農(nóng)藥殘留的速測技

農(nóng)藥殘留的速測技術(shù)整理ppt第一頁，共二十頁。農(nóng)藥殘留是指農(nóng)藥使用后殘存于環(huán)境、生物體和食品中的農(nóng)藥母體衍生物、代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。造成蔬菜農(nóng)藥殘留量超標(biāo)的主要是一些國家禁止在蔬菜生產(chǎn)中使用的有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，如甲胺磷、氧化樂果、甲拌磷、對硫磷、甲基對硫磷等。食用含有大量高毒、劇毒農(nóng)藥殘留引起的食物會導(dǎo)致人、畜急性中毒事故。長期食用農(nóng)藥殘留超標(biāo)的農(nóng)副產(chǎn)品，雖然不會導(dǎo)致急性中毒，但可能引起人和動物的慢性中毒，導(dǎo)致疾病的發(fā)生，誘發(fā)癌癥，甚至影響到下一代。整理ppt第二頁，共二十頁。農(nóng)殘檢測必要性隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化的開展，農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)越來越依賴于農(nóng)藥、抗生素和激素等外源物質(zhì)。我國農(nóng)藥在糧食、蔬菜、水果、茶葉上的用量居高不下，而這些物質(zhì)的不合理使用必將導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)，影響消費(fèi)者食用平安，嚴(yán)重時(shí)會造成消費(fèi)者致病、發(fā)育不正常，甚至直接導(dǎo)致中毒死亡。農(nóng)藥殘留超標(biāo)也會影響農(nóng)產(chǎn)品的貿(mào)易。整理ppt第三頁，共二十頁。1、農(nóng)藥殘留速測卡

整理ppt第四頁，共二十頁。檢測原理膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯〔紅色〕水解為乙酸與靛酚〔藍(lán)色〕，有機(jī)磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。整理ppt第五頁，共二十頁。外表測定法〔粗篩法〕1.擦去蔬菜外表泥土，滴2-3滴洗脫液在蔬菜外表，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。2.取一片農(nóng)藥殘留檢測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。3.放置10min以上進(jìn)行預(yù)反響，預(yù)反響后的藥片外表必須保持濕潤。4.將農(nóng)藥殘留檢測卡對折，用手捏3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反響。5.每批測定應(yīng)設(shè)一個(gè)純潔水的空白對照卡。整理ppt第六頁，共二十頁。整體農(nóng)藥殘留檢測法1.選取有代表性的蔬菜樣品，擦去外表泥土，剪成1cm左右見方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，參加10mL純潔水，震搖50次，靜置2min以上。2.取一片農(nóng)藥殘留檢測卡，用白色藥片沾取提取液，放置10min以上進(jìn)行預(yù)反響，預(yù)反響后的藥片外表必須保持濕潤。3.將農(nóng)藥殘留檢測卡對折，用手捏3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反響。4.每批農(nóng)藥殘留檢測應(yīng)設(shè)一個(gè)純潔水的空白對照卡。整理ppt第七頁，共二十頁。農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果判定：與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽性結(jié)果〔不合格〕，不變藍(lán)為強(qiáng)陽性結(jié)果，說明農(nóng)藥殘留量較高，顯淺藍(lán)色為弱陽性結(jié)果，說明農(nóng)藥殘留量相對較低。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對照卡顏色相同，為陰性結(jié)果〔合格〕。對陽性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。保存條件和有效期：1、農(nóng)藥殘留檢測卡開封前需4℃冷藏保存，保質(zhì)期12個(gè)月。2、農(nóng)藥殘留檢測卡開封后可短時(shí)間4℃冷藏保存，應(yīng)盡快用整理ppt第八頁，共二十頁。檢測下限農(nóng)藥殘留速測卡對幾種常用農(nóng)藥的最低檢測限如下：甲胺磷1.7乙酰甲胺磷3.5水胺硫磷3.1對硫磷1.7樂果1.3久效磷2.5馬拉硫磷2.0敵敵畏0.3敵百蟲0.3呋喃丹0.5西維因2.5好年冬1.0氧化樂果2.3

整理ppt第九頁，共二十頁。2、霉抑制率〔分光光度法〕檢測原理.在一定條件下,有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥對人體膽堿酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān).正常情況下,酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物(乙酰膽堿)水解,其水解產(chǎn)物與顯色劑反響,產(chǎn)生黃色物質(zhì),通過測定412納米處吸光度隨時(shí)間的變化值,計(jì)算出抑制率.通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在.酶抑制法即用有機(jī)磷農(nóng)藥來抑制酶，使本可以由酶參與的顯色反響失去顏色，而呈白色。抑制率即指有機(jī)磷農(nóng)藥抑制酶能力的強(qiáng)弱表示。

整理ppt第十頁，共二十頁。一、試劑配制1.緩沖液試劑：整包倒入大燒杯中，加1000mL純潔水溶解，酸堿度為pH8.0，常溫保存；2.乙酰膽堿酯酶：取一支酶粉加20mL緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存，一周內(nèi)用完。也可將溶解后的酶液分成幾個(gè)小瓶，將其冷凍，用時(shí)融化，但不能重復(fù)屢次冷凍、化解。3.顯色劑：取一支顯色劑參加20mL緩沖溶液，避光保存；4.底物：取一支底物加20mL緩沖溶液，搖勻后置4℃冰箱中保存；整理ppt第十一頁，共二十頁。二、分析步驟1.樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉外表泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，〔非葉菜類取2g〕放入燒杯或提取瓶中，參加5mL緩沖溶液，手搖振蕩1～2分鐘，或超聲波振蕩30秒鐘，倒出提取液，靜置3~5min，待用。2.對照溶液測試：先于試管中參加100微升酶液和100微升顯色劑，再參加2.5mL緩沖溶液，搖勻后于37°C放置15min，參加100微升底物搖勻，此時(shí)檢液開始顯色反響，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄初始吸光度A1和反響3min時(shí)的吸光度A2，A2-A1=DA0。

3.樣品溶液測試：先于試管中參加100微升酶液和100微升顯色劑，再參加2.5mL樣品提取液，其它操作與對照溶液測試相同，記錄初始吸光度A1和反響3min時(shí)的吸光度A2，A2-A1=DAt。

整理ppt第十二頁，共二十頁。三、結(jié)果計(jì)算

結(jié)果以酶被抑制的程度〔抑制率〕表示。

抑制率〔%〕=[〔DA0-DAt〕/DA0]×100

1當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。

2對陽性結(jié)果的樣品，可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。整理ppt第十三頁，共二十頁。四、注意

1.每批樣品的控制時(shí)間、溫度條件必須與對照溶液的條件完全一致。

2.蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時(shí)，不要剪的太碎。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也不要剪的太碎。

3.當(dāng)溫度條件低于37°C，酶反響的速度隨之放慢，參加酶液和顯色劑后放置反響的時(shí)間應(yīng)相對延長，延長時(shí)間確實(shí)定，應(yīng)以膽堿酯酶對照溶液測試得到的吸光度A2-A1≥0.3以上，即可往下操作。當(dāng)對照溶液酶液的參加量大一些時(shí)，也可使A2-A1≥0.3以上。

4.當(dāng)吸光度大到無法讀取時(shí)，說明測定液渾濁有干擾。整理ppt第十四頁，共二十頁。農(nóng)藥名稱最低檢測限農(nóng)藥名稱最低檢測限〔單位mg/kg〕敵敵畏0.01毒死蜱0.5滅多威0.1好年冬0.05馬拉硫磷0.5敵百蟲0.1辛硫磷0.1樂果1.0呋喃丹0.05甲胺磷0.2氧化樂果0.6對硫磷0.4整理ppt第十五頁，共二十頁。3、農(nóng)藥殘留速測儀

速測原理利用速測卡中的膽堿酯酶〔白色藥片〕可催化靛酚乙酸酯〔紅色藥片〕水解為乙酸與靛酚，由于有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶的活性有抑制作用，使催化水解后的顯色發(fā)生改變。根據(jù)顯色的不同，可以判斷樣品中含有有機(jī)磷殘或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。整理ppt第十六頁，共二十頁。速測范圍主要用于蔬菜，水果，茶葉，糧食及水中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測，適用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)基地，農(nóng)貿(mào)市場，質(zhì)量監(jiān)督，衛(wèi)生防疫，賓館飯店等部門。整理ppt第十七頁，共二十頁。速測步驟1.裝入速測卡開機(jī)預(yù)熱，開始測試2.加洗脫液、反響計(jì)時(shí)〔1〕粗篩法擦去蔬菜外表的泥土，在被測蔬菜正面接近葉尖部位滴兩滴洗脫液，用另一只菜葉在滴液處輕輕摩擦，將菜葉上洗出的水滴，滴一滴在白色藥片上，按“啟動〞鍵，反響計(jì)時(shí)開始〔2〕整體測定法擦去水果外表的泥土，用刀切成1cm見方碎片，取5克放入三角瓶中，參加10ml萃取液，搖晃50次，靜置2分鐘后待用，用滴管移取上述液，滴一滴在白色藥片上，按“啟動〞鍵，反響計(jì)時(shí)開始。3.加熱、顯色反響顯色時(shí)間為3min。當(dāng)屏幕顯示亮點(diǎn)指示“提示〞，翻開儀器上蓋。4.結(jié)果判定觀察速測卡上白色藥片上的顏色并與標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行比對，判斷農(nóng)藥殘留的強(qiáng)弱。藍(lán)色表示農(nóng)藥為陰性，淺藍(lán)色味弱陽性，白色表示農(nóng)藥為陽性。整理ppt第十八頁，共二十頁。注意蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性，處理這些樣品時(shí)，可采取整株蔬菜浸提或采用外表測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜，可采用整株蔬菜浸提法，減少色素干擾。紅色藥片和白色藥片疊合后，反響時(shí)間以3min為準(zhǔn)，3min后藍(lán)色會逐漸加深，24h后顏色會逐漸褪去。預(yù)反響后的藥片外表必須保