桑黃液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

PAGE6PAGE5桑黃液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了桑黃液體菌種的術(shù)語和定義、生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝及標(biāo)簽、貯存等。本文件適用于XX省桑黃液體菌種生產(chǎn)技術(shù)。2規(guī)范性引用文件下GB4789.28食品微生物學(xué)檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T12728食用菌術(shù)語NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY5099無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求?《食用菌菌種管理辦法》中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第62號令（2006年3月27日）3術(shù)語和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1桑黃Sanghuangporus桑黃在分類上屬于擔(dān)子菌亞門（Basidiomycota）、多孔菌科（Polyporaceae），桑黃菌屬（Sanghuangporus），是一類具有珍貴的具有重要藥用價值的大型真菌。3.2液體菌種liquidspawn液體菌種是用液體培養(yǎng)基，在生物發(fā)酵罐中，通過深層培養(yǎng)（液體發(fā)酵）技術(shù)生產(chǎn)的液體形態(tài)的菌種。4生產(chǎn)要求4.1場地要求菌種制作場地環(huán)境條件應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。水源充足且符合GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，排水暢通。4.2環(huán)境要求環(huán)境衛(wèi)生應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。300m之內(nèi)無垃圾場，無污水、粉塵等污染源。4.3廠房要求4.3.1液體菌種生產(chǎn)車間地面應(yīng)防水、防腐蝕、防滲漏、防滑，易清洗，應(yīng)有1.0%～1.5%的排水坡度和良好的排水系統(tǒng)。墻壁和天花板應(yīng)具有防潮、防霉、防水功能，且易清洗；電力滿足生產(chǎn)要求，通風(fēng)良好。4.3.2液體菌種生產(chǎn)接種室應(yīng)設(shè)置緩沖間及與接種人數(shù)相適應(yīng)的更衣室。車間入口處設(shè)置洗手、消毒和干手設(shè)備。放置封閉式廢物桶，安裝排風(fēng)設(shè)備，門窗應(yīng)安裝防蚊蠅紗網(wǎng)。4.4培養(yǎng)基質(zhì)應(yīng)符合NY5099無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求的規(guī)定。5生產(chǎn)工藝5.1搖瓶種制備5.1.1培養(yǎng)基按照附錄A規(guī)定配制。5.1.2裝液量采用1000mL的常規(guī)三角瓶，每瓶裝液量為200mL～300mL，八層紗布和牛皮紙封口。5.1.3滅菌在121℃～126℃，0.14MPa～0.17MPa的壓力下，保持25分鐘。5.1.4接種將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至30℃以下，無菌條件下用打孔法（10mm孔徑）將菌絲接種到液體搖瓶培養(yǎng)基上，按每100mL液體培養(yǎng)基接種3個菌絲塊。5.1.5培養(yǎng)接種后移至搖床，26℃，130r/min條件下培養(yǎng)10天。5.1.6搖瓶種轉(zhuǎn)接標(biāo)準(zhǔn)菌絲體形態(tài)：菌絲球多且表面絨毛狀，顏色清亮，菌液稍有黏稠。菌絲量：20%～25%（濕重）。酸堿度：發(fā)酵液pH5.5～6.0。鏡檢：檢驗無雜菌。5.2種子罐菌種制備5.2.1培養(yǎng)基按照附錄A規(guī)定配制。5.2.2裝液量發(fā)酵罐總體積的60%。5.2.3滅菌用夾層預(yù)熱培養(yǎng)基至80℃后，蒸汽進(jìn)罐升溫至121℃～124℃，0.11MPa～0.14MPa保壓恒溫40min。5.2.4接種在無菌條件下接種，接種量為10%；接種后調(diào)節(jié)進(jìn)、排氣閥，使罐壓保持在0.02MPa～0.04MPa之間。5.2.5培養(yǎng)攪拌轉(zhuǎn)速130r/min～160r/min，溫度26℃，培養(yǎng)7天。每隔12h取樣進(jìn)行一次無雜菌鏡檢。5.3液體菌種生產(chǎn)5.3.1液體培養(yǎng)基制作按照附錄B規(guī)定配制。裝液量、滅菌按照發(fā)酵罐廠家型號使用說明書的要求進(jìn)行操作。5.3.2種子罐菌種接入發(fā)酵罐在無菌條件下接種，接種量為10%。5.3.3發(fā)酵培養(yǎng)條件罐溫：26～28℃。罐壓：0.2～0.4MPa。通氣量：1︰0.5V/V·min。攪拌速度：130r/min～160r/min。培養(yǎng)時間：6～8天。5.4液體菌種檢測發(fā)酵后第4天，取樣液接于GB4789.28規(guī)定的試管斜面或培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，26℃培養(yǎng)3天，采用顯微鏡和感官觀察菌絲生長狀況。若無細(xì)菌、霉菌等雜菌菌落生長，則表明該樣品無雜菌污染。6液體菌種合格指標(biāo)6.1感官指標(biāo)6.1.1形態(tài)與色澤具有“毛刺”的球狀菌絲體呈黃色，菌液呈棕色。菌液稍粘稠，有大量菌絲球懸浮、分布均勻、不上浮、不下沉、不迅速分層，液體不渾濁。6.1.2菌液氣味培養(yǎng)器排氣口氣味正常，有桑黃菌絲氣味，無酸、臭味等。6.2理化指標(biāo)6.2.1酸堿度pH值5.5～6.0。6.2.2菌絲量菌絲濕重（g/L）≥120。6標(biāo)簽、貯存6.1標(biāo)簽生產(chǎn)的菌種必須貼有菌種質(zhì)量合格標(biāo)簽，注明菌種種類、級別、品種、生產(chǎn)單位、接種日期。6.2貯存6.2.1搖瓶種保存4℃、暗光條件下可保存5d～7d。6.2.2種子罐液體菌種保存15℃～20℃可保存2d～3d。

附錄A（規(guī)范性附錄）常用搖瓶種培養(yǎng)基A.1常用搖瓶種培養(yǎng)基葡萄糖35g/L，酵母粉10g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4·7H2O1.0g/L，VB10.05g/L。A.1.2葡萄糖3%，豆餅粉2%，玉米粉1%，酵母粉0.5%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣0.2%，硫酸鎂0.05%，pH值6.0。玉米粉，豆餅粉均過80目篩。附錄B（規(guī)范性附錄）常用發(fā)酵罐培養(yǎng)基B.1常用發(fā)酵罐培養(yǎng)基B.1.1葡萄糖35g