葡萄酒中蘋果酸的測定2

葡萄酒中蘋果酸的測定原理:利用MegaQuantTM(專利技術(shù))測定L-蘋果酸需要進行三步酶解反應(yīng)，第一步：在L-蘋果酸脫氫酶(L-MDH)的催化作用下，L-蘋果酸被煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)氧化生成草酰乙酸：(1)L-蘋果酸+NAD+(L-MDH)oxaloacetate+NADH+H+第二步：加入過剩的L-谷氨酸，在谷草轉(zhuǎn)氨酶的作用下，生成L-天門冬氨酸和2–酮戊二酸(2)Oxaloacetate+L-glutamate(GOT)L-aspartate+2-oxoglutarate第三步：在心肌黃酶的催化作用下，NADH還原碘硝基氯化四氮唑(INT)，生成甲基-INT(3)NADH+INT+H+(diaphorase)NAD++甲基-INT生成的甲基-INT的量取決于L-蘋果酸的量，甲基-INT的吸光度值可在505nm下測量。特異性,靈敏度,測量范圍和精確度:該實驗方法是專門用于測定L-蘋果酸含量的。最小可調(diào)吸光光度為0.01個吸光單位，樣品體積為20uL，此時的L-蘋果酸濃度為7.7mg/L。如果最小可調(diào)吸光光度為0.02吸光光度，樣品體積為20uL，此時的L-蘋果酸檢測線為15.4mg/L。尋該實殃驗的鑰測量叼范圍螞為0撤.1號5-蛛15碑ug杰壟L-姑蘋果紐酸(患對于祖20乖uL邊樣品細(xì)液中戒的濃是度為捐0.脹00跌7-繁0.挨75恢g旬/L面)，針同一通樣品嗎分別隱進行聲兩次株測定樣，其岸吸光扶度值舟會有窮0.鐮01窯-0災(zāi).0蹤2吸托光單們位的絡(luò)變化業(yè)，對特于濫樣品深體積筍為崗20證uL破，此故時的辜L-童蘋果戚酸吼濃度裁大約賽在7游.7乎-1腔5.樹4玻m贏g/兔L抽之間擠，如對果樣貓品是授經(jīng)過追稀釋示的，太在計會算結(jié)爹果時控候需羨要乘紙以相皮應(yīng)的遲稀釋頃系數(shù)儉（F鉛）,異如果批在樣蹄品制障備階鋒段，拌樣品塑的重邀量是竿被稱堡量的拖，如地：1惜0g葬/L忽,0服.0斜2-她0.令05圣g/獻10看0g鏈的細(xì)姓微差探別能席夠被扎分辨吸。垂干擾雹:哨紅酒怎中的螞酚醛壞樹脂六會對仁本試壓驗造良成干老擾，起引起曬IN抹T浙的料“互緩慢倒反應(yīng)偽”喝（圖甲2）社，因弓此在里對未括稀釋握的紅刪酒進司行測照定時負(fù)，必?fù)茼毷滋障扔妙^聚乙匙烯聚設(shè)吡咯英烷酮俗（P香VP孔P）把凈化斧樣品蕩。短“剩緩慢澤反應(yīng)遇”腸同樣跪也發(fā)箏生在窗未稀文釋的蒸白葡棵萄酒辛中，偶按照起提供抵的方閃法進繳行測恢定，玻其緩奏慢反種應(yīng)速賽率非匯常的洽慢。費在用洗Me漢ga跨Qu域an搏t要TM挎測定予L-晉蘋果使酸的貿(mào)時候最，對合于存賢在的倆兩種恩潛在眼的次摩要誤嗓差原洞因的尼認(rèn)可冰是非已常有迫必要臂的：喪使用都PV換PP盤去除教了紅劣酒中蝕的大咐部分藝酚醛臉樹脂姐，但牌是還濫是存朵在著詞退“表緩慢索反應(yīng)種”辯，由先于用房PV犁PP觸處理嗽過的我葡萄璃酒（格導(dǎo)致殺潛在居的高洲估白致葡萄表酒中工的L份-蘋鹿果酸旬0.忍00具-0千.0蹤1g勁/L顧，或揪紅葡類萄酒閘中的羽濃度憲0.烘00協(xié)-0憤.0保3g結(jié)/L旁）其嘉中存泉在的綱“惜緩慢車反應(yīng)長”豈非常是的慢祥，因倘此可保以忽瞞略不抓計（蘭實驗甜方法撒A）堵，然朱而，叫如果六想得徒到精未確的酷結(jié)果云，可站以通醋過實啟驗方予法B心精確灣計算化得到中。醉推薦惱使用求PV核PP溜藥片般的測炮試方浩法（呆如每業(yè)5邁m規(guī)L奸葡萄趕酒用越1個術(shù)藥片鋒）中郊，導(dǎo)短致了合對樣侮品濃立度進燥行了型2徒%臂(v趁/v餃)籃稀釋先，計冰算方戶法中餓考慮虹了這撐一點狼（請幻參照僵用P怪VP箱P處躺理樣坡品方靜法）貴還原隊性物換質(zhì)能陪夠干助擾試練驗，稠引起盼“廊緩慢猾反應(yīng)毒”象，如下：亞凱硫酸殃亞和消抗壞成血酸洗鹽，蚊但是屋僅僅成能夠偵對濃件度不嗎是很帶高的歡葡萄牛酒樣付品進師行測擦定，勢如亞靜硫酸務(wù)鹽濃榴度在抹4庫g/的L酬，如鞭果樣竹品中衛(wèi)的抗年壞血最酸鹽痛含量鍋非常軟高灰(>飄4減00榨m脆g/濃L)馳，則絮不能懇進行晴測定述。依向已窗完成養(yǎng)反應(yīng)郵的試肆管中趟添加棕L-遣蘋果誠酸（相每2奉0u乓L添敬加7羨.5本u革g）脾，通跟過增秋加的拖吸光妙度值喘進一受步驗塑證其主他干捉擾的散影響靠，利賄用附級帶的諒內(nèi)部吩的標(biāo)促準(zhǔn)質(zhì)是控可侍以對境干擾醋物質(zhì)筐進行盒鑒定臉。通查過向院樣品輕中添尸加標(biāo)建準(zhǔn)質(zhì)祥控做悄定量滿回收遮試驗?zāi)剑嫴克銟铀蛊吩谛筇幚碚液吞嶙R取時梁的損謊失。變安全犁性魯:貞L-膚蘋果煮酸測務(wù)定所賊使用品的試孤劑沒室有有使毒物搏質(zhì)。售然而普濃縮名緩沖象液中逼含有擾作為熄防腐事劑用菊的疊宮氮化遍鈉追(0繁.0疏2極%列w/男v)讀，需貍要按差照實蠶驗室另安全考操作醒規(guī)程驅(qū)進行掛試驗它。菠試劑距盒冊:來Me仙ga則Qu銀an販t牢TM跌L-蓮蘋果浙酸含醬量測相定試版劑盒壓可以渴進行露60開次的體測定萬試驗鏟，并烘提供臟有全寄部的然試驗殖方法唇：日58肢次測吊定試惕劑盒霸(c溫at混.呢no恩.平K-存LM潔AL越R)遞瓶多1:角嘩雙甘借氨肽盆緩沖駁液射(在10于0告m寬L,潤1疑00恭m母M,槐p急H鹿10癥.0跟)撥+宗L-君谷氨絡(luò)酸(痕10蛾0競m杏M)輪+疊夏氮化宮鈉肯(0轎.0移2矛%送w/外v)霧穩(wěn)定孫性牲>詞2衫年，烘4°誦C喝保存式。池瓶滋2:隆繡藥片堅（6五0粒葉）-糾含有佳心肌范黃酶犧,貢GO唇T,泛I萌NT演,棍FA濃D沿和更NA親D+濤，使勉用前鄙要先展恢復(fù)襯至室拼溫在蛙打開威穩(wěn)定框性銹>蓬2年惠，-廊20失°C街;干挑燥保賴存。莊瓶建3:偷寇L猾-優(yōu)蘋果探酸脫羽氫酶引(伶1.司3次m感L,癥1樓5,噸00印0搞U/蛛mL慚)欠穩(wěn)定甚性栗>雄2浸年，厚4°陵C邊保存翻。膜瓶在4:吳鋤L算-領(lǐng)蘋果耽酸質(zhì)稅控標(biāo)恩準(zhǔn)液價(5濕m井L,餃0澆.蒸37謊5千m螞g/糞mL年)飽穩(wěn)定芒性漿>皆2淺年，腫4°畢C少保存靜。按瓶欠5:葵應(yīng)藥片廳（6傲5粒興）-飯含有柄PV項PP損穩(wěn)定伸性簡>餡5年縱，室拿溫保饞存。共試劑告制備際:1黨.張備用妨試劑量盒中屠的瓶吐1溶擠液隨孩時使壤用。學(xué)每個簡試驗迫用量惡1.考5沫m劫L汽，也哭可以瓜同等勒量的刑蒸餾至水稀疤釋，枯然后誘每個緩試驗濃用3撐m濟L決。嶼2.宇抖備用曉試劑任盒中挖的瓶掘2隨翅時使嫁用。通保存誰于儲-2靜0°翅C搬下穩(wěn)衣定性鳥>汽2道年。漁3.朱瀉準(zhǔn)備葉瓶3野中的槳溶液綱，第棟一次搞打開閱前，拖需要淡充分扒晃動背瓶子覆，不役要讓把酶吸芒附在三橡皮煮塞上摩，然奏后垂傅直存憲放好扮瓶子歲。每寇次使他用前備還需信要充避分混燈合其優(yōu)中的侄內(nèi)溶胖物。乓4.蠟嚼備用哄試劑任盒中娘的瓶偏4溶舌液隨們時使有用。薦使用冤前恢傳復(fù)到順室溫厘，每理個試對驗用立量2劇0u宿L森5.旗畜準(zhǔn)備述瓶5概溶液澤隨時努使用片。升注意犁:首當(dāng)您岡懷疑惹分光辰光度但計的拼準(zhǔn)確瞇性或壤懷疑鈔樣品由中的杏物質(zhì)啞抑制槳了試庸驗，虛再使姥用L湯-蘋訴果酸廢標(biāo)準(zhǔn)紙質(zhì)控重溶液幅進行扁測定凡，通煌過提包供的找公式勒計算宰L-厭蘋果死酸的拴濃度母。面實驗姐需要于的設(shè)驢備報:隊1.花辰檢測場儀中江提供繳有特旬定的狂測試落用試飯管狹(李平底宵;富16塔x擦1袍00瓶m斗m)壇，同旁時我因們也婦提供嫩提取棉用試預(yù)管圣(c縫at猜.容no扛.茶G-研MQ你TB逝25勝)恢2.默1莖0知mL膠聚丙插烯試壞管味3.估之微量廟移液素器坡(斥20蹦u驕L)光.晌4.康剪連續(xù)螞分配續(xù)器壓5.庸棟玻璃鍵刻度謙移液譜管及芳吸球床6.刷M挎eg組aQ丘ua醒nt瞇TM悔測定看儀桶7.蒼億定時直鐘旱注意饑:饒此方省法是姓專門北用于渴測定損經(jīng)過德蘋果界乳酸旺發(fā)酵股的葡茄萄酒節(jié)，如丸果葡帽萄酒庭中的帶L-施蘋果基酸濃宮度造>垃0.罰75隨g敗/曾L彩，需伏要對跳樣品批進行撤稀釋誠。橋稀釋摧葡萄盜酒或殊葡萄友汁必嫁須使車用純教凈水孟（蒸看餾水錦或高敢質(zhì)量廊的水滿），御如果琴使用鑰飲用播水，啟首先悔需要法用熱D-獲果糖諒標(biāo)準(zhǔn)煎品驗養(yǎng)證是蹈否適俘合使牛用。自測試姨用試司管使沃用前薯必須沃清洗精干凈謊并烘騰干。漂操作棒步驟般:升去除波酚醛賊樹脂劫:神(拐對于務(wù)紅酒通通常當(dāng)需要銀進行感處理城)寬取昂5譽mL蝕紅葡蹦萄酒冤加入腐到忌10復(fù)m旦L覽的聚腎丙烯丘試管辯中出加入蹈1片膝PV間PP崗藥片銹（瓶滔5）零，擰古緊試穿管蓋戀，充尚分混遵合5點分鐘銜，用由Wh溜at撇ma都n辟No壇.瑞1卵(9愈c姐m)墊濾紙宅過濾爛，收蘋集大紹約兩1軟mL朝的濾描液，膽濾液仔的顏李色不鄰能深嫂于淺抵粉色諒（一映般處離理法瘦），鍵然而努，具昏有深經(jīng)顏色悲的葡靜萄酒趁每天5象mL栗需要雷加入倘2片且PV防PP除，充饑分?jǐn)D再壓收載集濾廁液1患m貴L哀。壺取2茄0u惑L濾爬液進銳行測湯定垂A.熔情測試綢方法身A.殖(寬簡單鐮法蜂–縮參照園圖1傭)懂取瓜1.朗5命mL星石溶液倚1答(蔑~責(zé)23巴°C列或更峰高這)鍵和資1.映5專mL聲蒸餾咸水加敘入到匪測試掃管中盡，或犯取元3.著0沃mL賺用等吐體積諷蒸餾斧水稀脂釋的研溶液凱1（萍參照移試劑限配置銅方法毛第1刮點）回。策用提疊供的羞鑷子遺夾取筐1片娃藥片襪（瓶步2）欠，充版分混去合1癢-2慘分鐘想至完逢全溶圣解。惱加入畢20體uL簡葡萄閑酒樣翅品艱[惠經(jīng)但PV唱PP眾處理對的追(須未稀嘗釋的敗紅/蘇白葡勉萄酒埋),斷狂未經(jīng)呢PV闊PP昏處理緊的屯(洪未稀籠釋的誦白葡袖萄酒冤)記或經(jīng)嚴(yán)稀釋跟的葡抵萄酒適或葡攤萄汁史]鵝，充龍分振橡蕩混基合。汪大約繩1分河鐘后墨，將慢試管加插入側(cè)到集Me豐ga適Qu摸an尾t鬼TM撫測定宜儀，茶按下旦開關(guān)我直到媽屏幕辜上顯天示蕉‘-萄--乳’睜（大墨約2律秒鐘盟）。弱當(dāng)屏隔幕上鋪出現(xiàn)秧“麗0.廢00番”職松開西開關(guān)銅（表情示A察1）申取下朗試管鮮，加籃入2混0u習(xí)L瓶忽3溶俗液（假L-動蘋果搭酸脫瓦氫酶激），生充分均混勻稈確保鍋全部臟全部慕溶解慕，同假時記哈錄時音間。清再次輸將試以管插顧入屬Me煌ga包Qu捕an購t球TM搭測定搏儀，正5分備鐘后曬按下抬開關(guān)藝直到階屏幕涉上顯枝示促‘街1萬se竿co躲n嘴d刃’胳,記兔錄下鞏數(shù)值鉤A2互。炮為了舒確保蛋試劑智完全役反應(yīng)芹完全慮，在津5分質(zhì)鐘內(nèi)宗每間攀隔1訪分鐘隙讀取腫一下俯數(shù)值趟，直太到每鈔間隔防1分曠鐘數(shù)肯值不莊再變來化。輩（參降考圖勒1和卷圖2蒜）權(quán)注意寺:腿如果鳳數(shù)值塞A2對蘇>兼1.誠00瓦，1借0倍刷以上多稀釋伸樣品約，并秒再次閱測定鴨，如浙果數(shù)丹值甜A2撤<視0酒.1療0浮，樣艇品不化要進錄行過仗分稀李釋（煮將1篇00膏倍稀涼釋改業(yè)為1夸0倍貫稀釋評）。劇由于好IN舌T對恰光有蛋敏感命性（睬顯色部劑在暫藥片夢中）虹，長古時間傲的反愚應(yī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