實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌革蘭氏染色

實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌革蘭氏染色第一頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二目的要求a.掌握細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備方法和普通染色的步驟和關(guān)鍵點(diǎn)b.掌握革蘭氏染色法的步驟和關(guān)鍵點(diǎn)c.識(shí)別細(xì)菌的革蘭氏染色結(jié)果并畫(huà)圖d.學(xué)習(xí)無(wú)菌操作技術(shù)

第二頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二材料用具顯微鏡，擦鏡紙，紗布革蘭氏染液香柏油,自來(lái)水,95%酒精;載玻片,插鏡紙,接種環(huán),鑷子,酒精燈;金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌,未知菌12小時(shí)的液體培養(yǎng)液大腸桿菌和酵母菌平板第三頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)步驟1.涂片左手持菌液試管,右手持接種環(huán)在火焰中灼燒,冷卻后從試管中去菌液一滴,在潔凈載玻片上做一涂膜;從固體斜面或平板上取菌時(shí),用無(wú)菌接種環(huán)取少量菌體,涂抹均勻于玻片上預(yù)先滴有的一滴自來(lái)水中;第四頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)步驟2.干燥在空氣中自然干燥或在火焰快速通過(guò)干燥(與熱固定同步進(jìn)行).

3.熱固定用鑷子夾住涂片一端,

在火焰上連續(xù)通過(guò)幾次;以載玻片在手背上試感覺(jué)不燙為宜.第五頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)步驟4.染色在固定的標(biāo)本上加結(jié)晶紫染液1-2滴,染色1min,輕輕滴加水洗;吸干,加半滴水,蓋上蓋玻片,滴上半滴鏡油油鏡檢。

(到此實(shí)際上即為細(xì)菌普通染色)揭去蓋玻片,吸干水,滴加1-2滴革氏碘液媒染1min,輕輕水洗,吸干。第六頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)步驟滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脫色),輕輕搖動(dòng)玻片至液滴無(wú)色,不要過(guò)分脫色(約30秒),立即輕輕滴加水洗;吸干。滴加蕃紅染液復(fù)染3min,輕輕滴加水洗;吸干載玻片背面及標(biāo)本周?chē)疂n,滴上半滴水，蓋上蓋玻片,油鏡鏡檢;第七頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)步驟5.鏡檢

注意標(biāo)本中細(xì)菌的形態(tài),

大小,排列,和顏色.革蘭氏陽(yáng)性菌為紫色;革蘭氏陰性菌為紅色;第八頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二金黃色葡萄球菌(24hrs)染色結(jié)果第九頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二金黃色葡萄球菌(48hrs)染色結(jié)果第十頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二金黃色葡萄球菌(72hrs)染色結(jié)果第十一頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二大腸桿菌(24hrs)染色結(jié)果第十二頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二討論記錄并描繪革蘭氏染色結(jié)果,注意形狀,排列和顏色,看看與理論上是否相同;如不同,分析原因;

分析影響革蘭氏染色結(jié)果的因素;

酵母菌能進(jìn)行染色嗎?結(jié)果如何?為什么?第十三頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二注意事項(xiàng)干凈的載玻片,合適取菌量,菌齡,熱固定,每一步水洗要徹底而且吸干,和酒精脫色程度是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵禁止把染液倒入水池中,回收到廢液桶中第十四頁(yè)，共十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)三結(jié)束，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)四肉湯蛋白胨培養(yǎng)基的配制（按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)61頁(yè)配方瓊脂為2％）。400ml/組置500ml三角燒瓶中用封口膜封好瓶口，用記號(hào)筆在瓶上標(biāo)明培養(yǎng)基名稱(chēng)、組號(hào)（如周次－座次，1－3－2）、配制時(shí)間，高壓滅菌。包平皿10個(gè)/包/組、試管4支/包/組、1ml槍頭2個(gè)/包/組、5ml槍頭1個(gè)/包/組、涂布器1個(gè)/包/組，高壓滅菌。洗平