疾病的基因治療課件

基因治療幾個發(fā)展時期1980-1989 準備期 技術、宗教，倫理，法律1990-1995 狂熱期 公眾，媒體1996-至今 理性期 出現(xiàn)臨床結果 人體基因治療是一個多環(huán)節(jié)的復雜過程基因導入靶器官、靶組織、靶細胞間的交流基因表達水平和時空調控基因表達產(chǎn)物生物活性載體安全性 還存在許多迷惑和問題

早期期望值過高，目前理論研究和技術的發(fā)展水平均還不能滿足成功臨床試驗的需要，安全性問題還一直沒有徹底解決。然而，目前對許多疾病分子機制和對基因載體的研究取得了長足的進步，為基因治療較大范圍臨床試驗開展打下了堅實的基礎。選擇 在治療上合適的基因——已知其在某特定疾病中的病理、生理作用適當?shù)幕驅胂到y(tǒng)——病毒或非病毒載體臨床前試驗的有效性和安全性評價臨床實驗的有效性檢測手段一、基因治療主要病種：

主要為對人類健康威脅嚴重的疾病。包括：遺傳?。ㄈ缪巡?、囊性纖維病、家庭性高膽固醇血癥等）、惡性腫瘤、心血管疾病、感染性疾病（如AIDS、類風濕等）。

Cardiacischaemia

(Heart)VEGFgene(vasculargrowthfactor),plasmid,intracardiac2000J.Isner

Limbischaemia

(Hands,Feet)VEGFgene(vasculargrowthfactor),plasmid,intramuscular1998J.Isner

aaaaaaSCID

(Immunodeficiency)IL2Rgene(gamma-Creceptor)retrov.,exvivoBM2000A.Fischer

HaemophiliaB(Blood)FIX,RV,Skinfibroblast,腹部皮下移植,1991,復旦大學FactorIXgene

(clottingfactor),aav,adenoIII,intramuscular1999-2000M.Kay,K.High1992，JerryHsueh(薛京倫）CysticFibrosis

(Lung,Pancreas)CFTRgene

(chlorinetranspor-ter),retrov.,aav,adenoII,localnosignificantresults

inspiteofseveraltrialsADAdeficiency

(Immunodeficiency)ADAnormalgene

(enzyme)retrovirus,ex-vivoBM1990F.Anderson,

2002C.BordignonDiseasetransferredfunctionClinicalResultsClassicalSGTmodelsandstrategiesadditional'popular'andemergingexamples:MorbusGaucher,MorbusParkinson,CriglerNjiar,OTCdeficiency,Duchenne'sMD,Restenosiscontrol二、遺傳病基因治療

1.第一個基因治療的遺傳病(1990):

腺苷脫氨酶（ADA）缺乏癥。ADA缺乏癥是一種罕見的遺傳病，患者ADA基因缺陷，不能產(chǎn)生功能性ADA酶。ADA缺乏的孩子一出生就有嚴重的免疫缺陷，十分容易受感染，需要在幾乎無菌的環(huán)境中生存。ADA缺乏癥能用PEG-ADA治療，但這種藥物十分昂貴（60,000美元/年），而且必須通過持續(xù)靜脈注射來維持療效。除了肝臟外，其他器官也可以用于產(chǎn)生基因修復、RNA修復（Trans-2003年10月16日，全世界第一個基因治療藥物——p53腺病毒注射液由中國國家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)新藥證書！1991年復旦大學進行了國際首例血友病B基因治療臨床實驗以高劑量AAV病毒肌肉注射老鼠試驗中，未引起組織毒性,所有動物脾大小正常，未發(fā)現(xiàn)囊泡區(qū)的增生。5‘50ulAPTT34"小鼠尾靜脈大容量快速注射10μgCMV-hFIX質粒DNA(◆)，注射后不同時間采血，通過ELISA檢測血漿中hFⅨ的水平?；蛑委煄讉€發(fā)展時期2003Jul;125(1):9-18基因治療幾個發(fā)展時期大多重復國外同類實驗；5‘LTRFIXcDNANeoSOriPOri3’LTRXuRetal”MoleculartherapeuticsofHBV”CurrGeneTher.基因治療研究和相關研究如基因組學,病毒學,免疫學,轉基因動物,臨床醫(yī)學的結合不夠；研究了肌肉注射重組AAV在體內(nèi)的分布，分散程度與注射劑量成比例，主要分布在注射肌肉組織,經(jīng)過半定量PCR發(fā)現(xiàn)肌肉中的載體數(shù)是其它組織的1,000－10,000倍。ZhangDetal:“OptimizationofexvivoactivationandexpansionofmacaqueprimaryCD4-enrichedperipheralbloodmononuclearcellsforuseinanti-HIVimmunotherapyandgenetherapystrategies”JAcquirImmuneDeficSyndr.rAAV病毒隨機整合問題但是，一些專家對AVI公司成功對付非典的可能性表示懷疑。FVIII、FIXslicing）提供新的方案設計思路單基因遺傳病，功能清晰，基因小ADA缺乏癥被選為第一個基因治療試驗有以下幾點原因：ADA缺乏癥被選為第一個基因治療試驗有以下幾點原因：單基因遺傳病，功能清晰，基因小基因調控簡單，只要“開啟”狀態(tài)ADA酶量無需精確調控：很少量的酶也可使患者受益，酶量很多也能耐受。2、血友病B基因治療的實踐與發(fā)展

血友病B（HemophiliaB）是一種由于凝血因子IX基因（hFIX）發(fā)生突變而引起的出血性疾病。其癥狀表現(xiàn)為自發(fā)性出血，嚴重者可因關節(jié)出血導致關節(jié)變形和殘廢甚至死亡。該病為X染色體連鎖，在男性中發(fā)病率大約為1/100,000。血友病目前的臨床治療方法：蛋白替代法：輸血、輸凝血酶原、注射重組FVIII，F(xiàn)IX，能有效地改善出血癥狀和延長生命，但是昂貴，且存在感染HIV，HBV（乙肝），HCV（丙肝）風險蛋白替代法可導致抑制物產(chǎn)生，從而使治療失效血友病A有10-40%的人群產(chǎn)生抑制物血友病B有5%的人群產(chǎn)生抑制物這也是我們把治療的目光投在比蛋白替代法可能更優(yōu)越的基因治療的原因之一！血友病是目前SGT最有希望達到理想療效的遺傳病病種現(xiàn)行血友病B治療手段、效果不理想單基因遺傳病不需要精確的表達調控，無需所有細胞表達表達廣譜理想的動物模型（二個狗品系，3個小鼠品系）療效易于評價血友病A：100-200ng/ml血友病B:5000ng/ml血友病B基因治療靶細胞選擇exvivo: Invivo: 皮膚成纖維細胞 直接、連續(xù)注射角質細胞 內(nèi)皮細胞上皮細胞成肌細胞造血干細胞骨髓基質細胞支持細胞

盡管人體天然的FVIII和FIX都是由肝細胞產(chǎn)生的。然而，實驗證明，由非肝細胞如CHO產(chǎn)生的重組凝血因子與人體天然的凝血因子在活性和免疫原性上沒有差別，到目前為止沒有發(fā)現(xiàn)非肝細胞產(chǎn)生的凝血因子有不同尋常的翻譯后修飾。因此，肝細胞不一定是血友病基因治療必然的靶細胞。1）1991年，復旦大學反轉錄病毒介導的exvivo途徑臨床試驗取得了安全有效的結果反轉錄病毒載體XL－IX

5‘LTRFIXcDNANeoSOriPOri3’LTRN2CMV－IX5‘LTRNeoCMVFIXcDNA3’LTR2）2003年，以AAV-2/hFIX介導的直接肌肉注射，基因治療血友病B方案已被批準臨床試驗（國家藥品監(jiān)督管理局藥物臨床批件，2003L00403）ITRCMVhFIXminigenePAITRITRCMVmFIXPAITRpAVChFIXmpAVCmFIXpAVChFIXmR重組AAV載體ITRCMVhFIXR338APAITRADA缺乏癥能用PEG-ADA治療，但這種藥物十分昂貴（60,000美元/年），而且必須通過持續(xù)靜脈注射來維持療效。30‘430ulAPTT>100"1996-至今 理性期 出現(xiàn)臨床結果Limbischaemia

(Hands,Feet)Limbischaemia

(Hands,Feet)VEGFgene(vasculargrowthfactor),plasmid,intracardiac血友病目前的臨床治療方法：AAV-HemophiliaB基因治療研究和相關研究如基因組學,病毒學,免疫學,轉基因動物,臨床醫(yī)學的結合不夠；1980-1989 準備期 技術、宗教，倫理，法律初級人才流失,高級人才匱乏；SCID

(Immunodeficiency)VEGFgene(vasculargrowthfactor),plasmid,intracardiac基因調控簡單，只要“開啟”狀態(tài)缺乏孵化和轉化機制,更缺乏風險基金；大多重復國外同類實驗；2）2003年，以AAV-2/hFIX介導的直接肌肉注射，基因治療血友病B方案已被批準臨床試驗（國家藥品監(jiān)督管理局藥物臨床批件，2003L00403）ZhangDetal:“OptimizationofexvivoactivationandexpansionofmacaqueprimaryCD4-enrichedperipheralbloodmononuclearcellsforuseinanti-HIVimmunotherapyandgenetherapystrategies”JAcquirImmuneDeficSyndr.研究了肌肉注射重組AAV在體內(nèi)的分布，分散程度與注射劑量成比例，主要分布在注射肌肉組織,經(jīng)過半定量PCR發(fā)現(xiàn)肌肉中的載體數(shù)是其它組織的1,000－10,000倍。（2）AIDS基因治療----近期一些工作然而，實驗證明，由非肝細胞如CHO產(chǎn)生的重組凝血因子與人體天然的凝血因子在活性和免疫原性上沒有差別，到目前為止沒有發(fā)現(xiàn)非肝細胞產(chǎn)生的凝血因子有不同尋常的翻譯后修飾。TransientExpressionofpAAV-hFIXs

inCellLinesInvitroExpressionofAAV/mFIXmFIXlevel(ng/106cells/24h)ExpressionofrAAV-hFIXR338AinMice:ExpressionofmFIXinHemophiliaBMouse

血友病小鼠經(jīng)rAAV基因治療后,FIX凝血活性提高,出血癥狀改善3.2'<40ulAPTT<20''30‘430ulAPTT>100"7.5‘50ulAPTT34"BleedingAssay采用Westerndot-blot分析表明，于肌肉注射rAAV/hFIX病毒子后第15天，小鼠血液中即開始出現(xiàn)抗hFIX抗體，血漿中hFIX水平亦開始下降.經(jīng)Bethesda分析,未發(fā)現(xiàn)抗小鼠IX因子抗體.0天3天15天27天39天陽性對照抗IX因子抗體分析采用Westerndot-blot分析表明，于肌肉注射rAAV/hFIX病毒子后第15天，小鼠血液中即開始出現(xiàn)抗hFIX抗體，血漿中hFIX水平亦開始下降.二是它有可能最終被證實不能切斷信號傳播。2003Mar;17(1):81-4.初級人才流失,高級人才匱乏；exvivo: Invivo:包括：遺傳?。ㄈ缪巡?、囊性纖維病、家庭性高膽固醇血癥等）、惡性腫瘤、心血管疾病、感染性疾病（如AIDS、類風濕等）。目前的臨床研究進程很慢，這與癌癥復雜的發(fā)病機制和有效載體的研發(fā)有關，雖然動物實驗的結果不斷涌現(xiàn)，但并不能完全代表人類，只有臨床試驗具有決定性的作用。惡性腫瘤基因治療方案中，所用的治療基因大致可歸為三類：細胞因子類；以高劑量AAV病毒肌肉注射老鼠試驗中，未引起組織毒性,所有動物脾大小正常，未發(fā)現(xiàn)囊泡區(qū)的增生。腺病毒載體介導的TK/ACV對大鼠腦膠質瘤離體/活體的殺傷作用CriglerNjiar,OTCdeficiency,Duchenne'sMD,Restenosiscontrol1）1991年，復旦大學反轉錄病毒介導的exvivo途徑臨床試驗取得了安全有效的結果ClinicalResultsVSVG假型RV滴度高，與傳統(tǒng)RV比較抗補體滅活效應高，不同劑量病毒上清液腹腔注射新生血友病B小鼠，小鼠凝血功能改善，凝血活性提高3%以上，表達持續(xù)120d以上。大多重復國外同類實驗；BleedingAssay在注射區(qū)的骨骼肌僅有中等或輕微的慢性感染，感染僅限于肌束膜組織，無肌肉纖維解剖學上的改變。ADAdeficiency

(Immunodeficiency)殺傷性基因類，以皰疹病毒I型胸苷嘧啶激酶（HSV/TK）為代表；1996-至今 理性期 出現(xiàn)臨床結果肌注FIX后，抗體在7天后開始明顯增加，15天時達到最高，約為正常對照的8倍左右，到60天時抗體的量開始減少，為正常對照的5倍，此后到120天，抗體的量基本不變?？笰AV抗體檢測建立了復制型AAV病毒檢測的巢式PCR方法以及HSV病毒檢測方法,提高了靈敏度。研究了肌肉注射重組AAV在體內(nèi)的分布，分散程度與注射劑量成比例，主要分布在注射肌肉組織,經(jīng)過半定量PCR發(fā)現(xiàn)肌肉中的載體數(shù)是其它組織的1,000－10,000倍。鼠類使用AAV毒性研究,病毒注射后血漿沒有發(fā)現(xiàn)血清肌氨酸激酶水平的上升，體重沒有改變，未見血清的化學參數(shù)或血液參數(shù)的改變。僅發(fā)現(xiàn)少量由淋巴細胞浸潤導致的感染,無結構改變。安全性以高劑量AAV病毒肌肉注射老鼠試驗中，未引起組織毒性,所有動物脾大小正常，未發(fā)現(xiàn)囊泡區(qū)的增生。在注射區(qū)的骨骼肌僅有中等或輕微的慢性感染，感染僅限于肌束膜組織，無肌肉纖維解剖學上的改變。rAAV注射后,小鼠體內(nèi)AAV抗體滴度增高.rAAV病毒隨機整合問題3）以其他載體系統(tǒng)進行血友病B基因治療微小腺病毒載體介導hFIX小基因離體表達ELISA方法檢測微小腺病毒(miniAd)及第一代腺病毒(firstAd)介導cFIX在血友病B小鼠血漿中的表達VSVG假型RV介導的hFIXcDNA在血友病B小鼠中的基因治療

VSVG假型RV滴度高，與傳統(tǒng)RV比較抗補體滅活效應高，不同劑量病毒上清液腹腔注射新生血友病B小鼠，小鼠凝血功能改善，凝血活性提高3%以上，表達持續(xù)120d以上。3）以其他載體系統(tǒng)進行血友病B基因治療ELISA方法檢測微小腺病毒(miniAd)及第一代腺病毒(firstAd)介導cFIX在血友病B小鼠血漿中的表達微小腺病毒載體介導hFIX小基因離體表達2）2003年，以AAV-2/hFIX介導的直接肌肉注射，基因治療血友病B方案已被批準臨床試驗（國家藥品監(jiān)督管理局藥物臨床批件，2003L00403）盡管人體天然的FVIII和FIX都是由肝細胞產(chǎn)生的。外源性基因替補療法

輸注外源性抑癌基因p53可抑制或殺滅癌細胞。小鼠尾靜脈大容量快速注射10μgCMV-hFIX質粒DNA(◆)，注射后不同時間采血，通過ELISA檢測血漿中hFⅨ的水平。AAV-HemophiliaBHIV是基因組結構及基因調節(jié)機制最為復雜的逆轉錄病毒之一,基于HIV的重組反轉錄病毒載體，能廣泛感染各種非分裂細胞,也保留了能夠整合在宿主染色體上的特點.缺乏創(chuàng)新性，各自為政,規(guī)模小,資金投入有限,缺乏中心的輻射作用；血友病是目前SGT最有希望達到基因治療幾個發(fā)展時期基因治療研究和相關研究如基因組學,病毒學,免疫學,轉基因動物,臨床醫(yī)學的結合不夠；血友病B有5%的人群產(chǎn)生抑制物AnanthalakshmiPolurietal“GenetictherapyforHIV/AIDS”ExpertOpiniononBiologicalTherapy.DingCLetal“ExpressionofHBcAgineukaryoticcellsbyretroviralvectormediatedgenetransfer”

中華實驗和臨床病毒學，2003Mar;17(1):81-4.ELISA方法檢測微小腺病毒(miniAd)及第一代腺病毒(firstAd)介導cFIX在血友病B小鼠血漿中的表達2003May-Jun;23(3A):1997-2005.惡性腫瘤基因治療方案中，所用的治療基因大致可歸為三類：細胞因子類；血友病小鼠經(jīng)rAAV基因治療后,FIX凝血活性提高,出血癥狀改善重組慢病毒載體介導人凝血IX因子的表達及宮內(nèi)基因治療重組慢病毒載體FUXWFAXW感染離體細胞293T、L-02、BHK72h后的hFIX蛋白表達重組FAXW.FUXW病毒在血友病B小鼠體內(nèi)表達hFIX的時效曲線

HIV是基因組結構及基因調節(jié)機制最為復雜的逆轉錄病毒之一,基于HIV的重組反轉錄病毒載體，能廣泛感染各種非分裂細胞,也保留了能夠整合在宿主染色體上的特點.且免疫反應小,重組HIV是一個很有發(fā)展?jié)摿Φ牟《据d體ABP肝特異性啟動子指導人的凝血因子IX的重組HIV載體：重組慢病毒載體質FUXW,FAXWD等宮內(nèi)胎鼠基因治療非病毒途徑導入基因：尾靜脈大容量快速注射法尾靜脈大容量快速注射裸DNA能夠介導外源基因在動物肝內(nèi)高效表達，我們以凝血因子Ⅸ（hFⅨ）為報告基因建立了尾靜脈液壓法裸質粒轉移體系。人FⅨ在小鼠體內(nèi)的表達小鼠尾靜脈大容量快速注射10μgCMV-hFIX質粒DNA(◆)，注射后不同時間采血，通過ELISA檢測血漿中hFⅨ的水平?！綬inger’s液注射組。

血友病基因治療進展與展望

進展展望新的AAV血清型和慢病毒載體已成功改進慢病毒,gutlessAd和不同血清用于FVIII、FIX生產(chǎn)研究 型AAV正在開展除了肝臟外，其他器官也可以用于產(chǎn)生基因修復、RNA修復（Trans-FVIII、FIX

slicing）提供新的方案設計思路內(nèi)源性因子合成和病毒載體引起的免疫以外周內(nèi)皮源細胞實施基因修飾的反應是血友病基因轉移的潛在威脅可能具有發(fā)展前景血友病臨床試驗正在開展以干細胞治療實施的基因修飾將成（RV，AAV，或exvivo皮膚成纖維為可能細胞）4）總結

血友病基因治療需要安全、有效、無免疫原性的轉移系統(tǒng)，并要求持續(xù)表達，且必須優(yōu)于蛋白替代法。血友病具有很好的的動物模型,HemA,HemB均有小鼠和狗模型，能模擬、預測臨床癥狀、評價有效性和安全性，有助于臨床前制定策略。目前已開展病毒和非病毒轉移系統(tǒng)研究，病毒的工作占多數(shù)，但非病毒系統(tǒng)的工作可能更具魅力：可在無細胞系統(tǒng)中裝配免疫原性小雜合非病毒載體系統(tǒng)將病毒某些成分加入系統(tǒng)，以提高基因轉移效率，對血友病基因治療很有吸引力

三、腫瘤的基因治療

目前，進入臨床試驗的基因療法有70%是針對癌癥的，雖然大多數(shù)尚未被肯定療效，但代表了癌癥治療的方向。

惡性腫瘤基因治療方案中，所用的治療基因大致可歸為三類：細胞因子類；殺傷性基因類，以皰疹病毒I型胸苷嘧啶激酶（HSV/TK）為代表；以p53為代表的抑癌基因及反義癌基因類。

2003年10月16日，全世界第一個基因治療藥物——p53腺病毒注射液由中國國家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)新藥證書！常見癌癥治療方案外源性基因替補療法

輸注外源性抑癌基因p53可抑制或殺滅癌細胞。

抗原基因導入療法

將組織相容復合體MHC基因轉移給腫瘤細胞，MHCII型分子在腫瘤細胞表面大量表達，與腫瘤抗原結合形成復合抗原，從而暴露出“靶點”被免疫細胞識別和消滅

反義基因療法

以癌基因DNA的有義鏈為模板合成出反義鏈，將其轉入腫瘤細胞內(nèi)，形成的雙鏈核酸阻斷癌基因表達和癌細胞增殖。自殺基因療法

將自殺基因（又稱前藥轉換酶基因如胸苷激酶tk基因和胞嘧啶脫氨酶CD基因等

）,導入癌細胞內(nèi)，使癌細胞死亡。細胞因子基因導入療法

將白細胞介素II、干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子基因導入腫瘤細胞內(nèi)，所產(chǎn)生的細胞因子可引起癌細胞死亡；也可將這些細胞因子基因導入腫瘤組織中淋巴細胞內(nèi)，增強這些細胞的抗癌作用。我們的部分工作腺病毒載體介導的TK/ACV對大鼠腦膠質瘤離體/活體的殺傷作用目前的臨床研究進程很慢，這與癌癥復雜的發(fā)病機制和有效載體的研發(fā)有關，雖然動物實驗的結果不斷涌現(xiàn)，但并不能完全代表人類，只有臨床試驗具有決定性的作用。病毒性肝炎基因治療研究雖然取得了一系列的進展，但是，由于病毒性肝炎的發(fā)病機制還沒有完全了解清楚，目前基因治療在病毒性肝炎治療中的應用遠未達到最高水平。大多重復國外同類實驗；VEGFgene(vasculargrowthfactor),plasmid,intracardiac除了肝臟外，其他器官也可以用于產(chǎn)生基因修復、RNA修復（Trans-缺乏孵化和轉化機制,更缺乏風險基金；exvivo: Invivo:1）1991年，復旦大學反轉錄病毒介導的exvivo途徑臨床試驗取得了安全有效的結果將白細胞介素II、干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子基因導入腫瘤細胞內(nèi)，所產(chǎn)生的細胞因子可引起癌細胞死亡；這也是我們把治療的目光投在比蛋白替代法可能更優(yōu)越的基因治療的原因之一！血友病小鼠經(jīng)rAAV基因治療后,FIX凝血活性提高,出血癥狀改善VSVG假型RV滴度高，與傳統(tǒng)RV比較抗補體滅活效應高，不同劑量病毒上清液腹腔注射新生血友病B小鼠，小鼠凝血功能改善，凝血活性提高3%以上，表達持續(xù)120d以上。1980-1989 準備期 技術、宗教，倫理，法律初級人才流失,高級人才匱乏；腺病毒載體介導的TK/ACV對大鼠腦膠質瘤離體/活體的殺傷作用除了肝臟外，其他器官也可以用于產(chǎn)生基因修復、RNA修復（Trans-以高劑量AAV病毒肌肉注射老鼠試驗中，未引起組織毒性,所有動物脾大小正常，未發(fā)現(xiàn)囊泡區(qū)的增生。目前的臨床研究進程很慢，這與癌癥復雜的發(fā)病機制和有效載體的研發(fā)有關，雖然動物實驗的結果不斷涌現(xiàn)，但并不能完全代表人類，只有臨床試驗具有決定性的作用。外源性基因替補療法

輸注外源性抑癌基因p53可抑制或殺滅癌細胞。目前已開展病毒和非病毒轉移系統(tǒng)研究，病毒的工作占多數(shù)，但非病毒系統(tǒng)的工作可能更具魅力：

目前癌癥基因治療的研究大多是在觀察毒副反應為主的Ⅰ期臨床試驗，極少數(shù)進入Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗，結果有待進一步觀察。目前的臨床研究進程很慢，這與癌癥復雜的發(fā)病機制和有效載體的研發(fā)有關，雖然動物實驗的結果不斷涌現(xiàn)，但并不能完全代表人類，只有臨床試驗具有決定性的作用。就目前的研究成果來看，基因治療可能會在手術、放療和化療以外，成為一種新的腫瘤治療手段，特別可能對提高化療、放療的敏感性，減少腫瘤復發(fā)和轉移等方面有一定的、甚至更為重要的作用，成為腫瘤綜合治療中的一個較為重要的組成部分。四、傳染病的基因治療（1）病毒性肝炎的基因治療

病毒性肝炎基因治療研究雖然取得了一系列的進展，但是，由于病毒性肝炎的發(fā)病機制還沒有完全了解清楚，目前基因治療在病毒性肝炎治療中的應用遠未達到最高水平。病毒性肝炎的基因治療一方面取決于基因治療技術本身發(fā)展的速度和狀態(tài)，另一方面也取決于病毒性肝炎發(fā)病機制本身研究的深入程度。病毒性肝炎基因治療——最近部分工作XuRetal”MoleculartherapeuticsofHBV”CurrGeneTher.2003Aug;3(4):341-55.病毒學雜志.2003Mar;17(1):81-4.DingCLetal“ExpressionofHBcAgineukaryoticcellsbyretroviralvectormediatedgenetransfer”

中華實驗和臨床病毒學，2003Mar;17(1):81-4.

KleinCetal“InhibitionofhepatitisBvirusreplicationinvivobynucleosideanaloguesandsiRNA”Gastroenterology.2003Jul;125(1):9-18

HanJQetal“ApproachtotransforminghepatitisBvirusasagenetherapeuticvector”中華肝臟病雜志2003,Jun;11(6):344-6.（2）AIDS基因治療----近期一些工作ZhangDetal:“OptimizationofexvivoactivationandexpansionofmacaqueprimaryCD4-enrichedperipheralbloodmononuclearcellsforuseinanti-HIVimmunotherapyandgenetherapystrategies”JAcquirImmuneDeficSyndr.20031;32(3):245-54.

AnanthalakshmiPolurietal“GenetictherapyforHIV/AIDS”ExpertOpiniononBiologicalTherapy.2003,vol.3,no.6,pp.951-963FanningGetal“GenetherapyforHIV/AIDS:thepotentialforanewtherapeuticregimen”JGeneMed.2003Aug;5(8):645-53

AkkinaRetal“siRNAs,ribozymesandRNAdecoysinmodelingstemcell-basedgenetherapyforHIV/AIDS”AnticancerRes.2003May-Jun;23(3A):1997-2005.

（3）SARS基因治療反義技術？？？

在“反義”技術領域潛心耕耘了23載的AVI公司一直不為外界所知，直到非典出現(xiàn)，該公司一鳴驚人。事實上，AVI公司只花了幾天時間，就把對付田鼠冠狀病毒和企鵝西尼羅河病毒的“反義”技術“改造”成了對付非典病毒的武器。

是否成功有待證明

但是，一些專家對AVI公司成功對付非典的可能性表示懷疑。紐約阿爾伯特·愛因斯坦醫(yī)學院的賽·斯滕博士說，他要看更多的數(shù)據(jù)。這位被稱為“‘反義’技術之父”的博士還強調，他的領域充滿了失敗，“我們的了解不多，（這一技術）實在太復雜”。

“反義”技術之復雜在于，一是它除了能切斷有害基因及其編碼的蛋白質之間的信號傳播，也會影響與疾病沒有關系的其它基因和蛋白質；二是它有可能最終被證實不能切斷信號傳播。目前臨床試驗成功的例子AAV-HemophiliaBTreatmentofcertaintypesofcancerusingconditionallyreplicatingoncolyticvirusesTreatmentofvascularandcoronaryarterydiseaseusingviralvectorsthatexpressangiogenicfactorsp53forcancertreatmentDNAvaccineforcancerandinfectiousdiseases六、我國基因治療成就和存在問題

（一）成就：1991年復旦大學進行了國際首例血友病B基因治療臨床實驗2000年四川大學首先提出利用異種同源分子作腫瘤基因治療的策略2002年上海市腫瘤研究所設計的非病毒基因導入系統(tǒng)獲得美國專利

2003年，世界上第一個基因治療藥物在中國誕生我國已有14個基因治療方案進入臨床試驗（二）存在問題：大多重復國外同類實驗；缺乏創(chuàng)新性，各自為政,規(guī)模小,資金投入有限,缺乏中心的輻射作用；一哄而上,一哄而下,缺乏基因治療正確認識.缺乏孵化和轉化機制,更缺乏風險基金；基因治療研究和相關研究如基因組學,病毒學,免疫學,轉基因動物,臨床醫(yī)學的結合不夠；初級人才流失,高級人才匱乏；過于強調商業(yè)價值,忽視科學價值和樣板作用

基因治療幾個發(fā)展時期1980-1989 準備期 技術、宗教，倫理，法律1990-1995 狂熱期 公眾，媒體1996-至今 理性期 出現(xiàn)臨床結果 蛋白替代法可導致抑制物產(chǎn)生，從而使治療失效血友病A有10-40%的人群產(chǎn)生抑制物血友病B有5%的人群產(chǎn)生抑制物這也是我們把治療的目光投在比蛋白替代法可能更優(yōu)越的基因治療的原因之一！采用Westerndot-blot分析表明，于肌肉注射rAAV/hFIX病毒子后第15天，小鼠血液中即開始出現(xiàn)抗hFIX抗體，血漿中hFIX水平亦開始下降.經(jīng)Bethesda分析,未發(fā)現(xiàn)抗小鼠IX因子抗體.0天3天15天27天39天陽性對照抗IX因子抗體分析以高劑量AAV病毒肌肉注射老鼠試驗中，未引起組織毒性,所有動物脾大小正常，未發(fā)現(xiàn)囊泡區(qū)的增生。在注射