杜氏肌營養(yǎng)不良癥課件整理

杜氏肌營養(yǎng)不良癥杜氏肌營養(yǎng)不良癥杜氏肌營養(yǎng)不良(DMD)屬于X連鎖隱性遺傳病，是男性中常見的遺傳性疾病。發(fā)病率約為1/3500活男嬰，女性多為致病基因攜帶者，發(fā)病者罕見，且癥狀較輕。DMD發(fā)病年齡偏小，起病隱襲，病程長，在男患中癥狀較重，且病死率高，患者常常以肌肉的進(jìn)行性萎縮無力并伴有腓腸肌假性肥大為特征，多在3,5歲發(fā)病，病程進(jìn)展快，大多在20歲左右死于心肺衰竭?；純河膳P到站立有特殊的過程（Gower征），走路為鴨型步態(tài)。DMD---臨床表現(xiàn)藥物治療：糖皮質(zhì)激素治療是目前唯一被循證醫(yī)學(xué)證實(shí)有效，可延緩DMD病程的藥物。短期口服激素治療可增強(qiáng)骨骼肌力量和功能，并可能在更長時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定骨骼肌力量和功能?；蛑委煟豪貌恢苯右鹑祟惣膊。庖咴暂^小的腺相關(guān)病毒（AAV）為載體，導(dǎo)入人工剪裁的Dys基因。康復(fù)治療、矯形治療、社會(huì)心理治療等。DMD---臨床治療DMD---遺傳方式及特征（1）系譜中常常只有男性患者（2）父母都無病時(shí)，女兒則不會(huì)發(fā)病，兒子可能發(fā)??；（3）由于交叉遺傳，患者的同胞、舅舅、姨表兄弟、外甥常常為本病患者；（4）由于男性患者的子女都正常，故可見隔代遺傳；（5）女性患者的父親一定是患者,母親一定是攜帶者。注：在XR病中，男性的致病基因只能從母親傳來，將來只能傳給女兒，不存在從男性向男性傳遞。即父傳女，母傳子，稱為交叉遺傳DMD---遺傳方式及特征DMD---實(shí)驗(yàn)室診斷產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選10~12孕周采集絨毛;次選為15~18孕周采集羊水。Ⅱ—2為攜帶者，核型XAXa1－3)，基因全長約2220kb，含79個(gè)外顯子，cDNA長14kb，是目前已知的最大人類基因。（5）女性患者的父親一定是患者,母親一定是攜帶者。產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選10~12孕周采集絨毛;次選為15~18孕周采集羊水。產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選10~12孕周采集絨毛;次選為15~18孕周采集羊水?；純河膳P到站立有特殊的過程（Gower征），走路為鴨型步態(tài)。(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。該項(xiàng)檢測具備的優(yōu)點(diǎn):一是檢測21三體綜合征,因?yàn)樵诙紊龝r(shí)孕婦年齡普遍偏大,生育21三體綜合征患兒的風(fēng)險(xiǎn)大為提高;二是判斷是否有母源污染及污染程度,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“胎兒材料”完全是母源的情況;三是核對所分析的DNA材料是否存在混亂。DMD由抗肌萎縮蛋白（Dys）基因突變所致，屬于進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良癥常見類型。Dys基因表達(dá)的缺乏會(huì)影響DAPC的形成，使分子橋中斷，至少導(dǎo)致兩個(gè)結(jié)果：第一，細(xì)胞膜變得更脆弱在肌肉離心性收縮的時(shí)候會(huì)被機(jī)械力破壞；多重PCR方法可檢測到缺失型男性患者,對女性攜帶者及非缺失型突變患者無能為力。產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選10~12孕周采集絨毛;次選為15~18孕周采集羊水。如胎兒為男性,則應(yīng)針對先證者的基因突變或多態(tài)性標(biāo)記進(jìn)行分析,確定胎兒是否獲得突變等位基因;如為女性,則可停止基因診斷,因?yàn)榕噪s合子通常不患病。Dys基因表達(dá)的缺乏會(huì)影響DAPC的形成，使分子橋中斷，至少導(dǎo)致兩個(gè)結(jié)果：第一，細(xì)胞膜變得更脆弱在肌肉離心性收縮的時(shí)候會(huì)被機(jī)械力破壞；Dys和抗肌萎縮蛋白聚糖等蛋白裝配在一起形成抗肌萎縮蛋白的結(jié)合蛋白復(fù)合物(DAPC)。血清肌酸激酶（CK）含量在血清酶學(xué)檢查中最有價(jià)值。DMD發(fā)病年齡偏小，起病隱襲，病程長，在男患中癥狀較重，且病死率高，患者常常以肌肉的進(jìn)行性萎縮無力并伴有腓腸肌假性肥大為特征，多在3,5歲發(fā)病，病程進(jìn)展快，大多在20歲左右死于心肺衰竭。產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選10~12孕周采集絨毛;次選為15~18孕周采集羊水。在各種類型突變中，單個(gè)或多個(gè)外顯子缺失突變患者占65%－70%；它是目前用于缺失型DMD診斷最簡便最有效的方法,已成為D/BMD患者基因診斷及產(chǎn)前基因診斷的首選技術(shù),而且此技術(shù)可根據(jù)檢出缺失外顯子是整碼還是移碼來判斷患者的預(yù)后。基因治療：利用不直接引起人類疾病，免疫原性較小的腺相關(guān)病毒（AAV）為載體，導(dǎo)入人工剪裁的Dys基因。DHPLC技術(shù)是通過離子對反向液相色譜分析來區(qū)分異源雙鏈核酸分子及同源雙鏈核酸分子DNA片段,篩查DNA的變化,且不需要放射性同位素及溴化乙啶凝膠,相對高效、經(jīng)濟(jì)、自動(dòng)化程度高。無意義或框移造成的點(diǎn)突變占30%，重復(fù)占5%－15%：故DMD突變類型主要為缺失，其特點(diǎn)是Xp21上外顯子缺失的不均一性。在各種類型突變中，單個(gè)或多個(gè)外顯子缺失突變患者占65%－70%；DMD---分子遺傳及突變情況DAPC形成了一個(gè)穿過肌膜傳遞信號(hào)，連接細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白骨架的重要結(jié)構(gòu)。(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。Y染色質(zhì)檢查Y染色質(zhì)檢查適用于具有一個(gè)或一個(gè)以上Y染色體的個(gè)體或細(xì)胞群。DMD由抗肌萎縮蛋白（Dys）基因突變所致，屬于進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良癥常見類型。已證實(shí)人類抗肌萎縮蛋白基因定位于X染色體短臂上(Xp21.1－3)，基因全長約2220kb，含79個(gè)外顯子，cDNA長14kb，是目前已知的最大人類基因。DMD---分子遺傳及突變情況DAPC形成了一個(gè)穿過肌膜傳遞信號(hào)，連接細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白骨架的重要結(jié)構(gòu)。它是目前用于缺失型DMD診斷最簡便最有效的方法,已成為D/BMD患者基因診斷及產(chǎn)前基因診斷的首選技術(shù),而且此技術(shù)可根據(jù)檢出缺失外顯子是整碼還是移碼來判斷患者的預(yù)后。如胎兒為男性,則應(yīng)針對先證者的基因突變或多態(tài)性標(biāo)記進(jìn)行分析,確定胎兒是否獲得突變等位基因;如為女性,則可停止基因診斷,因?yàn)榕噪s合子通常不患病。它是目前用于缺失型DMD診斷最簡便最有效的方法,已成為D/BMD患者基因診斷及產(chǎn)前基因診斷的首選技術(shù),而且此技術(shù)可根據(jù)檢出缺失外顯子是整碼還是移碼來判斷患者的預(yù)后。DMD---實(shí)驗(yàn)室診斷DHPLC技術(shù)是通過離子對反向液相色譜分析來區(qū)分異源雙鏈核酸分子及同源雙鏈核酸分子DNA片段,篩查DNA的變化,且不需要放射性同位素及溴化乙啶凝膠,相對高效、經(jīng)濟(jì)、自動(dòng)化程度高。在各種類型突變中，單個(gè)或多個(gè)外顯子缺失突變患者占65%－70%；X染色質(zhì)檢查X染色質(zhì)的檢查可刮取口腔粘膜、陰道粘膜脫落上皮細(xì)胞，亦可采用絨毛或羊水中胎兒脫落細(xì)胞涂片，經(jīng)硫堇或甲苯胺藍(lán)染色，在光鏡下計(jì)數(shù)X染色質(zhì)數(shù)目。(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。DHPLC技術(shù)是通過離子對反向液相色譜分析來區(qū)分異源雙鏈核酸分子及同源雙鏈核酸分子DNA片段,篩查DNA的變化,且不需要放射性同位素及溴化乙啶凝膠,相對高效、經(jīng)濟(jì)、自動(dòng)化程度高。DAPC形成了一個(gè)穿過肌膜傳遞信號(hào)，連接細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白骨架的重要結(jié)構(gòu)。選擇絨毛進(jìn)行產(chǎn)前診斷的理由有3條(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。（5）女性患者的父親一定是患者,母親一定是攜帶者。Y染色質(zhì)檢查Y染色質(zhì)檢查適用于具有一個(gè)或一個(gè)以上Y染色體的個(gè)體或細(xì)胞群。Dys和抗肌萎縮蛋白聚糖等蛋白裝配在一起形成抗肌萎縮蛋白的結(jié)合蛋白復(fù)合物(DAPC)。DAPC形成了一個(gè)穿過肌膜傳遞信號(hào)，連接細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白骨架的重要結(jié)構(gòu)。Dys基因表達(dá)的缺乏會(huì)影響DAPC的形成，使分子橋中斷，至少導(dǎo)致兩個(gè)結(jié)果：第一，細(xì)胞膜變得更脆弱在肌肉離心性收縮的時(shí)候會(huì)被機(jī)械力破壞；第二，框架蛋白，尤其是對機(jī)械力敏感的離子通道將會(huì)失調(diào)。這就是導(dǎo)致疾病的發(fā)生機(jī)制。

DMD---分子遺傳及突變情況DMD患者約30%為自發(fā)性突變，其余的為X染色體隱性遺傳。在各種類型突變中，單個(gè)或多個(gè)外顯子缺失突變患者占65%－70%；無意義或框移造成的點(diǎn)突變占30%，重復(fù)占5%－15%：故DMD突變類型主要為缺失，其特點(diǎn)是Xp21上外顯子缺失的不均一性。

DMD---分子遺傳及突變情況細(xì)胞遺傳學(xué)檢查生物化學(xué)檢查基因診斷DMD---實(shí)驗(yàn)室診斷染色體檢查（X,Y）X染色質(zhì)檢查

X染色質(zhì)的檢查可刮取口腔粘膜、陰道粘膜脫落上皮細(xì)胞，亦可采用絨毛或羊水中胎兒脫落細(xì)胞涂片，經(jīng)硫堇或甲苯胺藍(lán)染色，在光鏡下計(jì)數(shù)X染色質(zhì)數(shù)目。Y染色質(zhì)檢查

Y染色質(zhì)檢查適用于具有一個(gè)或一個(gè)以上Y染色體的個(gè)體或細(xì)胞群。DMD---實(shí)驗(yàn)室診斷生物化學(xué)診斷可對血清酶和蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。血清肌酸激酶（CK）含量在血清酶學(xué)檢查中最有價(jià)值。DMD---實(shí)驗(yàn)室診斷基因診斷DMD---實(shí)驗(yàn)室診斷DMD---風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)DMD家系圖譜DMD為XR遺傳病女性攜帶者中約有1/3血清肌酐正常Ⅱ—2為攜帶者，核型XAXa假設(shè)Ⅲ-1核型為XAXaⅢ-1核型為XAXA前概率1/21/2條件概率1/31聯(lián)合概率1/2×1/31/2后概率1/43/4產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選10~12孕周采集絨毛;次選為15~18孕周采集羊水。選擇絨毛進(jìn)行產(chǎn)前診斷的理由有3條:(1)防止母源污染:DMD和SMA以缺失型突變?yōu)橹?母源污染將導(dǎo)致診斷錯(cuò)誤,發(fā)生血性羊水時(shí)若不經(jīng)培養(yǎng)則直接導(dǎo)致診斷錯(cuò)誤,而絨毛則可通過形態(tài)檢查準(zhǔn)確挑選。(2)早期診斷:如胎兒受累,處理比較方便(夫婦的知情選擇),而且萬一取材失敗或分析中出現(xiàn)問題,還可在稍后時(shí)間取羊水;采集羊水在孕中期,萬一發(fā)生血性污染則需進(jìn)行羊水培養(yǎng),回旋余地太小,重新取樣時(shí)間上比較困難。(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。

產(chǎn)前診斷--時(shí)機(jī)由于基因突變情況復(fù)雜,產(chǎn)前診斷前要進(jìn)行先證者預(yù)分析,以確定其基因突變細(xì)節(jié)及父母基因多態(tài)性標(biāo)記是否提供了雜合狀態(tài)的信息,以確定在該家系中實(shí)行產(chǎn)前診斷的途徑和策略。首先應(yīng)進(jìn)行家系成員21號(hào)染色體上STR標(biāo)記的分析。

該項(xiàng)檢測具備的優(yōu)點(diǎn):一是檢測21三體綜合征,因?yàn)樵诙紊龝r(shí)孕婦年齡普遍偏大,生育21三體綜合征患兒的風(fēng)險(xiǎn)大為提高;二是判斷是否有母源污染及污染程度,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“胎兒材料”完全是母源的情況;三是核對所分析的DNA材料是否存在混亂。后兩點(diǎn)是導(dǎo)致產(chǎn)前診斷差錯(cuò)的主要原因。產(chǎn)前診斷--策略X染色質(zhì)檢查X染色質(zhì)的檢查可刮取口腔粘膜、陰道粘膜脫落上皮細(xì)胞，亦可采用絨毛或羊水中胎兒脫落細(xì)胞涂片，經(jīng)硫堇或甲苯胺藍(lán)染色，在光鏡下計(jì)數(shù)X染色質(zhì)數(shù)目。(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。DMD發(fā)病年齡偏小，起病隱襲，病程長，在男患中癥狀較重，且病死率高，患者常常以肌肉的進(jìn)行性萎縮無力并伴有腓腸肌假性肥大為特征，多在3,5歲發(fā)病，病程進(jìn)展快，大多在20歲左右死于心肺衰竭。它可全面分析DMD基因的79個(gè)外顯子的缺失或重復(fù)突變,擴(kuò)大傳統(tǒng)mPCR方法檢測缺失的范圍,簡便、高效,但技術(shù)條件要求高,成本大。注：在XR病中，男性的致病基因只能從母親傳來，將來只能傳給女兒，不存在從男性向男性傳遞。DMD---分子遺傳及突變情況產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選10~12孕周采集絨毛;次選為15~18孕周采集羊水?；蛑委煟豪貌恢苯右鹑祟惣膊?，免疫原性較小的腺相關(guān)病毒（AAV）為載體，導(dǎo)入人工剪裁的Dys基因。(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。（4）由于男性患者的子女都正常，故可見隔代遺傳；DMD---分子遺傳及突變情況(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。在各種類型突變中，單個(gè)或多個(gè)外顯子缺失突變患者占65%－70%；基因治療：利用不直接引起人類疾病，免疫原性較小的腺相關(guān)病毒（AAV）為載體，導(dǎo)入人工剪裁的Dys基因?？辜∥s蛋白的免疫組化確定胎兒性別

如胎兒為男性,則應(yīng)針對先證者的基因突變或多態(tài)性標(biāo)記進(jìn)行分析,確定胎兒是否獲得突變等位基因;如為女性,則可停止基因診斷,因?yàn)榕噪s合子通常不患病。產(chǎn)前診斷--策略多重PCRSTR-PCR探針連接多重?cái)U(kuò)增(MLPA)變性高效液相色譜(DHPLC)抗肌萎縮蛋白的免疫組化DMD--產(chǎn)前基因診斷方法DMD是以缺失型突變占基因的突變55%~65%,主要分布5′端和中央2個(gè)缺失熱點(diǎn)區(qū),在對其缺失突變熱點(diǎn)區(qū)進(jìn)行基因檢測時(shí),可檢出至少一半患者。它是目前用于缺失型DMD診斷最簡便最有效的方法,已成為D/BMD患者基因診斷及產(chǎn)前基因診斷的首選技術(shù),而且此技術(shù)可根據(jù)檢出缺失外顯子是整碼還是移碼來判斷患者的預(yù)后。產(chǎn)前診斷--缺失型突變檢測方法

多重PCR（5）女性患者的父親一定是患者,母親一定是攜帶者?？祻?fù)治療、矯形治療、社會(huì)心理治療等。產(chǎn)前診斷--缺失型突變檢測方法

多重PCR可對血清酶和蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。DMD---分子遺傳及突變情況它可全面分析DMD基因的79個(gè)外顯子的缺失或重復(fù)突變,擴(kuò)大傳統(tǒng)mPCR方法檢測缺失的范圍,簡便、高效,但技術(shù)條件要求高,成本大。該項(xiàng)檢測具備的優(yōu)點(diǎn):一是檢測21三體綜合征,因?yàn)樵诙紊龝r(shí)孕婦年齡普遍偏大,生育21三體綜合征患兒的風(fēng)險(xiǎn)大為提高;二是判斷是否有母源污染及污染程度,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“胎兒材料”完全是母源的情況;三是核對所分析的DNA材料是否存在混亂。X染色質(zhì)檢查X染色質(zhì)的檢查可刮取口腔粘膜、陰道粘膜脫落上皮細(xì)胞，亦可采用絨毛或羊水中胎兒脫落細(xì)胞涂片，經(jīng)硫堇或甲苯胺藍(lán)染色，在光鏡下計(jì)數(shù)X染色質(zhì)數(shù)目。變性高效液相色譜(DHPLC)首先應(yīng)進(jìn)行家系成員21號(hào)染色體上STR標(biāo)記的分析。目前應(yīng)用STR-PCR技術(shù)進(jìn)行連鎖分析已成為非缺失型DMD家系連鎖分析的首選技術(shù)。DHPLC技術(shù)是通過離子對反向液相色譜分析來區(qū)分異源雙鏈核酸分子及同源雙鏈核酸分子DNA片段,篩查DNA的變化,且不需要放射性同位素及溴化乙啶凝膠,相對高效、經(jīng)濟(jì)、自動(dòng)化程度高。Y染色質(zhì)檢查Y染色質(zhì)檢查適用于具有一個(gè)或一個(gè)以上Y染色體的個(gè)體或細(xì)胞群。DMD---實(shí)驗(yàn)室診斷DHPLC技術(shù)是通過離