免疫血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)演示文稿

免疫血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)演示文稿本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分優(yōu)選免疫血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分凝集反應(yīng)：細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞或細(xì)胞性抗原等顆粒性抗原，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。一、凝集反應(yīng)及其特點(diǎn)第一節(jié)凝集與沉淀反應(yīng)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分凝集反應(yīng)過程：抗原抗體的特異性結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象凝集反應(yīng)特點(diǎn)：IgM的作用比IgG大數(shù)百倍IgG與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱不完全抗體臨床意義：進(jìn)行細(xì)菌的抗原分析、鑒定及分型，也可應(yīng)用已知細(xì)菌檢查未知血清的抗體。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分多克隆抗體單克隆抗體肌紅蛋白上清液本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分肉眼可見的凝集現(xiàn)象本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分直接凝集反應(yīng)(directagglutination)：

顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。二、直接凝集反應(yīng)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（一）玻片凝集試驗(yàn)YYY+方法評(píng)價(jià):定性試驗(yàn)簡(jiǎn)便和快速敏感度低臨床應(yīng)用:菌種鑒定血清學(xué)分型血型鑒定本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（二）試管凝集試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)：半定量試驗(yàn)簡(jiǎn)便、快速敏感度低可有假陽(yáng)性臨床應(yīng)用：肥達(dá)氏試驗(yàn)：傷寒副傷寒外裴二氏試驗(yàn)：斑疹傷寒Wrighttest:布魯菌病交叉配血試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination)：

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。載體種類：RBC（醛化）；聚苯乙烯膠乳顆粒（羧化）；金黃色葡萄球菌。三、間接凝集反應(yīng)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分用抗原致敏載體--檢測(cè)抗體（一）間接凝集反應(yīng)的類型1、正向間接凝集試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分用抗體致敏載體----檢測(cè)抗原2、反向間接凝集試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分用抗原致敏載體--檢測(cè)抗原3、間接凝集抑制試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分coagglutinationtest：以金黃色葡萄球菌菌體為反應(yīng)的載體。人及多種哺乳動(dòng)物（豬、兔、豚鼠等）血清中IgG抗體的FC段與菌體表面的A蛋白（SPA）非特異性結(jié)合后，IgG的兩個(gè)Fab段仍然暴露在菌體表面，保持著結(jié)合抗原的活性和特異性。當(dāng)與特異性抗原相遇時(shí)，能出現(xiàn)特異的凝集現(xiàn)象。SPA--(Fc)IgG(Fab)--AbSPA：staphylococcalproteinA4、協(xié)同凝集試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（二）正向間接血凝試驗(yàn)血凝試驗(yàn)強(qiáng)度本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/5121/1024Pos.Neg.Titer648512<232128324Patient12345678正向間接血凝試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（三）反向膠乳凝集試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上，當(dāng)致敏顆粒與樣品血清作用時(shí)，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集（四）明膠凝集試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分抗原的檢測(cè)反向間接凝集試驗(yàn)可用于檢測(cè)病原體的可溶性抗原，也可用于檢測(cè)各種蛋白質(zhì)成分?？贵w的檢測(cè)檢測(cè)細(xì)菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體。（五）間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞試劑：抗人O型紅細(xì)胞的單克隆抗體臨床應(yīng)用：HIV檢測(cè)、HBV檢測(cè)四、自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分五、抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（一）直接Coombs試驗(yàn)檢測(cè)紅細(xì)胞上的不完全抗體本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（二）間接Coombs試驗(yàn)檢測(cè)血清中的不完全抗體本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分可溶性抗原(如細(xì)菌、外毒素、血清蛋白等)與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合后，在一定條件(適量的電解質(zhì)、合適的酸堿度和溫度)下，經(jīng)一定時(shí)間，于比例合適處形成肉眼可見的沉淀現(xiàn)象。六、沉淀反應(yīng)precipitationreaction本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分沉淀反應(yīng)液體內(nèi)沉淀反應(yīng)凝膠沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)免疫濁度測(cè)定瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)免疫電泳雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（一）單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)制成含有適宜抗體濃度的瓊脂凝膠板。以適當(dāng)距離打孔，孔中加入可溶性抗原?？乖蛑車鷶U(kuò)散，當(dāng)抗原與抗體比例適宜時(shí)，在瓊脂中形成抗原－抗體復(fù)合物的晶格和沉淀。沉淀環(huán)的直徑與抗原濃度呈正相關(guān)。擴(kuò)散圈出現(xiàn)呈兩重沉淀環(huán)的雙環(huán)現(xiàn)象，表明存在但抗原性相同，而擴(kuò)散率不同的兩種組分。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分大分子抗原和長(zhǎng)時(shí)間擴(kuò)散（＞48h）：C=k×d2小分子抗原和較短時(shí)間（24h）：logC=k×d本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（二）雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)可溶性抗原與相應(yīng)抗體在含適量電解質(zhì)的瓊脂凝膠板的對(duì)應(yīng)孔中，各自向四周擴(kuò)散，若兩者分子比例適當(dāng)，則在擴(kuò)散的一定時(shí)間后在兩孔之間相遇并生成白色沉淀線。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分加入定量的抗體在中間孔，按一定距離在四周打數(shù)個(gè)小孔，分別加入不同稀釋度的抗原可見粗細(xì)不等的沉淀線，從而可判定抗原的效價(jià)。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分三孔型雙向免疫擴(kuò)散可能的結(jié)果本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（三）對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)概念:

在電場(chǎng)中進(jìn)行的雙向免疫擴(kuò)散。原理:

將抗原加至近陰極孔內(nèi)，抗體加至近陽(yáng)極孔內(nèi)?？乖c抗體在pH8.6的緩沖液中均帶負(fù)電荷，通電后，抗原因帶負(fù)電荷向陽(yáng)極泳動(dòng)，而抗體球蛋白等電點(diǎn)高，所帶負(fù)電荷少，加之分子量較大，向陽(yáng)極的位移小于受電滲作用向陰極的位移，形成抗原抗體相向移動(dòng)。二者結(jié)合，在比例適宜處形成白色沉淀線。優(yōu)點(diǎn):

快速，只需1小時(shí)左右；靈敏度提高，約為10μg／ml。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（四）火箭電泳RocketElectrophoresis

又稱免疫擴(kuò)散，是把單向免疫擴(kuò)散同電泳結(jié)合在一起的方法?？乖诤卸靠贵w的瓊脂中泳動(dòng)，兩者比例適宜時(shí)，在較短時(shí)間內(nèi)生成錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內(nèi)，沉淀峰的高度與抗原含量成正比。此法的特點(diǎn)是需時(shí)較短，故可用于快速沉淀標(biāo)本中抗原的含量。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分火箭電泳示意圖本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分早期的放射免疫技術(shù)是基于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)原理的放射免疫分析(RIA)，稍后又發(fā)展了非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的免疫放射分析(IRMA)。該類技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、樣品及試劑用量少、操作簡(jiǎn)便且易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析。第二節(jié)放射免疫測(cè)定技術(shù)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分常用標(biāo)記核素

125I3H射線類型γβ理化性活潑不活撥核素豐度>90%-半衰期60.2d12.3y標(biāo)記方法簡(jiǎn)單復(fù)雜標(biāo)記設(shè)備低廉昂貴測(cè)量條件簡(jiǎn)單復(fù)雜本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分一、放射免疫分析1、基本原理：Ab限量，Ag*定量，Ag*與Ag具有等同的與Ab結(jié)合能力，且兩者的總量大于Ab結(jié)合位點(diǎn)，二者通過競(jìng)爭(zhēng)方式與Ab結(jié)合；隨著Ag增加，Ag*與Ab結(jié)合形成Ag*Ab復(fù)合物的放射量降低，二者變化成函數(shù)關(guān)系。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分以未結(jié)合的Ag*為F，Ag*-Ab復(fù)合物為B，則B/F或B/T(B＋F)與Ag的量變存在著劑量-反應(yīng)曲線。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分2、實(shí)驗(yàn)方法及測(cè)定Ag*Ag平衡非平衡一步法二步法Ab＋體積溫度時(shí)間pHAg*--標(biāo)準(zhǔn)；Ag--樣品本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分二抗體沉淀法

PEG沉淀法PR試劑法活性炭吸附法分離徹底，迅速分離試劑和過程不影響反應(yīng)平衡效果不受反應(yīng)介質(zhì)影響操作應(yīng)簡(jiǎn)單、重復(fù)性好經(jīng)濟(jì)結(jié)合與游離標(biāo)記物的分離本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分二、免疫放射分析1、基本原理：以過量125I標(biāo)記抗體與待測(cè)抗原進(jìn)行非競(jìng)爭(zhēng)性免疫結(jié)合反應(yīng),用固相免疫吸附劑對(duì)B或F進(jìn)行分離，其靈敏度和可測(cè)范圍均優(yōu)于RIA操作也較RIA簡(jiǎn)單。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分2、單位點(diǎn)IRMA先用過量標(biāo)記抗體與待測(cè)抗原進(jìn)行反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物；用固相抗原結(jié)合游離的標(biāo)記抗體并將其分離,測(cè)定上清液的放射量本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分3、雙位點(diǎn)IRMA先用固相抗體與抗原結(jié)合，再用過量的標(biāo)記抗體與抗原的另一決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物，洗棄剩余標(biāo)記抗體，測(cè)固相上放射性。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分RIAIRMA標(biāo)記物抗原抗體原理競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng)體系A(chǔ)g*、Ag、Ab固相Ab、Ab*、Ag反應(yīng)動(dòng)力學(xué)慢快靈敏度相對(duì)低高檢測(cè)范圍窄寬1-2數(shù)量級(jí)特異性差（PcAb）優(yōu)（McAb）標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)合率與測(cè)值成反比結(jié)合率與測(cè)值成正比待測(cè)抗原大小分子二抗原決定簇IRMA與RIA比較本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分

將抗原抗體反應(yīng)與熒光物質(zhì)發(fā)光分析相結(jié)合，用熒光檢測(cè)儀檢測(cè)抗原抗體復(fù)合物中特異性熒光強(qiáng)度，對(duì)液體標(biāo)本中微量或超微量物質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定。第三節(jié)熒光免疫技術(shù)（一）熒光免疫分析的基本原理本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分均相熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定熒光酶免疫測(cè)定非均相熒光免疫測(cè)定熒光偏振免疫測(cè)定熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)的類型熒光免疫測(cè)定液體樣品測(cè)定熒光抗體技術(shù)固體樣品測(cè)定直接法間接法雙標(biāo)記法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分熒光物質(zhì)λex（nm）λem（nm）應(yīng)用異硫氰酸熒光素(FITC)490～495520～530（黃綠色）FAT、熒光偏振免疫測(cè)定四乙基羅丹明(RB200)570～575595～600（橙紅色）FITC的襯比染色或雙標(biāo)記FAT四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)550620（橙紅色）FITC的襯比染色或雙標(biāo)記FAT藻紅蛋白（PE）490-560595（紅色）雙標(biāo)記FAT、流式細(xì)胞術(shù)7-氨基-4-甲基香豆素354430（藍(lán)色）雙標(biāo)記或多標(biāo)記FATEu3+螯合物340613時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定熒光免疫測(cè)定中常用的熒光物質(zhì)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分時(shí)間分辨檢測(cè)原理示意圖（二）時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定1、基本原理本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分鑭系元素銪(Eu3+)（最常用）；釤(Sm3+)；鋱(Tb3+)；釹(Nd3+)；鏑(Dy3+)熒光物質(zhì)熒光壽命(ns)熒光物質(zhì)熒光壽命(ns)非特異熒光背景1～10Sm3+-β-NTA65000人血清蛋白4.1Sm3+-PTA60000球蛋白3.0Eu3+-β-NTA714000細(xì)胞色素C3.5Eu3+-PTA925000FITC4.5Tb3+-PTA96000丹黃酰氯14Dy3+-PTA10002、標(biāo)記物常見熒光物質(zhì)的熒光壽命本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分3、信號(hào)增強(qiáng)作用結(jié)合β-二酮體Eu3+解離pH<4熒光增強(qiáng)Eu3+標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物固相雙抗體夾心法原理示意圖本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分固相抗體-待檢抗原-Eu3+標(biāo)記抗體復(fù)合物在酸性增強(qiáng)液下，Eu3+解離，340nm激發(fā)光下發(fā)射613nm熒光。4、雙抗體夾心法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分待檢抗原和Eu3+標(biāo)記抗原與固相抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,溫育洗滌后在固相中加入熒光增強(qiáng)液,測(cè)定熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。5、固相抗體競(jìng)爭(zhēng)法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分待檢抗原和固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合定量的Eu3+標(biāo)記抗體，溫育洗滌后在固相中加入熒光增強(qiáng)液,測(cè)定熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。6、固相抗原競(jìng)爭(zhēng)法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分熒光偏振免疫測(cè)定原理示意圖（三）熒光偏振免疫測(cè)定本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第56頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分熒光酶免疫測(cè)定熒光物質(zhì)產(chǎn)生示意圖

酶標(biāo)記抗體或抗原，與固相載體包被的抗原或抗體特異性結(jié)合。洗去游離的酶標(biāo)物。加入底物，經(jīng)酶分解后生成熒光產(chǎn)物。（四）熒光酶免疫測(cè)定本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第57頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分標(biāo)記酶底物熒光產(chǎn)物λex(nm)λem(nm)響應(yīng)信號(hào)堿性磷酸酶4-MUP4-MU36045010β-半乳糖苷酶4-MUG4-MU36045010辣根過氧化物酶HPA二聚體3174140.03熒光酶免疫測(cè)定標(biāo)記用酶及熒光底物本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第58頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分固相抗體和酶標(biāo)記抗體與待檢抗原反應(yīng)，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光反應(yīng)，發(fā)光量與待檢抗原含量成正比。1、雙抗體夾心法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第59頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分熒光酶免疫測(cè)定（雙抗體夾心法）示意圖本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第60頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分固相抗原和酶標(biāo)抗原與待檢抗體反應(yīng)，形成固相抗原-待檢抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光，發(fā)光量與待檢抗體含量成正比。2、雙抗原夾心法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第61頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分待檢抗原和固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合定量的酶標(biāo)抗體，洗滌除去未結(jié)合部分，固相抗原與酶標(biāo)抗體形成的復(fù)合物被留下來(lái)，加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光反應(yīng)，熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。3、固相抗原競(jìng)爭(zhēng)法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第62頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分抗核抗體(均質(zhì)型)抗核抗體(核膜型)抗核抗體(斑點(diǎn)型)（五）熒光酶免疫技術(shù)的應(yīng)用1、自身抗體檢測(cè)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第63頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分寄生蟲（猴胚腎細(xì)胞內(nèi)弓形蟲）細(xì)菌（藤黃微球菌)2、病原體檢測(cè)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第64頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分腫瘤（人肝癌細(xì)胞）3、免疫病理檢測(cè)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第65頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分4、細(xì)胞表面抗原和受體檢測(cè)熒光免疫技術(shù)可用于淋巴細(xì)胞表面CD抗原、抗原受體、補(bǔ)體受體、Fc受體等的檢測(cè)以及淋巴細(xì)胞及其亞群的鑒定和計(jì)數(shù)。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第66頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分酶標(biāo)抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應(yīng)酶對(duì)底物的顯色反應(yīng)對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定位、定性或定量的測(cè)定分析第四節(jié)酶免疫測(cè)定一、基本原理本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第67頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（一）常用的酶及其底物1、辣根過氧化物酶（HRP）多用于ELISA方法。四甲基聯(lián)苯胺TMB。反應(yīng)后顯藍(lán)色，加酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色,測(cè)定波長(zhǎng)450nm，穩(wěn)定，無(wú)致癌性。2、堿性磷酸酶（AP）對(duì)-硝基苯磷酸酯（pNPP）。經(jīng)酶作用后的產(chǎn)物為黃色對(duì)硝基酚，最大吸收峰波長(zhǎng)為405nm。3、β-半乳糖苷酶（β-Gal）多用于均相酶免疫測(cè)定。4MUG。經(jīng)酶作用后生成高強(qiáng)度熒光物，用熒光計(jì)測(cè)量。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第68頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分（二）固相載體及其處理1、常用的固相載體塑料制品、微顆粒、膜載體。通過固相載體可以方便的將非均相酶免技術(shù)中游離的和結(jié)合的抗體（或抗原）酶標(biāo)記物迅速分離。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第69頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分2、固相載體的處理⑴包被（coating）：將抗原或抗體結(jié)合于固相載體。⑵封閉（blocking）：用1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清消除固相載體表面未結(jié)合的位點(diǎn)，消除非特異性吸附。本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第70頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分酶免疫技術(shù)酶免疫組化酶免疫測(cè)定均相非均相固相酶免疫測(cè)定液相酶免疫測(cè)定組織切片或其它標(biāo)本中抗原的定位液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量（三）酶免疫技術(shù)分類本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第71頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分均相酶免疫測(cè)定主要用于藥物和小分子物質(zhì)的檢測(cè)。非均相免疫測(cè)定中的ELISA應(yīng)用更為廣泛。常用于傳染病的診斷：病毒性肝炎（甲肝抗體、“乙肝三對(duì)”、丙肝抗體、戊肝抗體）、風(fēng)疹病毒、皰疹病毒、輪狀病毒；結(jié)核桿菌、幽門螺桿菌。也用于一些蛋白質(zhì)的檢測(cè)：各種免疫球蛋白、補(bǔ)體、腫瘤標(biāo)志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特異性抗原）。（三）酶免疫測(cè)定的應(yīng)用本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第72頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分

酶標(biāo)記物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會(huì)發(fā)生改變，不用分離結(jié)合和游離酶標(biāo)記物，通過測(cè)定標(biāo)記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。常用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測(cè)定。二、均相酶免疫測(cè)定本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第73頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分1、酶放大免疫測(cè)定技術(shù)EMITenzyme-mutipliedimmunoassaytechnique

本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第74頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分2、克隆酶供體免疫分析CEDIAclonedenzymedonorimmunoassay

本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第75頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分三、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)Enzyme-linkedimmunosorbentassay（一）基本過程及試劑1、包被：固相的抗原或抗體2、反應(yīng)：加入待測(cè)抗體或抗原和酶標(biāo)抗原或抗體。酶標(biāo)記物（酶結(jié)合物）3、洗滌：使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的分離4、底物顯色：定性或定量的分析。酶反應(yīng)的底物本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第76頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分1、雙抗體夾心法方法：用已知抗體包被，加入待檢血清，再加酶標(biāo)抗體，加底物顯色

應(yīng)用：二價(jià)或二價(jià)以上的較大分子抗原測(cè)定乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等（二）ELISA檢測(cè)抗原的方法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第77頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第78頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分雙抗體夾心法測(cè)抗原YYYEYEYEYYEYEYEYYYYYYYYYYYYEYEYEYYYYYYYYYY本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第79頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分2、競(jìng)爭(zhēng)法

方法：用已知抗體包被，加入待測(cè)血清，再加酶標(biāo)抗原，酶標(biāo)抗原與待檢物競(jìng)爭(zhēng)與包被物結(jié)合。加底物顯色。

應(yīng)用：用于只有一個(gè)抗原決定簇的小分子半抗原（藥物、激素等）本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第80頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第81頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原YYYYYYEYYEYYYYEYYEYEYEYEYE本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第82頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分1、間接法方法：用已知抗原包被，加入待測(cè)血清，再加酶標(biāo)的抗人IgG（抗抗體或二抗）加底物顯色。優(yōu)點(diǎn)：一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。應(yīng)用：常用于HCV抗體、HIV抗體和梅毒螺旋體抗體等的測(cè)定。（三）ELISA檢測(cè)抗體的方法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第83頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第84頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分間接法測(cè)抗體YEYYYEYYYEYYEYYEYYEYYEYEYEY本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第85頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分2、雙抗原夾心法原理：類似雙抗體夾心法操作步驟：類似應(yīng)用：乙型肝炎表面抗體本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第86頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分3、競(jìng)爭(zhēng)法原理：類似檢測(cè)抗原的競(jìng)爭(zhēng)法應(yīng)用：乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)的檢測(cè)本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第87頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分應(yīng)用于病原體急性感染診斷中的IgM型抗體、甲型肝炎HAV-IgM抗體、乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗體的檢測(cè)。原理：抗人IgMμ鏈抗體包被捕獲待測(cè)標(biāo)本中IgM類抗體加入特異性抗原和酶標(biāo)記特異性抗原的抗體底物顯色

4、捕獲法本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第88頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第89頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分捕獲法原理EYEYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYEYEYEYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY本文檔共101頁(yè)；當(dāng)前第90頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)9點(diǎn)59分第五節(jié)固相膜免疫測(cè)定一、常用的固相膜及其特點(diǎn)玻璃纖維素(fiberglass)，尼龍(nylon)，聚偏