實驗二細菌的染色和細菌細胞構(gòu)造的觀察

實驗二細菌的染色和細菌細胞構(gòu)造的觀察

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目的要求染色劑和染色的原理實驗材料實驗程序思考題目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片掌握細菌的一般染色法和革蘭氏染色進一步熟練掌握顯微鏡油鏡的使用技術(shù)觀察和識別細菌細胞的特殊構(gòu)造染色劑和染色原理借助物理和化學(xué)因素的作用而進行的。物理因素：細胞及細胞物質(zhì)對染料的毛細現(xiàn)象、滲透、吸附作用等;

化學(xué)因素：正負離子之間的相互吸引等。細菌的等電點較低，pH值大約在2-5之間，故在中性、堿性或弱酸性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負電荷；而堿性染料電離時染料離子帶正電荷。因此，帶負電荷的細菌常和帶正電荷的堿性染料進行結(jié)合。

微生物染色的基本原理各種染料的特性與用途革蘭氏染色原理細菌細胞電鏡照片-----外層為細胞壁革蘭氏陽性和陰性菌細胞壁比較革蘭氏陽性菌革蘭氏陰性菌革蘭氏陽性細菌細胞壁組成革蘭氏陰性細菌細胞壁組成實驗材料涂片染色用的細菌培養(yǎng)物大腸桿菌（Escherichiacoli)24h的斜面培養(yǎng)物

枯草桿菌（Bacillussubtilis)12-16h的斜面培養(yǎng)物載玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、各種染色液、火柴、無菌牙簽、玻璃鉛筆、蒸餾水。顯微鏡、鏡頭油、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯等。示范片

蘇云金芽孢桿菌（Bacillusthuringiensis）的芽孢；

膠質(zhì)芽孢桿菌（Bacillusmucillaginosus）的莢膜；

枯草芽孢桿菌的鞭毛。實驗程序涂片---干燥---固定---染色---水洗---干燥---鏡檢

該法可觀察微生物大小、形狀和細胞排列狀況，但不能鑒別微生物的特殊構(gòu)造等。

簡單染色法(各人取牙垢或指甲垢制片觀察

)

凡是被染上顏色，且具有典型的球狀、桿狀或螺旋狀的目視物都可視為細菌。實驗程序從大腸桿菌和金黃色葡萄球菌斜面中挑取菌苔時必須遵循無菌操作規(guī)程。

無菌操作革蘭氏染色1.

涂片2.初染：涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1min，傾去染液，流水沖洗至無紫色3.媒染：用路哥氏碘液沖去殘水，并覆蓋涂面1min，水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精脫色約30s，水洗。5.復(fù)染：滴加番紅染色液，染1min，水洗后用吸水紙吸干。6.

鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。染色結(jié)果金黃色葡萄球菌大腸桿菌莢膜染色的方法和步驟1.涂片：取斜面培養(yǎng)72h左右的膠質(zhì)芽孢桿菌涂片，自然干燥，自然固定。2.染色：在已自然晾干的涂面上，滴加1%結(jié)晶紫染色液染色2min，以20%硫酸銅沖洗數(shù)次，再用自來水沖洗1次，晾干。3.鏡檢：油鏡觀察示范片并繪圖(菌體紅色，莢膜無色)。

莢膜薄，易變形，因此在涂片過程中不能用加熱固定。芽孢染色的方法和步驟1.涂片：培養(yǎng)24h的枯草芽孢桿菌進行涂片、干燥、固定，操作方法同簡單染色法。2.染色：在涂面上鋪一層濾紙，在濾紙上滴加孔雀綠染色液，使濾紙片濕潤，放在水浴鍋上以蒸汽加熱（或用酒精燈加熱至冒蒸汽而不沸騰），不斷添加孔雀綠染色液，在冒蒸汽的條件下染色10min，切勿使涂面干涸，也勿使染液沸騰，冷卻后水洗至無綠色流出為止，再用番紅染色液復(fù)染1min，水洗并風(fēng)干后鏡檢。3.鏡檢：油鏡下觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色鞭毛染色的方法和步驟菌液的制備及涂片:(菌種應(yīng)預(yù)先連續(xù)傳代5-6代)1.接種：先在斜面底部加入0.5-1mL無菌水，取活化的枯草桿菌1-2環(huán)菌苔，接種于無菌水中，300C培養(yǎng)15-18h。2.制備菌液：挑取斜面底部近水面處菌苔數(shù)環(huán)，移入1mL與菌種同溫的無菌水中，280C溫箱保溫10min。3.鞭毛涂片：先用懸滴法觀察其運動性，若運動性很強，即可涂片。涂片后自然干燥、固定。染色：染色液必須新配制，涂片必須充分晾干才能染色。1.

先用剛過濾的鞭毛染色液A染7.5-8min左右。2.傾去A液，再加鞭毛染色液B液染3-5min，水洗，自然干燥。3.

用c液石炭酸復(fù)紅復(fù)染2min，水洗、晾干、鏡檢。油鏡下觀察鞭毛的數(shù)目及著生情況