尿樣中氧氟沙星的含量測定

尿樣中氧氟沙星的含量測定第一頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.分析臨床上廣泛用于治療泌尿系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)感染的藥物氧氟沙星。2.比較LC-UV與LC-熒光分析氧氟沙星的區(qū)別。第二頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日背景資料：

氧氟沙星是第三代喹諾酮類新型廣譜抗菌藥,并具分布廣,吸收好,半衰期長等特點(diǎn),臨床廣泛應(yīng)用具有廣譜抗菌作用。第三頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日尿樣采集：受試者空腹飲水200ml排尿,留取1h后尿樣作空白,一次口服OFLX片600mg,收集1，2，3，4，5小時(shí)后的尿樣，做好標(biāo)記。第四頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日LC-UV法分析尿樣中氧氟沙星的含量一、實(shí)驗(yàn)條件：1.1實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent高效液相色譜儀，G1314B-VWD紫外檢測器，色譜柱，量瓶1.2實(shí)驗(yàn)試劑氧氟沙星片劑，甲醇(色譜純)，尿樣，空白尿樣，HAc溶液第五頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日1.3色譜條件色譜柱:C185μm(250mm×416mm)

流動(dòng)相:甲醇/0.05%HAC=80：20

流速:1ml/min

進(jìn)樣量：20μl

柱溫：室溫檢測波長：在250～400nm處掃描，選取有最大吸收度處作為檢測波長。實(shí)際過程中選用294nm作為檢測波長。第六頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日二、實(shí)驗(yàn)方法2.1尿液的預(yù)處理取空白尿樣和尿樣，13000r/min離心10min，取上清液經(jīng)0.45μm的水相濾膜過濾，保留濾液。第七頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日2.2氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)液的配制精密稱取氧氟沙星片劑200mg,置50ml容量瓶中,以流動(dòng)相稀釋至刻度,配成4.0mg/ml的儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋400倍，吸取20μl作為進(jìn)樣品。第八頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

測定時(shí)，取標(biāo)準(zhǔn)液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流動(dòng)相稀釋于10ml量瓶，吸取20μl作為進(jìn)樣品，記錄色譜圖，以氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)濃度對峰面積進(jìn)行回歸，得到回歸方程。第九頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日2.4空白尿樣的配制取空白尿液濾液1ml,用流動(dòng)相稀釋20倍，吸取20μl作為進(jìn)樣品。2.5尿樣的配制取尿液濾液1ml,用流動(dòng)相稀釋20倍，吸取20μl作為進(jìn)樣品。第十頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日2.6進(jìn)樣先進(jìn)1針標(biāo)準(zhǔn)品觀察流動(dòng)相配置是否合適,合適后,進(jìn)1針空白尿樣觀察有無雜質(zhì)在測定波長處影響左氧氟沙星的吸收,然后進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣品,標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣5針來檢驗(yàn)儀器精密度。第十一頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日2.7回收率實(shí)驗(yàn)取濃度為0.5，1，1.5μg/ml的氧氟沙星尿樣，稱取氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品，配置為相同濃度，通過峰面積比值，測定回收率。第十二頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日2.8精密度實(shí)驗(yàn)取濃度為0.5～2.5μg/ml的氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品，1d內(nèi)重復(fù)測定5次,測得日內(nèi)RSD，隔日測定5次,測得日間RSD。第十三頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日紫外檢測測定尿液中左氧氟沙星的含量紫外檢測測定尿液中左氧氟沙星的含量，實(shí)驗(yàn)操作方法除檢測器設(shè)定與熒光檢測器不同外（檢測波長：294nm），其余設(shè)置和操作均與熒光檢測時(shí)相同。第十四頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果熒光法測定尿樣中左氧氧氟沙星濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線圖第十五頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日紫外法測定尿樣中左氧氟沙星濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線圖第十六頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日精密度日內(nèi)、日間RSD測量熒光法日內(nèi)RSD=2.6%

日間RSD=3.3%紫外法日內(nèi)RSD=0.8%

日間RSD=2.9%第十七頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日回收率實(shí)驗(yàn)回收率熒光98.7%、101.4%、101.2%；紫外99.6%、98.4%、99.1%。第十八頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日熒光法測定尿樣中排出左氧氟沙星量（g）-時(shí)間曲線

第十九頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日紫外檢測測定尿樣中排出左氧氟沙星量（g）-時(shí)間曲線

第二十頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日熒光法測定尿樣中排出左氧氟沙星的累計(jì)量（g）-時(shí)間曲線

第二十一頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日紫外檢測測定尿樣中排出左氧氟沙星的累計(jì)量（g）-時(shí)間曲線

第二十二頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日討論

1、采用LC-UV法與LC-熒光法分別測定尿樣中氧氟沙星的含量，并且比較兩種方法測量結(jié)果的不同，因此要求測量過程具有對照性：待測樣品，標(biāo)準(zhǔn)品，空白樣品的濃度兩者均相同，流動(dòng)相也相同，都采用外標(biāo)法，但因?yàn)榉治龇椒ǖ牟煌瑱z測波長不同。第二十三頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日

2、實(shí)驗(yàn)中所采用的尿液因?yàn)樾迈r尿液，如果無法做到這點(diǎn)，因在尿液中加入二甲苯等防腐劑，避免尿液因細(xì)菌繁殖造成混濁，影響試驗(yàn)效果。而且尿樣中的藥物會(huì)分解，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因而最好是現(xiàn)取，實(shí)驗(yàn)過程中不使用時(shí)放入冰箱保存第二十四頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日

3、由于沒有標(biāo)準(zhǔn)品對照，在測定時(shí)以左氧氟沙星片作為標(biāo)準(zhǔn)品使用。而事前沒有對其中左氧氟沙星的實(shí)際含量進(jìn)行過標(biāo)定，也不能排除片劑中的其他成分（如輔料中的抗氧化劑等）對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。第二十五頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日

4、實(shí)驗(yàn)本來應(yīng)該統(tǒng)計(jì)每次的尿液量，計(jì)算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出藥物量-時(shí)間曲線，因?yàn)楸敬螌?shí)驗(yàn)中沒有精密的容器量尿液體積，只能大概估計(jì)尿液量，測算出尿液中藥物的量。第二十六頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日

5、實(shí)驗(yàn)中考慮到出峰時(shí)間和分離度以及實(shí)際操作的便利程度，最終選擇的流動(dòng)相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是還是有脫尾現(xiàn)象，在熒光檢測中特別明顯。

6、從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，我們可以認(rèn)為熒光檢測器作為檢測裝置，靈敏度、專屬性好（沒有雜質(zhì)峰），較紫外檢測器優(yōu)。

第二十七頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日標(biāo)準(zhǔn)品中左氧氟沙星出峰圖

（紫外檢測器檢測）第二十八頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期日尿樣中左氧氟沙