生化檢測系統(tǒng)性能驗證演示文稿

生化檢測系統(tǒng)性能驗證演示文稿當(dāng)前第1頁\共有67頁\編于星期二\12點生化檢測系統(tǒng)性能驗證當(dāng)前第2頁\共有67頁\編于星期二\12點什么是性能評價？

自行研究或開發(fā)了一個檢測方法，為了使方法的檢測結(jié)果符合臨床要求，必須對方法的性能作詳細(xì)而全面的實驗，這時的實驗是對性能的評價。通常是生產(chǎn)廠家完成。當(dāng)前第3頁\共有67頁\編于星期二\12點什么是性能驗證？

對他人或廠商的評價資料中的幾個主要性能進行證實。

通常由實驗室自己完成。當(dāng)前第4頁\共有67頁\編于星期二\12點性能驗證試驗

對配套系統(tǒng)，一般驗證下列指標(biāo)：

―準(zhǔn)確度(accuracy)---EP15-A―精密度(precision)---EP5-A2―線性范圍（linearrange)---EP-6―可報告范圍(reportablerange)---EP-6―參考區(qū)間(referenceinterval)---C28-A2

對非配套系統(tǒng)，驗證更為廣泛。當(dāng)前第5頁\共有67頁\編于星期二\12點什么時候做性能驗證試驗？1.方法或系統(tǒng)首次在實驗室使用；

2.EQA或PT結(jié)果未通過，采取糾正措施后；

3.達到文件規(guī)定周期當(dāng)前第6頁\共有67頁\編于星期二\12點做性能驗證時首先滿足的實驗條件儀器的維護保養(yǎng)儀器校準(zhǔn)室內(nèi)質(zhì)控試劑、校準(zhǔn)品（有效期、批號等）人員（SOP）

保證儀器在最佳狀態(tài)當(dāng)前第7頁\共有67頁\編于星期二\12點一.精密度驗證實驗當(dāng)前第8頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念

測量精密度(measurementprecision)

在規(guī)定條件下，對同一或相似被測對象重復(fù)測量得到測量示值或測得量值間的一致程度。

1.測量精密度通常由不精密度的量度以數(shù)字表達，如規(guī)定測量條件下的標(biāo)準(zhǔn)差、方差和變異系數(shù)。

2.規(guī)定的條件可以是測量的重復(fù)性條件、測量的中間精密度條件或測量的再現(xiàn)性條件。

3.測量精密度用于定義測量重復(fù)性、中間測量精密度和測量再現(xiàn)性。當(dāng)前第9頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念測量重復(fù)性在一組測量條件下的測量精密度，包括相同測量程序、相同操作者、相同測量系統(tǒng)、相同操作條件和地點，并且在短時間段內(nèi)對同一或相似被測對象重復(fù)測量。

1.在臨床化學(xué)上，即所謂的批內(nèi)精密度。

2.在評估體外診斷醫(yī)療器械時，通常重復(fù)性條件來代表基本不變的測量條件（被稱為重復(fù)性條件），產(chǎn)生的測量結(jié)果是最小變異。3.重復(fù)性信息可對故障排除目的有用處。

當(dāng)前第10頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念測量再現(xiàn)性：在包括了不同地點、不同操作者、不同測量系統(tǒng)的測量條件下對同一或相似被測對象重復(fù)測量的測量精密度。

1.在臨床化學(xué)上，即所謂的室間精密度。

2.在評估體外診斷醫(yī)療器械時，通常再現(xiàn)性條件代表了最大改變的條件（被稱為再現(xiàn)性條件），產(chǎn)生于獨立實驗室間比較結(jié)果時遇到的測量結(jié)果變異，如發(fā)生在室間比對計劃中（例如，能力比對）。

當(dāng)前第11頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念3.不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。

4.應(yīng)在實際程度上給出改變或不改變條件的說明。當(dāng)前第12頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念中間精密度在一組測量條件下的測量精密度，這些條件包括相同的測量程序、相同地點并且對相同或相似的被測對象在一長時間段內(nèi)重復(fù)測量，但可包含其它相關(guān)條件的改變。

1.應(yīng)在實際程度規(guī)定改變和未改變的條件，特別是如校準(zhǔn)物、試劑批號、設(shè)備系統(tǒng)、操作者和環(huán)境條件等變量。

2.在體外診斷醫(yī)療器械評價中，一般中間精密度條件代表醫(yī)療器械在一長時間段內(nèi)的實際使用條件。當(dāng)前第13頁\共有67頁\編于星期二\12點文件依據(jù)CLSI（原NCCLS）頒布的EP5-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準(zhǔn)指南第二版》當(dāng)前第14頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗方法批內(nèi)精密度在相同的測量條件下，在最短時間內(nèi)（常是在同一測量批次內(nèi)）對同一樣品測量20次，由此計算出批內(nèi)精密度。當(dāng)前第15頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗方法批間精密度在一段時間內(nèi)（一般為連續(xù)20個工作日）對同一樣品（常為質(zhì)控品），每天測定一次，每次測定雙份，由此計算出批間精密度。如果時間緊，也可改為測5日，每天分2批進行，每批重復(fù)測定2次，每次至少間隔2h，每個濃度每天能獲得4個數(shù)據(jù)。由此計算出總精密度。當(dāng)前第16頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗樣本的選擇1.實驗樣本要穩(wěn)定，其基質(zhì)組成應(yīng)盡可能與臨床樣本相似。一般常采用臨床實驗室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的血清；

2.實驗樣本的濃度盡可能選擇與廠商聲明性能相近的濃度或接近該項目醫(yī)學(xué)決定水平的濃度。

3.通常選擇穩(wěn)定性好的、血清基質(zhì)的質(zhì)控物作為實驗樣品。當(dāng)前第17頁\共有67頁\編于星期二\12點樣本濃度的選擇1.精密度大小和樣品濃度有關(guān)樣品濃度高時，雖然標(biāo)準(zhǔn)差的絕對值較大，但變異系數(shù)往往變小。所以評估精密度時，建議評估高低二個濃度的精密度。當(dāng)二個濃度的精密度有顯著差異時，建議增加為三個濃度。當(dāng)前第18頁\共有67頁\編于星期二\12點樣本濃度的選擇2.所選濃度應(yīng)在測量范圍內(nèi)有醫(yī)學(xué)意義的值，即至少有一個濃度在醫(yī)學(xué)決定水平(medicaldecisionlevels)左右。

不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。也不應(yīng)選用靠近最低檢出限的樣品，此時所得的精密度往往偏大。如沒有醫(yī)學(xué)決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度。此外再根據(jù)檢驗項目的性質(zhì)在線性區(qū)間內(nèi)選擇一個值。當(dāng)前第19頁\共有67頁\編于星期二\12點試劑和校準(zhǔn)品的要求

在整個階段，盡可能使用相同條件，應(yīng)使用同一種類同一批號的試劑和校準(zhǔn)物，如有可能，只進行一次校準(zhǔn)。使用不同批號試劑和多次校準(zhǔn)都會增加檢驗結(jié)果的變異程度。當(dāng)前第20頁\共有67頁\編于星期二\12點質(zhì)量控制

檢驗時應(yīng)同時至少測一個質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)定的失控限，不論實驗結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進行試驗以取得實驗數(shù)據(jù)。要保存所有的質(zhì)控數(shù)據(jù)和失控處理記錄。當(dāng)前第21頁\共有67頁\編于星期二\12點在正式實驗前操作者應(yīng)熟練掌握1.操作程序

2.保養(yǎng)程序

3.樣本準(zhǔn)備

4.校準(zhǔn)及檢測程序

當(dāng)前第22頁\共有67頁\編于星期二\12點數(shù)據(jù)收集

分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。離群值的標(biāo)準(zhǔn)：任何結(jié)果和總均值的差超過4個標(biāo)準(zhǔn)差。為了能收集到至少20個有效數(shù)據(jù)，除補充由于質(zhì)控失控而增加的測試外，還應(yīng)再增加由于離群值不用于精密度的計算所需增加的檢驗次數(shù)。當(dāng)前第23頁\共有67頁\編于星期二\12點數(shù)據(jù)收集

進行批內(nèi)精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，當(dāng)不接受數(shù)據(jù)超過2個，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時應(yīng)不用此次試驗數(shù)據(jù)，檢查問題和解決問題后重新開始新的評估實驗。*必須保留任何離群值和室內(nèi)質(zhì)控失控的記錄。當(dāng)前第24頁\共有67頁\編于星期二\12點結(jié)果分析

計算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。從CLIA’88允許誤差表中查閱評價的該項目的允許誤差范圍。

當(dāng)前第25頁\共有67頁\編于星期二\12點判斷標(biāo)準(zhǔn)批內(nèi)精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。批間精密度—CV值要求低于1/3CLIA’88允許誤差。當(dāng)前第26頁\共有67頁\編于星期二\12點CLIA’88允許誤差范圍不涉及的項目：

EQA的允許誤差試劑說明書提供當(dāng)前第27頁\共有67頁\編于星期二\12點二.正確度驗證實驗當(dāng)前第28頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念準(zhǔn)確度（accuracy）指檢測結(jié)果與被測量真值之間的一致程度。正確度（truness）指大批檢測結(jié)果得到的平均值與真值的一致程度。通常用統(tǒng)計量“偏倚”來表示。偏倚（bias）指測量結(jié)果的預(yù)期值與可接受值間的差異。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。當(dāng)前第29頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念誤差（error）指對于真值或?qū)τ诳山邮艿?、預(yù)期真值或參考值的偏離，分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差?？傉`差（totalerror）指某實驗室用某方法在多次獨立檢驗中分析某樣品所得各個結(jié)果值與靶值之差在一定置信區(qū)間內(nèi)的最大值。包括隨機誤差和系統(tǒng)誤差，是不準(zhǔn)確度的估計值。當(dāng)前第30頁\共有67頁\編于星期二\12點文件依據(jù)CLSI頒布的EP15-A文件《用戶對精密度和準(zhǔn)確度性能的核實指南》當(dāng)前第31頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗方法參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)評測定具有溯源性的校準(zhǔn)物質(zhì)

當(dāng)前第32頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗程序

對權(quán)威機構(gòu)提供的室間質(zhì)控物進行檢測，檢測結(jié)果與已知靶值和可接受限進行比較。當(dāng)前第33頁\共有67頁\編于星期二\12點定值參考物來源1.已用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人血清或其他一些未摻入成分的人物質(zhì)；2.從能力比對試驗中獲得的參考物；3.廠家提供的正確度確認(rèn)物或質(zhì)控物；4.實驗室室間質(zhì)評物；5.由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質(zhì)。當(dāng)前第34頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗程序

選擇適合評價的檢驗方法最易獲得的材料。至少要求測定2個水平，選擇的水平應(yīng)能代表方法的最低和最高測量范圍。實驗前充分混勻分析物，用實驗方法重復(fù)測定2次，將檢測結(jié)果與說明書標(biāo)示值或靶值進行比對，計算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評價標(biāo)準(zhǔn)，偏倚小于CLIA’88的1/2，認(rèn)為檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。當(dāng)前第35頁\共有67頁\編于星期二\12點三.線性范圍及可報告范圍驗證實驗當(dāng)前第36頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念線性范圍（linearrange)使實驗系統(tǒng)的最終分析結(jié)果為可接受的線性的濃度范圍，此時非線性誤差應(yīng)低于允許誤差。線性（linearity）在給定的測量范圍內(nèi)，使測定結(jié)果與樣本中分析物的量直接成比例的能力。當(dāng)前第37頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念分析測量范圍（analyticalmeasurementrange）是方法直接測量標(biāo)本，而不需要任何的稀釋、濃縮或者其它預(yù)處理等過程下，測量結(jié)果總誤差符合要求的分析物濃度的范圍。臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標(biāo)本的稀釋、濃縮或者其他預(yù)處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍。當(dāng)前第38頁\共有67頁\編于星期二\12點文件依據(jù)CLSI頒布的EP6-A文件《定量測量方法的線性評價》當(dāng)前第39頁\共有67頁\編于星期二\12點儀器要求

應(yīng)有較好的測定精密度不存在明顯的攜帶污染等。對儀器應(yīng)進行定期維護及校準(zhǔn)，保證其處于正常狀態(tài)。當(dāng)前第40頁\共有67頁\編于星期二\12點試劑及校準(zhǔn)品要求試劑應(yīng)注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。校準(zhǔn)品可采用與評價試劑配套的校準(zhǔn)品。校準(zhǔn)品的使用應(yīng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明，儀器校準(zhǔn)步驟與間隔應(yīng)按照本室的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進行。當(dāng)前第41頁\共有67頁\編于星期二\12點樣品類型的選擇為避免基質(zhì)效應(yīng)對結(jié)果的影響，選用的樣品應(yīng)與臨床實驗樣品相似。不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應(yīng)包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。當(dāng)前第42頁\共有67頁\編于星期二\12點線性范圍樣品制備1.收集臨床檢測過程中的高值樣品即濃度接近預(yù)期測定上限的患者血清（H）和低值樣品(L)，若收集不到低值樣品，可用生理鹽水或蒸餾水替代。

2.將H和L樣品按：1L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、1H關(guān)系各自配制(必要時可改變比例)混合，形成系列評價樣品。當(dāng)前第43頁\共有67頁\編于星期二\12點線性范圍樣品測定

進行線性范圍確立時，應(yīng)進行7-11個濃度水平的樣品測定，每個樣品重復(fù)測定2-4次；進行線性范圍驗證時，應(yīng)進行5個濃度水平的樣品測定，并在1個批次測量中完成實驗，每個樣品至少重復(fù)測定2次，測量次序為隨機；如果測定方法本身存在明顯的攜帶污染，應(yīng)根據(jù)實際情況采取恰當(dāng)措施盡量避免對測定結(jié)果的影響。當(dāng)前第44頁\共有67頁\編于星期二\12點線性范圍結(jié)果分析以預(yù)期值為橫坐標(biāo)，以實測值為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得到直線回歸方程Y＝aX+b，a在0.97～1.03范圍內(nèi)，r2≥0.95。

當(dāng)前第45頁\共有67頁\編于星期二\12點可報告范圍樣品測定

收集接近線性范圍上限的病人標(biāo)本血清。實驗操作時，以生理鹽水或蒸餾水為稀釋介質(zhì)，每個稀釋濃度檢測兩次，取平均值與理論值進行比較。當(dāng)試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時，可直接驗證該建議的稀釋度即可，不必驗證其它倍數(shù)。如沒有給出建議的稀釋度，則根據(jù)工作實際需要稀釋。當(dāng)前第46頁\共有67頁\編于星期二\12點可報告范圍判斷指標(biāo)及判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷指標(biāo)：R=檢測均值/預(yù)期值*100%判斷標(biāo)準(zhǔn)：80%≤R≤120%，則偏倚在允許誤差范圍之內(nèi)。當(dāng)前第47頁\共有67頁\編于星期二\12點四.分析靈敏度驗證實驗當(dāng)前第48頁\共有67頁\編于星期二\12點基本概念檢測低限（LLD）指樣品單次檢測可以達到的非空白檢測響應(yīng)量對應(yīng)的分析物量。功能靈敏度（FS)指檢測系統(tǒng)可定量報告分析物的最低濃度?？瞻紫蓿↙oB)指在規(guī)定的可能性條件下，空白樣品被觀察到的最大檢測結(jié)果。檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。當(dāng)前第49頁\共有67頁\編于星期二\12點文件依據(jù)CLSI頒布的EP-17A文件進行靈敏度性能評價。當(dāng)前第50頁\共有67頁\編于星期二\12點功能靈敏度實驗程序?qū)⑿?zhǔn)品或質(zhì)控品稀釋后，在儀器上分別對不同濃度的樣品連續(xù)測定20次，計算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)，以不精密度（CV）≤20%時對應(yīng)檢測限樣品具有的平均濃度即為功能靈敏度。當(dāng)前第51頁\共有67頁\編于星期二\12點五.抗干擾驗證實驗當(dāng)前第52頁\共有67頁\編于星期二\12點樣本選擇選取臨床混合血清1例。不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應(yīng)盡量選擇該項目正常參考區(qū)間內(nèi)的濃度。當(dāng)前第53頁\共有67頁\編于星期二\12點干擾物的確定根據(jù)臨床樣品的特點，實驗所選干擾物為：結(jié)合膽紅素、游離膽紅素、脂肪乳、維生素C(Vc)、血紅蛋白。當(dāng)前第54頁\共有67頁\編于星期二\12點樣本制備

將每一系列的干擾樣品根據(jù)實驗要求配制成4個不同濃度的樣本血清，按照從低—高、高—低循環(huán)測定5遍，計算每個濃度下的均值與未添加干擾物的樣品的相對偏差，并求取重復(fù)性的變異系數(shù)。當(dāng)前第55頁\共有67頁\編于星期二\12點判斷標(biāo)準(zhǔn)

當(dāng)相對偏差不超過±15%，重復(fù)性變異系數(shù)不超過10%時，可認(rèn)為對應(yīng)的干擾物濃度對測定結(jié)果無影響。當(dāng)前第56頁\共有67頁\編于星期二\12點

六.參考區(qū)間驗證實驗當(dāng)前第57頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗?zāi)康?

驗證已知參考區(qū)間在本實驗室應(yīng)用的可接受性。當(dāng)前第58頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗方法1.從健康人群中抽出20個參考個體（最好能夠覆蓋各個年齡段）;2.依照實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程檢測樣本;3.發(fā)現(xiàn)離群值應(yīng)棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結(jié)果不含離群值;當(dāng)前第59頁\共有67頁\編于星期二\12點實驗方法4.如果20例參考個體中不超過1例（5％的結(jié)果）的檢測值在參考區(qū)間外，則已知的參考區(qū)間可以接受。若2例以上超出界限，再選擇20個參考個體進行驗證，若少于或等于1個檢測值超過已知參考限，則已知參考區(qū)間可以接受。若又有2個以上超出參考限，則就應(yīng)該重新檢查所用的分析程序，考慮兩個樣本總體生物學(xué)特征上可能存在差異，并且考慮是否按照大規(guī)模研究指南建立自己