吸附酸性成分硅膠：適合于分離中性或酸性化合物，強(qiáng)烈保留堿性化合物。

⒉鍵合相硅膠：十八烷基鍵合相硅膠（C18，ODS）、C8

——分離脂溶性雜質(zhì)或成分苯基、氰基鍵合相硅膠

——分離水溶性雜質(zhì)或成分

第十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二⒊大孔樹脂：分為極性和非極性型，D101最常用

注意：預(yù)處理；定量時(shí)回收率⒋聚酰胺：

氫鍵吸附——常用于含ph－OH的黃酮類成分⒌硅藻土、纖維素：親水型填料，分配作用流動(dòng)相：與水不混溶的有機(jī)溶劑洗脫：親脂性的成分⒍離子交換樹脂：

萃取樣品液中可離解化合物除去樣品中的離子，防止組分分解第十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二消化法目的：重金屬檢查限量較低，有機(jī)成分往往會(huì)嚴(yán)重干擾測(cè)定，須采用合適的方法破壞這些有機(jī)物常用的破壞方法：濕法消化，干法消化第十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二⒈濕法消化硝酸—高氯酸法適用于血，尿、組織等生物樣品和動(dòng)植物藥制劑的破壞有機(jī)金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的無(wú)機(jī)金屬離子一般呈高價(jià)態(tài)。本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞第十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二硝酸—硫酸法適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞破壞得到的無(wú)機(jī)金屬離子均為高價(jià)態(tài)不能用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞（不適用于與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子）第十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二硫酸—硫酸鹽法常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞，破壞得到的無(wú)機(jī)金屬離子多為低價(jià)態(tài)（三價(jià)砷或銻）。樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。第十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二其它濕法硝酸—硫酸—高氯酸法硫酸—氧化劑法（過氧化氫法、高錳酸鉀）破壞后，金屬呈高價(jià)態(tài)第二十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二注意點(diǎn)：所用儀器一般為硅玻璃或硼玻璃制成的凱氏瓶所用試劑應(yīng)為優(yōu)級(jí)純水應(yīng)為去離子水或高純水按相同條件進(jìn)行空白試驗(yàn)校正操作在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行第二十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二⒉干法消化

將有機(jī)物灼燒灰化達(dá)到分解目的方法：將適量樣品置于瓷坩鍋、鎳坩鍋或鉑坩堝中，常加無(wú)水Na2CO3或輕質(zhì)MgO以助灰化?；靹蚝螅刃』鸺訜?，使樣品完全炭化，然后放入高溫爐中灼燒，使其灰化完全即可。第二十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

適用：濕法不易破壞完全的有機(jī)物；某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。不適用：含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機(jī)藥物的破壞第二十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二注意事項(xiàng)：（1）加熱或灼燒時(shí)，應(yīng)控制溫度在420℃以下，防止金屬化合物的揮發(fā)（2）一定要灰化完全（3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但不要輕易棄去第二十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二第二節(jié)常用定量分析方法

藥物含量測(cè)定是評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要手段常用測(cè)定方法：（Ch.P2000收載較多）化學(xué)分析法光譜法（UV、FD）色譜法（HPLC、GC、TLCS）第二十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二一.化學(xué)分析法包括重量分析和滴定分析適用：主要用于測(cè)定制劑中含量較高的一些成分及含礦物藥制劑中的無(wú)機(jī)成分如：總生物堿類、總酸類、總皂苷及礦物藥特點(diǎn)：儀器簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確但有一定的局限性，靈敏度低，操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，專屬性不高，不適宜微量成分測(cè)定第二十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（一）重量分析法

揮發(fā)法：測(cè)定具有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)的組分含量。如：干燥失重、水分灰分及熾灼殘?jiān)臏y(cè)定第二十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二萃取法：根據(jù)被測(cè)組分在互不相溶的兩相中溶解度的不同，達(dá)到分離的目的。適用：總皂苷、總有機(jī)酸、總生物堿如：冰硼散中冰片的含量測(cè)定地奧心血康膠囊中甾體總皂苷含量測(cè)定、昆明山海棠片中總生物堿的含量測(cè)定甘草浸膏中甘草酸的含量測(cè)定第二十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二沉淀法：將被測(cè)組分定量轉(zhuǎn)化為難溶化合物，測(cè)定其含量。適用于：制劑中純度較高的成分。如：西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜的含量測(cè)定苦參片中苦參總堿的含量測(cè)定復(fù)方元胡注射液總堿的測(cè)定第二十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（二）滴定分析法1.容量分析法的適用性及特點(diǎn)適用：常量組分的分析特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，

一般相對(duì)誤差<0.2%第三十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二酸堿滴定法適用于：測(cè)定中藥制劑中所含有的生物堿、有機(jī)酸、內(nèi)酯類等酸、堿組分的含量。沉淀滴定法分為銀量法、四苯硼鈉法和亞鐵氰化鉀法適用：主要用于測(cè)定生物堿、生物堿的氫鹵酸鹽及含鹵素的其它有機(jī)成分的含量。第三十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二配位滴定法包括EDTA法和硫氰酸銨法適用于測(cè)定鞣質(zhì)、生物堿及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等礦物類制劑的含量。氧化還原滴定法適用于測(cè)定具有氧化還原性的物質(zhì)如：含酚類、糖類及礦物藥Fe、As等成分的中藥制劑。

需嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，且方法的專屬性不高（干擾因素較多）。第三十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二滴定分析法的計(jì)算滴定度T每1mL滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)物質(zhì)的重量（mg/mL）aA+bB=cC+dDT=

CA?MB?b/a注意：滴定劑與被測(cè)藥物的計(jì)量關(guān)系第三十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二百分含量計(jì)算

1．直接滴定法含量%=V—消耗滴定劑的體積；T—滴定度；W—供試品取樣量；濃度校正因數(shù)F=C實(shí)際/C理論

第三十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2．返滴定法（回滴定）

不做空白試驗(yàn)時(shí):含量%=

=C1，V1，F(xiàn)1—先加入的過量滴定劑的濃度、體積、濃度校正因數(shù)；C2，V2，F(xiàn)2—返滴定的滴定劑的濃度、體積、濃度校正因數(shù)；W—供試品取樣量第三十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二做空白試驗(yàn)時(shí)含量%=V0—空白試驗(yàn)時(shí)消耗滴定劑的體積；V—樣品測(cè)定時(shí)消耗滴定劑的體積；T—滴定度；F－濃度校正因數(shù)；W—供試品取樣量第三十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二二.可見－紫外分光光度法特點(diǎn)：靈敏度高（10－7g/mL）準(zhǔn)確度高（相對(duì)誤差2－5％）；應(yīng)用廣泛適用：在可見－紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)原理：朗伯－比爾定律

A=E?l?C=ε?l?C第三十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

吸收系數(shù)是吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)的吸收度。在給定單色光、溶劑和溫度等條件下，吸收系數(shù)是物質(zhì)的特性常數(shù)，表明物質(zhì)對(duì)某一特定波長(zhǎng)光的吸收能力。不同物質(zhì)對(duì)同一波長(zhǎng)的單色光，可有不同的吸收系數(shù).吸收系數(shù)可以作為吸光物質(zhì)定性分析的依據(jù)和定量分析靈敏度的估量。第三十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二吸收系數(shù)因溶液濃度單位不同，有兩種表達(dá)方式：

摩爾吸收系數(shù)ε：指溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時(shí)的吸收度。單位為L(zhǎng)·mol－1·cm－1。物質(zhì)的摩爾吸收系數(shù)一般不超過105數(shù)量級(jí)，通常大于104為強(qiáng)吸收，小于102為弱吸收，

102——

103間的為中強(qiáng)吸收。第三十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二百分吸收系數(shù)：

溶液濃度為1％（即1g/100ml），液層厚度為1cm時(shí)的吸收度，單位為100mL·g－1·cm－1.

百分吸收系數(shù)在藥物定量分析中應(yīng)用廣泛，我國(guó)現(xiàn)行藥典均采用百分吸收系數(shù)，尤其適用于摩爾質(zhì)量不清的待測(cè)組分。第四十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（一）單波長(zhǎng)分光光度法

中藥制劑成分復(fù)雜，不同組分的紫外吸收光譜彼此重疊、干擾測(cè)定，因此在測(cè)定前須經(jīng)適當(dāng)?shù)奶崛。瑑艋虿捎脤俚娘@色反應(yīng)等步驟來(lái)排除干擾，以測(cè)定其中某一總成分或某個(gè)單一組分。第四十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二測(cè)量條件的選擇1.測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：原則“吸收最大，干擾最小”。測(cè)定波長(zhǎng)一般選擇在被測(cè)組分最大吸收波長(zhǎng)處；如果被測(cè)組分有幾個(gè)最大吸收波長(zhǎng)時(shí)，可選擇不易出現(xiàn)干擾吸收、吸收度較大而且峰頂比較平坦的最大吸收波長(zhǎng)。2.溶液吸收度的范圍：應(yīng)控制在0.2～0.7之內(nèi)，通過調(diào)節(jié)溶液的濃度和吸收池的厚度來(lái)達(dá)到。3．空白對(duì)比法第四十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二儀器波長(zhǎng)校正：汞燈或氘燈的特征譜線溶劑要求：測(cè)定波長(zhǎng)≥溶劑的截止波長(zhǎng)；溶劑和比色皿的吸收度規(guī)定：

220－240nm,A≤0.40241－250nm,A≤0.20

251－300nm,A≤0.10

300nm以上,A≤0.05第四十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二定量方法1．標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法按各品種項(xiàng)下要求，在相同條件下分別配制對(duì)照品溶液和供試品溶液，在規(guī)定波長(zhǎng)處，分別測(cè)其吸收度，計(jì)算供試品溶液中被測(cè)組分的濃度。

對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分的標(biāo)示量的100±10％標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法應(yīng)用的前提是方法學(xué)考察時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)過原點(diǎn)。第四十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.吸收系數(shù)法按各品種項(xiàng)下要求，根據(jù)A＝εlC，若l和吸光系數(shù)ε已知，即可根據(jù)供試品溶液測(cè)得的A值求出被測(cè)組分的濃度。EX、ES分別為供試品和對(duì)照品溶液的百分吸光系數(shù)注意：儀器和操作條件的控制第四十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二3．標(biāo)準(zhǔn)曲線法

配制一系列不同濃度的對(duì)照品溶液（n>5），分別測(cè)定吸光度，繪制A-C曲線或求出回歸直線方程（r≥0.999）。在相同條件下測(cè)定供試品溶液的吸光度，求得供試品中被測(cè)成分的濃度或含量。第四十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（二）計(jì)算分光光度法

適用：多組分的含量測(cè)定原理：吸光度具有加和性方法：雙波長(zhǎng)法（等吸收點(diǎn)法和系數(shù)倍率法）三波長(zhǎng)法導(dǎo)數(shù)光譜法第四十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（三）差示光譜法基本原理1.能提供一個(gè)合適的參比溶液2.在兩種不同的介質(zhì)環(huán)境或?qū)嶒?yàn)條件下，被測(cè)組分有不同的特征光譜（即不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)），而賦形劑或其它共存組分的光譜不變。因而可消除它們的干擾。

第四十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二三.薄層掃描法

薄層吸收掃描法適用于:在可見、紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)，及通過色譜前或色譜后衍生成上述化合物的樣品組分分:反射法和透射法，薄層掃描中大多采用反射法

第四十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二定量依據(jù)

Kubelka-Munk理論及曲線

以斑點(diǎn)的相對(duì)反射率或相對(duì)透光率計(jì)算薄層色譜斑點(diǎn)的吸光度，說(shuō)明固定相的散射參數(shù)SX對(duì)斑點(diǎn)中物質(zhì)的濃度與吸光度間關(guān)系的影響，獲得不同散射參數(shù)SX時(shí)斑點(diǎn)的A-KX理論曲線，即Kubelka-Munk曲線。不符合L－B定律：薄層板存在明顯的散射現(xiàn)象第五十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二Kubelka-Munk曲線說(shuō)明了薄層色譜斑點(diǎn)的吸光度與其濃度間呈非線性關(guān)系，解釋了薄層掃描法中標(biāo)準(zhǔn)曲線的彎曲問題，第五十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.薄層熒光掃描法適用于：本身具有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測(cè)定特點(diǎn)：專屬性強(qiáng)，靈敏度比吸收法高1～3個(gè)數(shù)量級(jí)，但適用范圍較窄。定量原理：當(dāng)溶液濃度很稀時(shí)（abc≤0.05）F=K?C第五十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二高效液相色譜法高效液相色譜法——是在經(jīng)典的液相柱色譜法的基礎(chǔ)上引入了氣相色譜的理論和技術(shù)，采用高壓泵，高效固定相以及高靈敏度在線檢測(cè)器發(fā)展而成的分離分析方法。第五十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二分析方法正相分配色譜法常用于分離強(qiáng)極性化合物。常用極性鍵合相為氨基鍵合相（強(qiáng)極性）、氰基鍵合相（中強(qiáng)極性），流動(dòng)相常選用低極性溶劑如烴類，加入適量極性溶劑如醇類等調(diào)節(jié)洗脫液。梯度洗脫時(shí)，通常逐漸增大洗脫劑中極性溶劑的比例，故樣品中極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。第五十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

氰基鍵合相的分離選擇性與硅膠相似，但極性比硅膠弱。許多能在硅膠上分離的樣品，可以在氰基鍵合相上完成。氰基鍵合相對(duì)雙鍵異構(gòu)體有很好的分離選擇性。

氨基鍵合相是分析糖類最常用的固定相，常用乙腈-水為流動(dòng)相。第五十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二反相分配色譜法

適合于分離弱極性和中等極性的化合物。極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。常用的固定相為十八烷基硅膠鍵合相C18(ODS)，其次是辛基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相采用甲醇－水或乙腈－水。有時(shí)也可加入適當(dāng)?shù)乃峄驂A來(lái)控制流動(dòng)相的pH值，以防止出現(xiàn)不對(duì)稱色譜峰。反相色譜常采用梯度洗脫，使每個(gè)組分都在適宜條件下獲得分離第五十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二離子對(duì)色譜（IPC）

在流動(dòng)相中加入溶質(zhì)分子電荷相反的離子對(duì)試劑，來(lái)分離離子型或可離子化的化合物的方法。離子對(duì)色譜法分為正相離子對(duì)色譜和反相離子對(duì)色譜法，最常用的是反相離子對(duì)色譜。它使用反相色譜中常用的固定相（ODS），能同時(shí)分離離子型化合物和中性化合物。第五十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二HPLC條件的選擇固定相選擇一般的液相色譜適合的相對(duì)分子質(zhì)量范圍200-2000，相對(duì)分子質(zhì)量大于2000的則用空間排阻色譜較佳。樣品為酸、堿化合物，則采用離子交換色譜；異構(gòu)體采用液-固吸附色譜；樣品為脂肪族或芳香族，可采用液-液分配色譜或液-固吸附色譜；同系物不同官能團(tuán)及強(qiáng)氫鍵的樣品可用液-液分配色譜。第五十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二正相色譜——主要用于分離極性化合物，常用氫基、氰基鍵合固定相。反相色譜——應(yīng)用最為廣泛，適于分析非極性和中等極性的化合物最常用的固定相是十八烷基鍵合固定相，第五十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二流動(dòng)相選擇

根據(jù)不同類型的色譜法選擇流動(dòng)相正相分配色譜流動(dòng)相是以烴類（如己烷、烷等）為主，加入少量極性溶劑（如氯仿、甲醇等）改變流動(dòng)相的極性和組成，分離異構(gòu)體、極性化合物等。反相分配色譜流動(dòng)相是以水為主，再加入能與水混溶的有機(jī)溶劑，通過改變有機(jī)溶劑的組成，調(diào)整組分的容量因子，改善分離效率，甲醇是最常用的有機(jī)溶劑，其次是乙腈和四氫呋喃。第六十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二在反相鍵合相色譜中，用水-甲醇、水-乙腈溶液為流動(dòng)相，可分離極性物質(zhì)。用水和無(wú)機(jī)鹽的緩沖溶液作流動(dòng)相，可以分離易離解的物質(zhì)，如有機(jī)酸、有機(jī)堿、酚類等。第六十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二離子交換色譜

流動(dòng)相通常是鹽類的緩沖溶液。通過改變流動(dòng)相的PH、緩沖溶液的類型、離子強(qiáng)度、以及加入有機(jī)溶劑、配合劑都會(huì)改變分離選擇性，提高分離效果?？臻g排阻色譜流動(dòng)相的選擇不是為了提高色譜柱的選擇性，而是為了使樣品更好地溶解，或是為了減少流動(dòng)相黏度，提高柱效。選用低黏度的流動(dòng)相，其沸點(diǎn)要比柱溫高25-50℃，且應(yīng)與選用的固定相和檢測(cè)器相配。

第六十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二洗脫技術(shù)根據(jù)分離度的要求，在色譜分離過程中樣品組分的k值范圍應(yīng)控制在1-10之間。如果樣品組分較少、性質(zhì)差別不大，一般采用等度洗脫（溶劑組成在一分析周期里保持恒定）可以使所有組分的k值都處于這個(gè)范圍內(nèi)。對(duì)于組分?jǐn)?shù)目較多、性質(zhì)相差較大的復(fù)雜混合物，為使各組分均得到滿意的分離，必須采用梯度洗脫技術(shù)，即在一個(gè)分析周期中，程序控制流動(dòng)相的組成（如溶劑的極性、離子強(qiáng)度、PH值等）改變，使每個(gè)組分都在適宜的條件下獲得分離。第六十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

梯度洗脫可以采用二元混合溶劑或多元混合溶劑，即所謂二元梯度和多元梯度。梯度洗脫程序一般是以等強(qiáng)度洗脫的結(jié)果為基礎(chǔ)，通過實(shí)驗(yàn)加以確定的。對(duì)極性固定相，梯度溶劑范圍從正己烷到氯代烷；對(duì)非極性固定相，一般采用水-乙腈、水-甲醇線性梯度。梯度洗脫特別適用于極性范圍很寬的混合物分離。優(yōu)點(diǎn)①縮短總分析時(shí)間，提高分離度，是使k值相差103～104的樣品組分，在合理分析速度下得到適當(dāng)分離度的唯一方法。②改善峰形，提高峰的對(duì)稱性，減少峰的區(qū)域?qū)挾?，使微量組分易被檢出，降低最小檢出量，提高檢測(cè)靈敏度。第六十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二檢測(cè)器的選擇針對(duì)樣品的性質(zhì)不同選擇適合的檢測(cè)器。紫外檢測(cè)器高靈敏度，但只能用于有可見紫外吸收的化合物。主要用于芳烴與稠環(huán)芳烴、芳香基取代物、芳香氨基酸、核酸、甾體激素、羧基與羰基化合物等。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器用于揮發(fā)性低于流動(dòng)相，紫外無(wú)吸收或呈末端吸收的樣品組分，但對(duì)于有紫外吸收的組分的檢測(cè)靈敏度較低。主要用于糖類、高分子化合物、高級(jí)脂肪酸及甾體類等幾十類化合物。第六十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二熒光檢測(cè)器適用于能產(chǎn)生熒光或其衍生物能發(fā)熒光的物質(zhì)。主要用于氨基酸、多環(huán)芳烴、維生素、甾體化合物及酶等的檢測(cè)。電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器對(duì)于電活性物質(zhì)來(lái)說(shuō)是一類較好的選擇性檢測(cè)器。主要用于有機(jī)胺類化合物。第六十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二前處理流動(dòng)相脫氣：流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，目的是除去其中溶解的氣體。。常用的脫氣方法有：超聲波振動(dòng)脫氣、抽真空脫氣、加熱回流脫氣、吹氦脫氣、真空在線脫氣。超聲波振動(dòng)脫氣，將欲脫氣的流動(dòng)相置放于超聲波提取器中，用超聲波振蕩10-15min，此法的脫氣簡(jiǎn)單，最常用。過膜：流動(dòng)相及供試液須經(jīng)過0.45um或0.2um濾膜過濾第六十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二VanDeemter方程式在HPLC中的表達(dá)式為：H=A+C?UHPLC可以近似地認(rèn)為流動(dòng)相的流速與板高成直線關(guān)系，流速增大，板高增加，色譜柱柱效降低。為了兼顧柱效與分析速度，一般都盡可能地采用較低流速。內(nèi)徑4.6mm柱，流量多采用1mL/min。第六十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二色譜適用性試驗(yàn)色譜適用性試驗(yàn)可以用來(lái)評(píng)價(jià)高效液相色譜法色譜條件。按各品種項(xiàng)下要求對(duì)儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子。第六十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二1.色譜柱的理論板數(shù)（n）在選定的狀態(tài)下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間tR（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)）和半峰高寬（Wh/2），按n＝5.54（tR/Wh/2）2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。如果測(cè)得的理論板數(shù)低于此樣品規(guī)定的最小理論塔板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長(zhǎng)、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等），使理論塔板數(shù)達(dá)到要求。第七十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.分離度定量分析時(shí)，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。分離度（R）的計(jì)算公式為：

R＝2（tR2－tR1）/W1+W2

tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間；tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間；W1、

W2為此相鄰兩峰的峰寬。分離度應(yīng)大于1.5。第七十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二3.重復(fù)性

樣品的對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0％。也可按照各樣品校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配置80％、100％、120％的對(duì)照溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0％。第七十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二4.拖尾因子為保證測(cè)量精度，特別當(dāng)采用峰高法測(cè)量時(shí)，應(yīng)檢查待測(cè)峰的拖尾因子（T）是否符合規(guī)定，或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計(jì)算公式為：

T＝W0.05h/2d1

W0.05h為0.05峰高處的峰寬d1為峰極大至峰前沿之間的距離。除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.95～1.05之間。第七十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二定量分析方法

液相色譜法的定量方法，常用外標(biāo)法及內(nèi)標(biāo)法，也可用內(nèi)加法、校正因子法定量。1.外標(biāo)法以試樣的對(duì)照品作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)比求算試樣含量的方法。外標(biāo)法可分為外標(biāo)工作曲線法、外標(biāo)一點(diǎn)法及外標(biāo)二點(diǎn)法等，前二種方法常用。優(yōu)點(diǎn)是不需要知道校正因子，只要被測(cè)組分出峰、無(wú)干擾、保留時(shí)間適宜，即可進(jìn)行定量分析。缺點(diǎn)，進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確，否則定量誤差大。在HPLC中，一般用六通閥定量環(huán)進(jìn)樣，進(jìn)樣量誤差相對(duì)較小，因此外標(biāo)法是HPLC常用的定量分析方法之一。第七十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二外標(biāo)工作曲線法（簡(jiǎn)稱工作曲線法）用試樣的對(duì)照品，配制一系列濃度不同的對(duì)照品溶液，準(zhǔn)確進(jìn)樣，測(cè)量峰面積或峰高，以對(duì)照品溶液的濃度或進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積或峰高為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。相同條件下，注入供試品溶液，利用此曲線或回歸方程A=a+bC(計(jì)算樣品溶液的濃度）。第七十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（2）外標(biāo)一點(diǎn)法

只有在工作曲線通過原點(diǎn)，即截距為零時(shí)，才可用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行定量分析，否則需用外標(biāo)二點(diǎn)法定量。用一種濃度的對(duì)照品溶液對(duì)比，求算同一物質(zhì)的樣品（色譜組分）含量的方法，稱為外標(biāo)一點(diǎn)法。第七十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二Ci與

Ai分別為樣品中待測(cè)組分濃度和峰面積；Cs與As分別為對(duì)照品溶液濃度與峰面積。

峰形為正常峰時(shí)，常用隨行外標(biāo)一點(diǎn)法即每次測(cè)定都同時(shí)進(jìn)對(duì)照品與樣品，并且濃度接近，以減少因儀器不穩(wěn)定帶來(lái)的誤差。第七十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.內(nèi)標(biāo)法將一定量的內(nèi)標(biāo)物加入到樣品中，再經(jīng)色譜分析，根據(jù)樣品的重量和內(nèi)標(biāo)物重量以及待測(cè)組分峰面積和內(nèi)標(biāo)物的峰面積，就可求出待測(cè)組分的含量。內(nèi)標(biāo)法可分為工作曲線法、內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法（內(nèi)標(biāo)對(duì)比法）、內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法及校正因子法。所用的內(nèi)標(biāo)物的要求同氣相色譜。

第七十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二內(nèi)標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)：可抵消儀器穩(wěn)定性差，進(jìn)樣量不夠準(zhǔn)確等原因帶來(lái)的定量分析誤差。缺點(diǎn)：樣品配置比較麻煩，不易尋找內(nèi)標(biāo)物。第七十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（1）工作曲線法內(nèi)標(biāo)工作曲線法與外標(biāo)法相同，只在各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液中，加入相同量的內(nèi)標(biāo)物，進(jìn)樣。分別測(cè)量組分i與內(nèi)標(biāo)物s的峰面積A（或峰高），以其峰面積比Ai/AS濃度為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品溶液的Ci（標(biāo)準(zhǔn)）繪制工作曲線，計(jì)算回歸方程式Ci=bAi/As+a及相關(guān)系數(shù)。b：斜率；a：截距Ai：待測(cè)組分的峰面積或峰高；AS：內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高。第八十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（2）內(nèi)標(biāo)對(duì)比法（內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法）內(nèi)標(biāo)對(duì)比法不需知道校正因子又具有內(nèi)標(biāo)法的定量準(zhǔn)確度與進(jìn)樣量無(wú)關(guān)的特點(diǎn)。方法簡(jiǎn)便實(shí)用。在藥物分析中分析結(jié)果（含量）常用標(biāo)示量%表示mi為藥物對(duì)照品的量，m是取樣量,W為平均片重（或丸重等）第八十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二3.內(nèi)標(biāo)法加校正因子法

用此法需要已知校正因子，而高效液相色譜法的校正因子很難由手冊(cè)中查到，常常需要測(cè)定。測(cè)定校正因子需配制含有內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同實(shí)驗(yàn)條件條件下進(jìn)樣5—10次，分別測(cè)定峰面積，計(jì)算各組分的相對(duì)重量校正因子。第八十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二mi與ms分別為待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的量；Ai與As分別為它們的峰面積。自測(cè)的相對(duì)重量校正因子，只能在此實(shí)驗(yàn)條件下使用，而無(wú)通用性，引用時(shí)需注意。

第八十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二內(nèi)標(biāo)法的計(jì)算公式：Cs為內(nèi)標(biāo)物的濃度，f為較正因子Ai、As分別為待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積。第八十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二氣相色譜法特點(diǎn)：高靈敏度、高選擇性、高柱效、快速、用量少適用：具有揮發(fā)性且熱穩(wěn)定性好的物質(zhì)一般色譜圖于30分鐘內(nèi)記錄完畢第八十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二色譜條件的選擇主要依據(jù):

分離度方程 速率理論第八十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二色譜柱的選擇：固定相、柱長(zhǎng)柱溫的選擇：載氣的選擇：峰擴(kuò)張、柱壓降對(duì)檢測(cè)器的靈敏度進(jìn)樣量的選擇：盡量少氣化溫度的選擇：樣品的揮發(fā)性、沸點(diǎn)及進(jìn)樣量檢測(cè)室溫度第八十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同HPLC法定量方法由于GC一般手動(dòng)進(jìn)樣，且進(jìn)樣量?。?.1-1μl），故GC大多采用內(nèi)標(biāo)法定量第八十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二1.歸一化法

1）前提：樣品中所有組分都能流出柱且對(duì)檢測(cè)器都有響應(yīng)。

2）計(jì)算公式:

miAifi′ pi=×100%=×100%mA1f1′

+A2f2′

+…+Anfn′第八十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二如果組分為同系物fi′近似相同，則可簡(jiǎn)化為

Ai Pi=×100% A1+A2+…+An第九十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二優(yōu)點(diǎn)：a.簡(jiǎn)便，結(jié)果與進(jìn)樣量無(wú)關(guān),操作條件影響不大。b.比其它方法易行。宜于進(jìn)樣量少不易測(cè)準(zhǔn)的液體樣品。c.當(dāng)分析同系物時(shí)可不求f而直接把面積歸一化。第九十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二缺點(diǎn)：a.含高沸點(diǎn)或不出峰的組分b.檢測(cè)器上無(wú)信號(hào)的組分c.無(wú)法求得f的組分（未定性或峰重疊）第九十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2、內(nèi)標(biāo)法前提：有適合的內(nèi)標(biāo)物對(duì)內(nèi)標(biāo)物的要求：

a.樣品中不含此成分

b.能單獨(dú)出峰且能與組分完全分開

c.峰位置盡量靠近組分

d.加入的重量接近于組分的量第九十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二公式

fi mi/Ai fi′＝＝

fsms/As

mi Ai =fi′× ms Asmi mi msAimspi=×100%=·×100%=fi′·×100%m msm As

m

一般來(lái)說(shuō)，TCD標(biāo)準(zhǔn)物用苯，F(xiàn)ID用正庚烷。第九十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二操作過程

a.先配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，加一定量的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

b.未知濃度的樣品加同量?jī)?nèi)標(biāo)待測(cè)溶液樣品色譜圖第九十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二(Ci%)樣品(Aifi′/Asfs′)樣(Ai/As)樣＝＝(Ci%)標(biāo)準(zhǔn)(Aifi′/Asfs′)標(biāo)(Ai/As)標(biāo)

(Ai/As)樣(Ci%)樣品＝×(Ci%)標(biāo)準(zhǔn)

(Ai/As)標(biāo)第九十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二優(yōu)點(diǎn)：

a.定量準(zhǔn)確

b.操作條件影響不大

c.沒有歸一化的缺點(diǎn)缺點(diǎn)：每次測(cè)定都要精確配制含內(nèi)標(biāo)的樣品，另內(nèi)標(biāo)的選擇也較難。第九十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二3、外標(biāo)法

即以待測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照物,與對(duì)照物對(duì)比求算待測(cè)組分含量的方法.優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、計(jì)算方便缺點(diǎn)：需嚴(yán)格控制進(jìn)樣體積，操作條件應(yīng)穩(wěn)定第九十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二單點(diǎn)校正

前提：曲線過原點(diǎn) 配一與被測(cè)組分含量接近的標(biāo)樣Ps％，進(jìn)樣量同分析樣品。

Ai Pi％＝·Ps％=Ki

·Ai AsKi：標(biāo)樣單位峰面積所代表的百分含量不過原點(diǎn)，雙點(diǎn)校正。第九十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二熒光分析法

特點(diǎn)：靈敏度高，選擇性好。（熒光法靈敏度可達(dá)10?10g/ml~10?12g/ml，而一般紫外?可見分光光度法的靈敏度約為10?7g/ml。）適用：成分本身具有熒光或經(jīng)衍生化能轉(zhuǎn)變?yōu)闊晒饣衔锵∪芤褐袦y(cè)定產(chǎn)生熒光必須具備兩個(gè)條件：第一是物質(zhì)分子必須有強(qiáng)的紫外?可見吸收；第二是必須具備較高的熒光效率。第一百頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二原理：若濃度C很小，當(dāng)ECL≤0.05時(shí)，則：

F=2.3K’фfI0ECL=KC

在低濃度時(shí)，溶液的熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系，此系熒光法定量分析的依據(jù)。第一百零一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二定量分析方法：1．標(biāo)準(zhǔn)曲線法熒光分析一般采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法（校正曲線法），在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，常采用標(biāo)準(zhǔn)溶液系列中某一溶液作為基準(zhǔn)，先將空白溶液的熒光強(qiáng)度調(diào)至0，再將該標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度調(diào)至100或50，然后測(cè)定系列中其它各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度F，再繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，即F-C曲線。第一百零二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

在實(shí)際工作中，當(dāng)儀器調(diào)零之后，先測(cè)定空白溶液的熒光強(qiáng)度F0，然后測(cè)定各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度F，得（F－F0）就是標(biāo)準(zhǔn)溶液本身的熒光強(qiáng)度。通過這樣測(cè)定，再繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，即（F－F0）-C曲線。為了使不同時(shí)間繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線能前后一致，每次繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)均采用同一標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正。第一百零三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

如果試樣溶液在紫外光照射下不很穩(wěn)定，則須改用另一種性質(zhì)穩(wěn)定，而且所發(fā)生的熒光和試樣溶液的熒光相近似的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為基準(zhǔn)。如測(cè)定維生素B1時(shí)，采用硫酸奎寧的0.05mol/LH2SO4溶液作為基準(zhǔn)(適用于藍(lán)色熒光)；若為黃綠色熒光可用熒光素鈉的水溶液；紅色熒光可用羅丹明B水溶液為基準(zhǔn)。第一百零四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

2．比例法

若標(biāo)準(zhǔn)曲線通過零點(diǎn)，可用比例法進(jìn)行測(cè)定。配制一標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其濃度在線性范圍內(nèi)，測(cè)定熒光強(qiáng)度FS，然后在同樣條件下測(cè)定試樣溶液的熒光強(qiáng)度FX。由標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度CS和兩種溶液的熒光強(qiáng)度比，求得試樣中熒光物質(zhì)的濃度CX或含量。在空白溶液的熒光強(qiáng)度不為零時(shí)，按下式計(jì)算。

第一百零五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二3．解線性方程法多組分混合物的熒光分析也可以象吸收分光光度法一樣利用熒光強(qiáng)度的加和性質(zhì)，采用解線性方程組的方法、雙波長(zhǎng)及多波長(zhǎng)等方法從混合物中不經(jīng)分離即可測(cè)得被測(cè)組分的含量。第一百零六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二第四節(jié)含量測(cè)定方法的效能指標(biāo)常用的效能評(píng)價(jià)指標(biāo)有：準(zhǔn)確度、精密度、選擇性、檢測(cè)限、定量限、線性與范圍、耐用性等。

分析方法的效能指標(biāo)可以作為對(duì)分析方法的評(píng)估尺度，也可作為建立新的分析方法的實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。第一百零七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二一.準(zhǔn)確度考察準(zhǔn)確度常用加樣回收率評(píng)價(jià)中藥制劑含量測(cè)定的回收率一般要求在95%～105%(n≥5)，RSD一般應(yīng)在3%以內(nèi)復(fù)雜操作樣品，可要求略低，90%～110%生物樣品，一般控制回收率在85%～115%（樣品藥濃≥200μg/L）80%～120%（樣品藥濃<200μg/L）RSD爭(zhēng)取達(dá)到5%以內(nèi)，但不超過10%。第一百零八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二二、精密度重復(fù)性：在相同條件下，由一個(gè)分析人員同一次測(cè)定所得結(jié)果的精密度重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)第一百零九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二三、選擇性

選擇性是指在樣品中有其他組分共存時(shí)，該分析方法對(duì)被測(cè)物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力。常用陰性對(duì)照法來(lái)考察分析方法的選擇性第一百一十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二四、線性與范圍

分析方法的線性是指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度成正比關(guān)系的程度。線性范圍是指能達(dá)到一定精密度，準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間線性與范圍可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)確定。一般r≥0.999

薄層色譜掃描定量中r≥0.995第一百一十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二五、耐用性

耐用性是指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。第一百一十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二三、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目1.鑒別試驗(yàn)；2.雜質(zhì)定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測(cè)定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定；5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測(cè)試方法。

第一百一十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性四、驗(yàn)證內(nèi)容

第一百一十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

加樣回收試驗(yàn)已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M第一百一十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

（一）準(zhǔn)確度（accuracy）準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。

測(cè)定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。

第一百一十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

回收試驗(yàn)空白+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M第一百一十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

數(shù)據(jù)要求規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。第一百一十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二1.含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度

原料藥可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。

第一百一十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

制劑可用含己知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定，即采用在空白輔料中加入原料藥對(duì)照品的方法。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，或與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。第一百二十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在95～105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時(shí)，可要求在90～110%范圍內(nèi)。RSD一般在3%以內(nèi)。第一百二十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2．雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度

可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。第一百二十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

（二）精密度（precision）精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。第一百二十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二偏差（d）：測(cè)量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD或S）第一百二十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD），也稱變異系數(shù)（CV）第一百二十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

1.重復(fù)性在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)。第一百二十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

2.中間精密度同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備第一百二十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

3.重現(xiàn)性不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如建立藥典分析方法時(shí)通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗(yàn)的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。第一百二十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

（三）檢測(cè)限（limitofdetection，LOD）

檢測(cè)限系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。是限度試驗(yàn)參數(shù)，無(wú)需定量測(cè)定。常用%、ppm、ppb表示。第一百二十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二1．非儀器分析目視法

用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。

第一百三十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

2．信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。第一百三十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二3．?dāng)?shù)據(jù)要求應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過程和檢測(cè)限結(jié)果。第一百三十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（四）定量限（1imitofquantitation，LOQ）

指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。第一百三十三頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可用儀器所測(cè)空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定。

第一百三十四頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

（五）專屬性（specificity）指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力。是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾程度的度量。第一百三十五頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

（六）線性

在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。第一百三十六頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二UVHPLCGC第一百三十七頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（七）范圍

指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。原料藥、制劑80％－120％制劑含量均勻度檢查70％－130％溶出度、溶出量限量的±20％第一百三十八頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（八）耐用性指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。（九）應(yīng)用

1.鑒別試驗(yàn)除專屬性、耐用性外，其它都不要求。第一百三十九頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

2.雜質(zhì)的限量檢查除專屬性、檢測(cè)限、耐用性外，其它都不要求。雜質(zhì)的定量測(cè)定除檢測(cè)限外，其它都要求。3.含量測(cè)定及溶出量測(cè)定除檢測(cè)限、定量限外，其它都要求。第一百四十頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二（十）各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求

1.容量分析法：用原料藥精制品(含量>99.5％)或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，相?duì)標(biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于0.2％；進(jìn)行回收率試驗(yàn)。回收率一般在99.7～100.3％之間。

第一百四十一頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.UV法：用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測(cè)定，其RSD一般不大于1％。制劑的測(cè)定，回收率一般應(yīng)在98％～102％之間。第一百四十二頁(yè)，共一百六十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

線性：吸光度A一般在0.2～0.7，濃度點(diǎn)n＝5。用濃度