生化實驗血糖的測定

生化實驗血糖的測定第一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三血糖及血糖水平的概念：血糖：指血液中的單糖：葡萄糖血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖總維持在恒定水平：3.9~6.7mmol/L第二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三調(diào)節(jié)血糖水平的激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。血糖水平異常：⑴高血糖及糖尿??；⑵低血糖第三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三臨床：血糖檢測是目前診斷糖代謝異常相關疾病的主要依據(jù)?？蒲校涸诖x疾病的研究中，常測定血糖。在某些藥物的研究中，也涉及血糖的測定。測定血糖的意義第四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三體液糖的測定項目：①血糖濃度測定②口服糖耐量試驗③糖化血紅蛋白試驗④糖化血清白蛋白測定⑤胰島素測定⑥C-肽測定等第五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三測定方法無機化學法：Folin-Wu法有機化學法：鄰甲苯胺法酶法：葡萄糖氧化酶法血糖測定的常用方法第六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋紅色醌式物質(zhì)過氧化物酶（POD）Trinder反應505nm光吸收法測定相對血糖濃度第七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三分光光度計的原理分光光度技術電泳技術層析技術離心技術生物化學的四大研究技術：光的波粒二象性物質(zhì)的光吸收性分光光度計的原理第八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三分光光度計的工作原理第九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三朗伯-比爾定律朗伯定律：A=k1L比爾定律：A=k2C朗伯-比爾定律：如同時考慮液層厚度和溶液濃度對吸光度的影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度和溶液的厚度的乘積成正比。

A=KLC第十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三朗伯-比爾定律應用A標=KC標LA樣=KC樣L

標準品法測定未知樣品含量C樣=A樣A標×C標第十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三1.接通電源，調(diào)整波長。2.比色杯中加入空白及待測樣品，并放入分光光度計中，注意：加入樣品量不超過比色杯體積的2/3。3.調(diào)模式為“透射比”，對空白對照進行調(diào)“0”（開蓋）和調(diào)“100”（閉蓋）。4.調(diào)模式為“吸光度”，將空白對照調(diào)“0”，測定待測樣品的吸光度值。分光光度計的使用第十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三第十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三第十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三

葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測激素對血糖濃度的影響方法第十五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三（1）取4支試管，按下表加入試劑:試劑標準管(ml)測定管1(ml)測定管2(ml)空白管(ml)血清樣品–0.020.02–葡萄糖標準液0.02–––蒸餾水–––0.02酶酚混合試劑3.003.003.003.00實驗步驟：充分混勻，37℃水浴中保溫20min；冷卻至室溫后，505nm處比色比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標準管及測定管光密度值。第十六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三（2）計算：依據(jù)朗伯-比爾定律：A=KLC標準管葡萄糖濃度：5mmol/L

測定管葡萄糖含量（mmol/L）＝測定管光密度

標準管光密度×5第十七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液應占比色皿的2/3。血糖測定應在取血后2小時內(nèi)完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意事項第十八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三補充實驗測2-3名同學早餐后和空腹血糖的水平，并比較二者之間的區(qū)別。使用怡成JPS-5型血糖儀。第十九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三小結1、葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法測定血糖的原理。2、分光光度計的正確使用。3、實驗操作中存在的問題。第二十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三其他常用血糖測定方法介紹葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法Folin-Wu法鄰-甲苯胺法第二十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使Cu2+還原成Cu+

，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍色的鉬藍。通過比色法測定藍色化合物，計算出血糖的含量。評價穩(wěn)定、準確、但對葡萄糖無特異性，受血中非糖還原物質(zhì)的影響。空腹正常血糖參考值

4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dLFolin-Wu法第二十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三其他常用血糖測定方法介紹葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法Folin-Wu法鄰-甲苯胺法第二十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三原理

葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰-甲苯胺縮合產(chǎn)生藍綠色的席弗(Schiff)堿，顏色的深淺與葡萄糖含量成正比，可通過比色法測得血糖含量。評價

結果較可靠、但鄰-甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性。空腹正常血糖參考值

3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL鄰-甲苯胺法第二十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應條件溫和，能反映血中葡萄糖的真實含量，且已推廣出試劑盒，廣泛應用與臨床。Folin-Wu法：該法對葡萄糖無特異性，一切還原物質(zhì)均可產(chǎn)生同樣的反應。雖血液中葡萄糖為主要還原物質(zhì)，但仍存在其他非糖還原物質(zhì)，故該法其參考值較其他方法略高。鄰-甲苯胺法：該法涉及強酸、加熱等反應條件，不便于大規(guī)模檢測，且使用的試劑具有毒性，臨床和科研上已很少采用。第二十五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期三思考題1、為何不同檢測方法所提供的空腹正常血糖參考值存在差異？葡萄糖氧化酶法：3.9~6.1mmol/L