定性免疫學(xué)檢驗(yàn)的性能驗(yàn)證與質(zhì)量控制(牛廣華)

定性免疫學(xué)檢驗(yàn)的性能驗(yàn)證與質(zhì)量控制

ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心ISO15189認(rèn)可中大家到困惑的問題

定性免疫項(xiàng)目如：

ELISA檢測、自身抗體免疫印跡試驗(yàn)、抗核抗體免疫熒光（IIF）檢測質(zhì)量控制和性能驗(yàn)證及驗(yàn)證內(nèi)容？如何做？標(biāo)準(zhǔn)？2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座22021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座3ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心5.5.1.1檢驗(yàn)方法和程序的分析性能驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)參考試劑盒說明書上明確標(biāo)示的性能參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，至少應(yīng)包括：檢出限、符合率（采用國家標(biāo)準(zhǔn)血清盤或臨床診斷明確的陰陽性樣品各20份或與其他分析方法比對），如為定量方法應(yīng)驗(yàn)證精密度（包括重復(fù)性和中間精密度）；并應(yīng)明確檢驗(yàn)項(xiàng)目的預(yù)期用途，如篩查、診斷、確認(rèn)。5.5檢驗(yàn)程序CNAS-CL39：2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明-2014改版2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座4ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心試劑盒說明書（先決條件?。﹪H和／或國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)性能驗(yàn)證的合格標(biāo)準(zhǔn)從何而來？2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座52021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座62021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座7ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心篩查試驗(yàn)診斷試驗(yàn)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)C50C5C95概念準(zhǔn)備2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座8ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心篩查試驗(yàn)用于檢測整個(gè)人群或部分人群中分析物的存在情況。

一般而言，篩查試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)具有較高的臨床敏感性（即臨床檢出率大于95%），對其特異性的要求（和陽性預(yù)測值）則取決于對各種因素的綜合考慮。

如糞便隱血檢測

篩查試驗(yàn)2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座9ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心用于臨床懷疑某種特定疾病或狀況是否存在。

診斷試驗(yàn)需具有良好的敏感性和特異性。

診斷試驗(yàn)后如需進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，對診斷試驗(yàn)的特異性要求可以稍微降低。如各種微生物培養(yǎng)診斷試驗(yàn)2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座10ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心確認(rèn)試驗(yàn)用于驗(yàn)證篩查試驗(yàn)或者診斷試驗(yàn)結(jié)果的確認(rèn)。

對于確認(rèn)試驗(yàn)，特異性比敏感性更為重要。

如梅毒密螺旋體抗體熒光吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）確認(rèn)試驗(yàn)2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座11ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心一份樣本，在多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中各有50%的幾率獲得陽性或陰性的結(jié)果時(shí)該分析物的濃度。臨界點(diǎn)（C50）濃度的定義C502021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座12ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心這里的C50指的是一個(gè)處于試劑檢測臨界點(diǎn)的樣本濃度，其一旦確定，是不變的。試劑盒CUT-OFF值指的是一個(gè)判斷某一次測定結(jié)果的由陰性和陽性對照信號值按一定公式計(jì)算出來的信號值，每次測定都會(huì)有所差異。C50與試劑盒陽性反應(yīng)判斷值（CUT-OFF值）的區(qū)別2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座13ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心一份樣本，在多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中有95%的幾率獲得陰性結(jié)果時(shí)該分析物的濃度。C5濃度的定義C52021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座14ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心一份樣本，在多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中有95%的幾率獲得陽性結(jié)果時(shí)該分析物的濃度。C95濃度的定義C952021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座15ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心應(yīng)熟悉待驗(yàn)證的試劑或系統(tǒng)進(jìn)行必要的培訓(xùn)，包括樣本的處理和儲存、試劑的處理和儲存、合理的檢測方案、對結(jié)果合理的解釋以及系統(tǒng)的質(zhì)量控制等。制定質(zhì)量保證計(jì)劃確定患者樣本的數(shù)量及強(qiáng)弱（評價(jià)重復(fù)性）確定比較的方法性能驗(yàn)證專業(yè)知識技能準(zhǔn)備2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座16ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心質(zhì)控品：可為商品質(zhì)控品，有陽性和陰性。C50和可能的C5（低于C50濃度20%）及C95濃度樣本（高于C50濃度20%）：用于重復(fù)性及最低檢出限驗(yàn)證，不少于40次檢測量）臨床樣本或血清盤（準(zhǔn)確性驗(yàn)證）（不少于50份陽性和陰性樣本）樣本準(zhǔn)備2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座17ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心進(jìn)行重復(fù)性研究時(shí)，理想情況下需繪制在規(guī)定條件下候選方法的整個(gè)不精密度曲線，然而具體操作時(shí)需要檢測的樣本數(shù)量較大可使用一個(gè)簡單的方法，即為待評價(jià)的檢測方法建立分析物的臨界濃度，并判定某一特定濃度范圍，例如C50±20%，是否包含了C5-C95區(qū)間。若-20%到+20%濃度范圍包含了C5-C95區(qū)間，那么20%或距離C50更遠(yuǎn)濃度的樣本將得到一致的檢測結(jié)果，即在C5-C95區(qū)間之外的樣本檢測結(jié)果可認(rèn)為是精密的，濃度>C95，將持續(xù)得到陽性結(jié)果，濃度<C5，將持續(xù)得到陰性結(jié)果。

±20%僅用于舉例，實(shí)驗(yàn)室也可根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康暮涂山邮艿木芏冗x擇±10%或±30%。分析物濃度接近C50的定性方法精密度試驗(yàn)2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座18ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心評價(jià)定性檢測試劑或系統(tǒng)精密度時(shí)，需采用濃度接近臨界值的分析物作為檢測材料，不宜采用陰性低值或強(qiáng)陽性樣本來評價(jià)定性檢測方法的不精密度。定性測定精密度分析質(zhì)量指標(biāo)為C5-C95濃度區(qū)間（亦即“灰區(qū)”），這一區(qū)間范圍≤C50±20%。只提供兩種檢測結(jié)果(-/+)的定性檢測的精密度2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座19ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心分析物濃度接近臨界值時(shí)的不精密度曲線2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座20ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心兩種不同方法的不精密度曲線比較2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座21ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心檢測試劑或系統(tǒng)的說明書可能會(huì)注明分析物的臨界濃度，但需驗(yàn)證。如果臨界濃度未知，則可以將陽性樣本進(jìn)行一系列稀釋，然后將他們進(jìn)行重復(fù)檢測以確定能夠獲得50%陽性和50%陰性結(jié)果的那個(gè)稀釋度。這一稀釋度的分析物濃度即為臨界點(diǎn)（C50）。如何獲得系統(tǒng)或試劑的“臨界點(diǎn)（C50）”CLSIEP12-A2UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;ApprovedGuideline2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座22ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心C50是否準(zhǔn)確？2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座23ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心不同C50重復(fù)檢測次數(shù)與檢出陽性數(shù)的關(guān)系2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座24ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心如何獲得系統(tǒng)或試劑的“臨界點(diǎn)（C50）”2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座25ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座26ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心制備評價(jià)用樣本

制備3份樣本。一份濃度為C50，一份為C50+20%，一份為C50-20%。每份樣本的體積需保證40次或更多次重復(fù)檢測的需要。評價(jià)方法

每份樣本檢測40次，確定每一份樣本結(jié)果為陽性和陰性的百分比。

試驗(yàn)步驟2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座27ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心-20%～+20%濃度范圍在C5-C95區(qū)間之內(nèi)；用該方法檢測，濃度超過C50±20%的樣本檢測結(jié)果不一致；此結(jié)論錯(cuò)誤率5%，需使用更寬濃度范圍的樣本（如±30%）進(jìn)行另外的試驗(yàn)。結(jié)果判斷-12021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座28ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心-20%～+20%濃度范圍包含了C5-C95區(qū)間；用該方法檢測，濃度超過C50±20%的樣本檢測結(jié)果一致結(jié)果判斷-22021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座29ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心用該方法檢測，C50+20%的樣本檢測結(jié)果一致，C50-20%的樣本不一定能得到一致結(jié)果；需要用低于C50更大百分率濃度的樣本（如-30%）進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)。結(jié)果判斷-32021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座30ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心用該方法檢測，C50-20%的樣本檢測結(jié)果一致，C50+20%的樣本不一定能得到一致結(jié)果；需要用高于C50更大百分率濃度的樣本（如+30%）進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)。結(jié)果判斷-42021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座31ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心檢測限（limitofdetection）是指檢測方法可檢測出的最低被測量濃度，也稱檢測低限（lowerlimitofdetection）或最小檢出濃度（minimumdetectableconcentration），有時(shí)也稱為分析靈敏度（analyticalsensitivity）。如前所述，分析物濃度位于C5-C95區(qū)間之外（小于C5或大于C95）時(shí)，候選方法對同一樣本的重復(fù)性檢測將得到相同結(jié)果。因此，C95代表了某一試劑可以測出的最低被測量濃度。檢出限的驗(yàn)證2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座32ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心評估試劑分析敏感性所使用的樣本，如檢測項(xiàng)目有國家參考品，則可使用國家參考品或經(jīng)國家參考品標(biāo)化的參考品進(jìn)行檢測，如沒有國家參考品，則使用可以溯源或量化的樣本，如國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或與國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溯源的樣本，是更有意義的。處于測定下限濃度（如C95）的樣本，重復(fù)檢測20次，應(yīng)至少有18次以上為陽性反應(yīng)。檢出限的驗(yàn)證2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座332021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座34ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心概述特定的定性免疫測定系統(tǒng)或試劑的準(zhǔn)確度以與臨床診斷、金標(biāo)準(zhǔn)方法和經(jīng)過驗(yàn)證確認(rèn)血清樣本盤的檢測比較來評價(jià)，常以敏感性（包括臨床敏感性）/特異性（包括臨床特異性）和陽性符合率/陰性符合率來表示。準(zhǔn)確度驗(yàn)證2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座35ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心臨床敏感性：在患有明確臨床疾病的患者中，其檢測結(jié)果呈陽性或者超過正常值范圍的比率（即出現(xiàn)陽性結(jié)果和確定患者患?。蛔ⅲ涸撆R床疾病必須由不依賴于被評價(jià)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)確定。

臨床特異性：在沒有特定臨床疾病的患者中，其檢測結(jié)果呈陰性或者在正常值范圍內(nèi)的比率。臨床特異性和臨床敏感性2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座36ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心研究人群有一些研究的人群，僅包括健康人群和疾病嚴(yán)重的人群，而忽略了介于兩種狀態(tài)之間的人群和一些不典型的患病人群。將這部分人群剔除在研究人群之外，會(huì)優(yōu)化評價(jià)的結(jié)果，造成試劑在實(shí)際應(yīng)用當(dāng)中結(jié)果簡單明確的假象。因此，研究人群最好符合以下要求：

——涵蓋疾病的各個(gè)階段；——涵蓋一些不典型的、較難診斷的患病人群；——各組不同特征的人群均需有一定的數(shù)量。總之，研究的人群要能夠代表該檢測系統(tǒng)或試劑預(yù)期使用的人群，否則給出的數(shù)據(jù)將存在偏倚。臨床特異性和臨床敏感性2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座37ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心陽性結(jié)果的可靠性（‘預(yù)示值’）：即測定為陽性的標(biāo)本實(shí)際上為陽性的可能性。=[真陽性/（真陽性+假陽性）]×100%陰性結(jié)果的可靠性:則為一份給出陰性結(jié)果的樣本實(shí)際上為陰性的可靠性。=[真陰性/（真陰性+假陰性）]×100%臨床特異性和臨床敏感性2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座38ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心表1:敏感性、特異性和陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值的計(jì)算2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座39ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心作為篩查試驗(yàn)，檢測的敏感性應(yīng)>95%。作為診斷試驗(yàn)，檢測敏感性和特異性均應(yīng)>95%。作為確認(rèn)試驗(yàn)特異性應(yīng)>98%-99%。定性免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目敏感性、特異性要求2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座40ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心建議使用計(jì)分可信區(qū)間以上公式中，1.96是從標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布對應(yīng)的95％可信區(qū)間得來的。若置信水平改變，則1.96也應(yīng)被相應(yīng)的百分位點(diǎn)所替代。2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座41ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心敏感性、特異性的計(jì)算舉例表：待評價(jià)試劑與診斷標(biāo)準(zhǔn)相比較進(jìn)行敏感性、特異性的計(jì)算舉例敏感性=100%×88/102=86.3%特異性=100%×336/338=99.4%敏感性和特異性的95%置信區(qū)間為敏感性(74.3%,93.2%)和特異性(96.7%,99.9%)。2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座42ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心概述如果沒有可用的診斷標(biāo)準(zhǔn)，那么廠家需提供待評價(jià)試劑與某一已驗(yàn)證方法進(jìn)行比較的結(jié)果，在這種情況下，則不能夠計(jì)算敏感性和特異性，而是計(jì)算陽性符合率和陰性符合率。

這種計(jì)算反映的并非方法的準(zhǔn)確度，而是待評價(jià)試劑和已驗(yàn)證方法的一致性程度。陽性符合率和陰性符合率2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座43ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心表：待評價(jià)試劑與已驗(yàn)證方法相比較進(jìn)行陽性符合率和陰性符合率的計(jì)算陽性符合率和陰性符合率的計(jì)算陽性符合率=a/(a+c)×100%。陰性符合率=d/(b+d)×100%?？偡下?(a+d)/(a+b+c+d)×100%。需要特別說明的是，陽性符合率可以解釋為已驗(yàn)證方法檢測結(jié)果為陽性的樣本中待評價(jià)試劑的陽性率，2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座44ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心表：待評價(jià)試劑與已驗(yàn)證方法相比較進(jìn)行陽性符合率和陰性符合率的計(jì)算舉例陽性符合率和陰性符合率的計(jì)算舉例陽性符合率=80/88×100%=90.9%。陰性符合率=342/352×100%=97.2%總符合率=(80+342)/440×100%=95.9%95%置信區(qū)間為：敏感性(78.8%,96.4%)和特異性(93.5%,98.8%)。2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座45ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心每次實(shí)驗(yàn)，應(yīng)立即記錄所有原始檢測數(shù)據(jù)并復(fù)核，以早期發(fā)現(xiàn)分析系統(tǒng)及人為誤差的來源。一旦發(fā)現(xiàn)某些結(jié)果是由可解釋的誤差引起的，則應(yīng)將其記錄下來，同時(shí)，這些結(jié)果不能用于數(shù)據(jù)分析。如不能確定誤差產(chǎn)生的原因，則保留原始結(jié)果。數(shù)據(jù)收集的檢查2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座46ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心第三方質(zhì)控品檢測系統(tǒng)配套質(zhì)控品自制質(zhì)控品質(zhì)控品的來源5.6檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的保證-----室內(nèi)質(zhì)控2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座47ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心基質(zhì)：應(yīng)盡量選擇人血清基質(zhì)，工程菌或動(dòng)物源性的基質(zhì)由于人體內(nèi)有大量的異嗜性抗體的存在引起非特異或中和反應(yīng)造成假失控。稀釋液也應(yīng)用人血清，凍干品復(fù)溶可以使用生理鹽水，避免使用動(dòng)物源性的小牛血清等。穩(wěn)定性：室內(nèi)質(zhì)控需要觀察一段時(shí)間，一般選擇生產(chǎn)者聲明在一定保存條件下如2-8℃或-20℃以下有效期為6個(gè)月以上。要特別注意開瓶有效期和凍干質(zhì)控物復(fù)溶后分裝瓶的有效期與原裝瓶有效期的區(qū)別，通常前二者的有效期要短許多。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對這些有效期進(jìn)行驗(yàn)證。5.6檢驗(yàn)程序的質(zhì)量控制質(zhì)控物的選擇2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座48ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心質(zhì)控物數(shù)量、實(shí)驗(yàn)位置和頻次：質(zhì)控物數(shù)量應(yīng)滿足一個(gè)批號至少半年的實(shí)驗(yàn)量。每分析批至少安排一個(gè)弱陽性和一個(gè)陰性質(zhì)控，檢測位置不能固定而應(yīng)隨機(jī)放置。

試劑盒所設(shè)的陰、陽性內(nèi)對照是用來計(jì)算CUTOFF值或閾值的，也有相應(yīng)的有效性判斷標(biāo)準(zhǔn)，但只能在同批號試劑內(nèi)使用，不能作為質(zhì)控指標(biāo)，質(zhì)控必須是可以監(jiān)控到不同批號試劑間的變化的外對照。質(zhì)控物的選擇2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座49ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心高值或超高值陽性血清是用來監(jiān)控“HOOK效應(yīng)”的，應(yīng)該在引進(jìn)分析方法或試劑盒時(shí)評價(jià)，不需要長期監(jiān)控，同時(shí)其測定值遠(yuǎn)高于CUTOFF值對邊緣結(jié)果的監(jiān)控也無任何價(jià)值。質(zhì)控物的選擇2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座50ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心質(zhì)控品水平：陰性質(zhì)控品：特定項(xiàng)目人陰性血清混合物（若為ELISA或CLIA質(zhì)控品濃度宜0.5倍臨界值左右）陽性質(zhì)控品：特定項(xiàng)目人陽性血清混合物ANA1:1000anti-dsDNA1:100或以上anti-ENA中強(qiáng)度陽性：若組合式檢測，至少有2個(gè)項(xiàng)目為陽性質(zhì)控物的選擇2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座51ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心質(zhì)控品水平：弱陽性質(zhì)控品：ELISA、CLIA：臨界值2~4倍的樣本IIF:比臨界值高1個(gè)滴度。特定項(xiàng)目人陽性血清或陰陽性血清混合物。ANA：1：100～1:320，ANA模型：斑點(diǎn)型，或均質(zhì)型，或核仁型，或胞漿型等（可以每6個(gè)月變換，存儲質(zhì)控品至少有2個(gè)模型?。゛nti-dsDNA：1:10～1:32anti-ENA：低度陽性或臨界值2~4倍的樣本（若組合式檢測，至少有2個(gè)項(xiàng)目為弱陽性）質(zhì)控物的選擇2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座52ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心大量的臨床免疫項(xiàng)目無商品化的質(zhì)控物供應(yīng)，實(shí)驗(yàn)室需自制，其步驟為：1收集陽性血清(無明顯溶血、黃膽、脂肪血和污染血清)到一定量（至少夠本室使用6個(gè)月以上的量）；2傳染性病原體需經(jīng)56℃、10小時(shí)滅活后使用；30.2μm生物濾膜過濾，去除纖維沉淀物和細(xì)菌；4稀釋，用正常人血清稀釋；5IIF方法ANA弱陽性質(zhì)控品（均質(zhì)型），將混合血清濃度調(diào)整到其臨界值（1:100）或高1個(gè)滴度（1:320）或之間；6測定值，與定值參考品進(jìn)行對比、求值，無參考品時(shí)選擇在2-4倍CutOff值附近的陽性值；6分裝小瓶（每日用量），加蓋、貼簽，-20℃凍存?zhèn)溆茫?穩(wěn)定性及瓶間差評價(jià)。自制質(zhì)控品2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座53ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心不同保存條件下?以數(shù)值計(jì)算方法：抽樣方法同均一性?2℃-8℃：CV值、累計(jì)CV值，穩(wěn)定期?-80℃：CV值、累計(jì)CV值，穩(wěn)定期?室溫：CV值、累計(jì)CV值，穩(wěn)定期?以定性判定方法：抽樣方法同均一性?2℃-8℃：滴度的符合率，累計(jì)符合率，穩(wěn)定期?-80℃：滴度的符合率，累計(jì)符合率，穩(wěn)定期?室溫：滴度的符合率，累計(jì)符合率，穩(wěn)定期質(zhì)控品穩(wěn)定性的評價(jià)1）均一性評估：同批號質(zhì)控品隨機(jī)抽取5支（瓶），≥80%符合為合格。2）穩(wěn)定性評估：評估1周，1月，3月，6月，1年。有效期一般可標(biāo)定為1年。2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座54ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心純定性試驗(yàn)：如免疫印跡、斑點(diǎn)滲濾等，除膜條本身的內(nèi)對照外：每檢測日或分析批，應(yīng)使用弱陽性和陰性質(zhì)控品兩個(gè)水平進(jìn)行質(zhì)控。質(zhì)控判定規(guī)則陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果為陰性弱陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果為弱陽性純定性試驗(yàn)的質(zhì)控要求如：抗ENA抗體譜檢測2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座55ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心以滴度或稀釋度判定的試驗(yàn)：如間接免疫熒光法、凝集試驗(yàn)等，每檢測日或分析批，應(yīng)使用弱陽性和陰性質(zhì)控品兩個(gè)水平進(jìn)行質(zhì)控。質(zhì)控判定規(guī)則：陰性質(zhì)控結(jié)果為陰性弱陽性質(zhì)控結(jié)果在靶值上下一個(gè)滴度或稀釋度純定性試驗(yàn)的質(zhì)控要求如：ANA、anti-dsDNA、ANCA、AMA、SMA等2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座56ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心用數(shù)值判定結(jié)果的試驗(yàn)：如ELISA、CLIA等。濃度：弱陽性質(zhì)控品濃度宜在2～4倍臨界值左右，陰性質(zhì)控品濃度宜0.5倍臨界值左右（兩個(gè)水平）。頻次：若是ELISA應(yīng)每板做質(zhì)控，若是CLIA每分析批做質(zhì)控。質(zhì)控判定規(guī)則：至少利用其多規(guī)則中一個(gè)偶然誤差及一個(gè)系統(tǒng)誤差規(guī)則。12s警告，13s和22s失控。純定性試驗(yàn)的質(zhì)控要求如：anti-PR3、ACL、anti-CCP等2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座57ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心發(fā)現(xiàn)問題

分析問題產(chǎn)生的原因

采取糾正措施加以改進(jìn)，進(jìn)而預(yù)防

驗(yàn)證和追蹤

避免同樣的問題出現(xiàn)第二次！失控原因分析及處理2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座58ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心陽性質(zhì)控品失控的常見原因:污染、溫育時(shí)間不穩(wěn)定、偶然誤差。

陰性質(zhì)控品的常見失控原因：污染、洗板不干凈、標(biāo)本間的交叉污染。處理措施：全自動(dòng)加樣系統(tǒng)?一次性吸頭的使用，洗板機(jī)的維護(hù)，洗液的定期更換，溫育溫度和溫育時(shí)間的保證，加樣器的準(zhǔn)確，熒光顯微鏡的維護(hù)。失控原因分析及處理2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座59ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心微量加樣器的質(zhì)量保證2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座60ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心檢定或校準(zhǔn)：至少每年1次加樣器的校準(zhǔn)可依據(jù)ISO/DIS8655文件和國家技術(shù)監(jiān)督局頒發(fā)的有關(guān)定量、可調(diào)移液器的中華人民共和國國家計(jì)量檢定規(guī)程《定量、可調(diào)移液器試行檢定規(guī)程》（JJG646-90）規(guī)定的重量測試方法。這是目前用于此類儀器有效的校準(zhǔn)方法。微量加樣器的質(zhì)量保證2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座61ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心測定波長：400-750nm吸光度范圍：0.0-4.0，線性誤差<2.0%，精密度CV<0.2%光學(xué)系統(tǒng)：垂直光路多通道（硅膠管或光導(dǎo)纖維）檢測速度：數(shù)秒震板功能溫育功能軟件功能酶標(biāo)儀的質(zhì)量保證：酶標(biāo)儀的性能2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座62ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心酶標(biāo)儀校準(zhǔn)至少1年1次，可由計(jì)量部門或廠家完成，實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證酶標(biāo)儀的質(zhì)量保證：酶標(biāo)儀的校準(zhǔn)核心：比色測定的準(zhǔn)確性線性精密性2021/5/9實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座63ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可系