植物組織培養(yǎng)省培學(xué)時

植物組織培養(yǎng)徐程浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院省培90學(xué)時項目模塊安排7月17日上午培養(yǎng)基配制組培專題講座7月17日下午黃瓜子葉及下胚軸接種鐵皮石斛人工種子制作7月18日上午花菜花莖段表變消毒及接種7月18日下午組培苗馴化與移栽一、培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的成分無機鹽類維生素類氨基酸有機附加物糖類水瓊脂植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)培養(yǎng)基配制程序配制母液（大量微量鐵鹽有機植物激素）加熱溶解瓊脂及糖加入各類母液定容調(diào)pH分裝滅菌實驗一培養(yǎng)基配制MS+NAA0.2mg/L+6-BA2.0mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉，pH5.8每組500ml30只試管MS+NAA2.0mg/L+6-BA0.2mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉，pH5.8每組500ml30只試管

步驟：1、在搪瓷量杯內(nèi)加入300ml去離子水。2、稱取500ml所需MS培養(yǎng)基粉劑置于搪瓷量杯中。3、加入所需植物激素母液。4、加入所需蔗糖及瓊脂。5、置于電磁爐上加熱至沸騰。6、定容至500ml。7、調(diào)節(jié)pH至5.8。8、試管分裝。9、滅菌121℃15min。選修一教材相關(guān)問題組織培養(yǎng)過程中蔗糖的吸收方式？不耐高溫的試劑如何添加到培養(yǎng)基中？為何鐵鹽母液單獨配制？為何要調(diào)整pH？選修一菊花組織培養(yǎng)中芽誘導(dǎo)及生根培養(yǎng)基的差異？蔗糖吸收1、高壓滅菌水解2、細(xì)胞壁蔗糖酶分解3、主動吸收過濾滅菌鐵鹽母液鐵鹽母液制備：3價或2價鐵鹽分別加熱溶解后混合定容最終螯合鐵大多以三價鐵存在

。但植物細(xì)胞從EDTA吸收鐵在細(xì)胞膜上由3價鐵轉(zhuǎn)化為2價鐵。黃瓜子葉和下胚軸誘導(dǎo)愈傷組織及分化實驗?zāi)康模貉芯客恢参锊煌M織誘導(dǎo)愈傷組織及其分化受外植體來源及培養(yǎng)基配方的影響。材料：無菌黃瓜種子苗（7-8d）步驟：1、在超凈臺上取無菌濾紙一張置于臺面上，打開蘭花培養(yǎng)瓶，用鑷子夾取一幼苗置于濾紙上。2、用解剖刀切下子葉上部、下部及帶子葉節(jié)的胚軸，分別接種于上述培養(yǎng)基中。子葉背面朝下，下胚軸斜插于培養(yǎng)基上。3、根據(jù)不同培養(yǎng)時間記錄不同培養(yǎng)基上上子葉、下子葉及下胚軸愈傷組織發(fā)生情況及芽誘導(dǎo)情況制表并填寫，同時拍照記錄。影響愈傷組織形態(tài)發(fā)生的因素外植體的成苗途徑試管外生根芽-芽再生節(jié)培養(yǎng)小鱗莖、小球莖的誘導(dǎo)微嫁接技術(shù)浙江高考理綜20102015年9月浙江省新高考測試卷2015年10月浙江省選考浙江省2016年4月選考題二、無菌操作玻璃器皿的清洗堿洗法和酸洗法凡是微生物污染的器皿，必須先進(jìn)行高壓消毒和煮沸，以殺死菌體，否則會產(chǎn)生孢子飛揚，污染環(huán)境，給組織培養(yǎng)帶來嚴(yán)重困難。一般情況下，是先將玻璃器皿用清水沖洗后，浸入熱肥皂水或洗衣粉水中，洗凈后用清水沖洗，洗好的玻璃器皿應(yīng)光潔透明，再用蒸餾水沖洗2次，烘干或自然晾干后備用。接種室和接種室用具的消毒接種室是進(jìn)行無菌操作的地方，對其無菌要求是很嚴(yán)格的。無菌室要定期用福爾馬林(40％甲醛)加少量高錳酸鉀熏蒸，70％酒精或0.5％苯酚噴霧。接種前要用紫外線滅菌照射15-20分鐘以上。以保證空氣中不帶菌。器皿和工具都應(yīng)以高溫高壓滅菌，在無菌條件下開包，用的工具(如刀、剪、鑷子)要隨時用電子殺菌器上高溫滅菌。外植體的選擇選擇優(yōu)良的種質(zhì)選擇健壯的植株選擇最適的時期選取適宜的大小根灌外植體的滅菌消毒注意事項①消毒時間在酒精溶液中浸蘸的時間不能過長，一般不超過30秒，否則材料會嚴(yán)重脫水而死亡。在消毒液中消毒的時間隨材料的大小、忍耐力、種類和濃度而異，最好要做預(yù)備試驗來加以確定。②消毒液用量消毒液用量一般應(yīng)是材料體積的5～10倍以上。③消毒消毒時一定要隨時搖動，使材料表面盡可能全面地與消毒液接觸；消毒后的材料應(yīng)立即用無菌水清洗，并盡快切取所需外植體移入新鮮培養(yǎng)基上，減少在空氣中的暴露時間，避免材料的風(fēng)干和褐化。外植體的接種進(jìn)入接種室前，工作人員的雙手必須進(jìn)行滅菌，用肥皂水洗滌能達(dá)到良好的效果，進(jìn)行操作前再用70％的酒精擦洗雙手。操作期間經(jīng)常用70％的酒精擦拭雙手和臺面。在打開培養(yǎng)瓶、三角瓶或試管時，用火焰燒瓶口。如果培養(yǎng)液接觸了瓶口，則瓶口要燒到足夠的熱度，以殺死存在的細(xì)菌。工具用后及時滅菌，避免交叉污染。打開瓶子或試管時，應(yīng)拿成斜角，以免灰塵落入瓶中。刀、剪、鑷子等用具每次使用前均需放入電子殺菌器內(nèi)滅菌。外植體的培養(yǎng)接種后的外植體應(yīng)送到培養(yǎng)室去培養(yǎng)。培養(yǎng)室的培養(yǎng)條件要根據(jù)植物對環(huán)境條件的不同需求進(jìn)行調(diào)控。其中最主要的是光照、溫度、濕度、氧氣和培養(yǎng)基的pH等。通常對愈傷組織的誘導(dǎo)來說，暗培養(yǎng)比光培養(yǎng)更合適。但器官的分化需要光照，并隨著試管苗的生長，光照強度需要不斷地加強。培養(yǎng)壯苗時模仿自然界的晝夜溫差，夜間暗培養(yǎng)時適當(dāng)?shù)亟档蜏囟?，有利于組培苗生長健壯和誘導(dǎo)生根。固體培養(yǎng)中，最好采用通氣性好的瓶蓋或瓶塞。由于營養(yǎng)物質(zhì)的枯竭，水分的散失，以及一些組織代謝產(chǎn)物的積累，必須將組織及時轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。一般在25～28℃下進(jìn)行固體培養(yǎng)時，每隔4～6周進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)實驗2花菜花莖段的誘導(dǎo)教材相關(guān)問題多少酒精消毒時間合理？帶一片葉片意味著什么？菊花快繁是否一定經(jīng)歷愈傷組織階段？三、試管苗馴化與移栽試管苗的生態(tài)環(huán)境高溫且恒溫高濕弱光無菌氣體環(huán)境試管苗的特點葉片解剖結(jié)構(gòu)：海綿細(xì)胞層增加而柵欄組織較差，表皮的蠟質(zhì)層減少，氣孔發(fā)育差且開關(guān)能力低下。生理：組培苗的氣孔保衛(wèi)細(xì)胞的含鉀量低，葉片的光合作用能力低。根系發(fā)育：一般無根毛或根毛發(fā)育極差，根系對基質(zhì)的附著能力較差?？剐裕嚎共∧芰Σ?，易感病死亡。由于試管苗的上述特點，因此幼苗移栽入土后極易失水死亡。試管苗的馴化馴化的目的，在于提高試管苗對外界環(huán)境條件的適應(yīng)性，提高其光合作用的能力，促使試管苗健壯，最終達(dá)到提高試管苗的移栽成活率。馴化的原則，應(yīng)從溫度、濕度、光照及有無菌態(tài)等環(huán)境要素進(jìn)行，馴化開始數(shù)天內(nèi)，應(yīng)和培養(yǎng)時的環(huán)境條件相似；馴化后期，則要與預(yù)計的栽培條件相似，從而達(dá)到逐步適應(yīng)的目的。盡可能采用無糖培養(yǎng)技術(shù)。被動式通氣系統(tǒng)主動式通氣系統(tǒng)涉及無糖培養(yǎng)技術(shù)的高考題2010浙江理綜實驗3鐵皮石斛移栽與馴化日常管理灌溉：1、水質(zhì)要求：如果用自來水必須提前一天接好自來水，暴曬1天，讓氯氣揮發(fā)出去。2、澆水時間：早上太陽照射前或晚上太陽照射后，最好是早上。3、澆水量：一次性澆透，直至栽培盆底持續(xù)滴水。4、澆水方式：用噴霧器霧化澆水，主要把水分澆在葉面上而不是基質(zhì)上。5、當(dāng)苗存活后，大約到2～3個月可以適當(dāng)多澆水。光照說明1、光照時間：光照時間和澆水量是相互作用的，如果基質(zhì)澆水后不容易干，要適當(dāng)增加光照時間，光照時間2～5個小時，視環(huán)境而定。2、光照環(huán)境：家庭種植最好放陽臺（可以通風(fēng)），但切記勿淋雨，陽臺配置遮陰網(wǎng)或者透明塑料膜后（遮光率在70%左右最佳）。3、環(huán)境選擇：如果不能配置遮陰網(wǎng)或者透明塑料膜，最好選擇陽光直射2-3個小時，而不是放在陰暗處。這樣有利于水分蒸發(fā)。4、人工種子植物人工種子鐵皮石斛的蒴果和種子組培過程1.種子無菌播種鐵皮石斛胚狀體發(fā)育過程2.鐵皮石斛種子形成原球莖3.鐵皮石斛分化成苗

4.移栽人工種子顯微鏡下石斛種子鐵皮石斛原球莖懸浮培養(yǎng)人工種子包埋無菌狀態(tài)萌發(fā)開放式萌發(fā)實驗四鐵皮石斛人工種子制備1.人工種胚的獲得鐵皮石斛種子通過無菌播種后可獲得大量種胚原球莖。取長度介于0.6-2mm之間的原球莖包埋制種。2.包埋將篩選的原球莖置于4%藻藻酸鈉和MS培養(yǎng)基混合凝膠混勻，用無菌寬口滴管吸取胚狀體，滴入2