中密度纖維板霉變菌檢測技術(shù)規(guī)范

中密度纖維板霉變菌檢測技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了中密度纖維板霉變菌的術(shù)語和定義、檢測方法、常見脈孢菌屬和木霉屬菌落圖和顯微形態(tài)特征圖、結(jié)果判定等技術(shù)要求。本文件適用于中密度纖維板霉變過程中產(chǎn)生的脈孢菌屬和木霉屬真菌的檢測。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T11718中密度纖維板NY/T2811橡膠樹棒孢霉落葉病病原菌分子檢測技術(shù)規(guī)范術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。中密度纖維板mediumdensityfibreboard；MDF以木材纖維或其他植物纖維為原料，經(jīng)纖維制備，施加合成樹脂，在加熱加壓條件下，壓制成厚度小于1.5mm，名義密度范圍在0.65g/cm3~0.80g/cm3之間的板材。霉變molding因真菌在中密度纖維板上滋生繁殖引起的發(fā)霉變質(zhì)。霉變菌moldingfungi能夠引起中密度纖維板發(fā)霉變質(zhì)的真菌總稱。脈孢菌屬Neurospora子囊菌亞門、子囊菌綱、糞殼霉目、糞殼霉科的一屬。菌落生長迅速，菌絲蔓延生長、無色、有橫隔、多核，生孢子的氣生菌絲無規(guī)律地向空中生長，呈雙叉式分枝。分生孢子球形或近似球形、成鏈、單細(xì)胞。子囊殼簇生或散生，光滑或具有松散菌絲，呈無毛或有毛狀，壁亞革質(zhì)或炭質(zhì)，褐色或褐黑色。頂部突起處生孔口乳頭狀或短嘴狀。子囊殼內(nèi)最初充滿具分隔的側(cè)絲，當(dāng)形成子囊時(shí)側(cè)絲消失，繼后子囊發(fā)育充滿子囊殼。子囊圓筒形，含4～8個(gè)孢子。子囊孢子橢圓形，初期無色，成熟時(shí)變?yōu)楹谏蚰G色，單細(xì)胞，帶有縱的紋飾故稱脈孢霉。菌落最初白色、粉粒狀，很快變?yōu)榈S色、絨毛狀，成熟時(shí)上層覆蓋成團(tuán)塊的分生孢子。主要根據(jù)子囊殼、子囊和子囊孢子的大小進(jìn)行分類。木霉屬Trichoderma半知菌亞門、絲孢綱、絲孢目、從梗孢科的一屬。菌落生長迅速，棉絮狀或致密如氈，產(chǎn)孢叢束區(qū)常排列成XX輪紋，表面為不同程度綠色，反面無色或有色，氣味有或無。主要特征為菌絲有隔，分枝繁復(fù)。分生孢子梗為菌絲的短側(cè)枝，其上對生或互生分枝，還可有二級、三級分枝，呈銳角或近似直角，似松柏樹枝狀。分枝末端為束生、對生、互生或單生瓶狀小梗。分生孢子在小梗頂端靠粘液聚成球形或近球形的孢子頭，有時(shí)幾個(gè)孢子頭匯成一個(gè)大的孢子頭，分生孢子近球形或橢圓形、圓筒形、倒卵形等，壁光滑或粗糙，透明或亮黃綠色。一些種有厚垣孢子，間生于菌絲中或頂生于菌絲短側(cè)分枝上，球形、橢圓形，無色，壁光滑。分生孢子梗的分枝形式是鑒定木霉的重要形態(tài)指標(biāo)。木霉的有性階段一般發(fā)現(xiàn)為肉座菌屬（Hypocrea）。檢測方法原理根據(jù)中密度纖維板霉變過程中霉變菌的菌落形態(tài)、分生孢子梗形態(tài)，判斷霉變菌是否屬于脈孢菌屬和木霉屬。設(shè)備顯微鏡（放大倍數(shù)1000倍以上；宜具備數(shù)碼照相功能，數(shù)碼照相機(jī)的分辨率宜在300萬像素以上）、生物培養(yǎng)箱、超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌器等。培養(yǎng)基和試劑PDA培養(yǎng)基（按NY/T2811的4.4規(guī)定配制）、無菌水等。取樣仔細(xì)檢查符合GB/T11718規(guī)定的中密度纖維板，使用無菌手術(shù)刀切取霉變部位，裝入無菌聚丙烯袋中，帶回實(shí)驗(yàn)室備用。菌落觀察用稀釋分離法把樣品上的霉變菌分離并純化，將純化后的菌株保存于斜面試管中備用。將分裝于500mL三角瓶中已滅菌的PDA培養(yǎng)基熔化后，放入45℃水浴中保溫備用。將熔化培養(yǎng)基在超凈工作XX以無菌操作傾注于直徑9cm的培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿注入15mL，凝固后備用。將接種針經(jīng)火焰滅菌并冷卻后，從斜面試管上蘸取極少量孢子，點(diǎn)植于培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基上，一般點(diǎn)植成三角形的三點(diǎn)。將接完種的培養(yǎng)皿倒置并放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6d，用肉眼或放大鏡觀察菌落的生長或發(fā)育速度、菌落的顏色、菌落表面質(zhì)地、菌落邊緣、培養(yǎng)基顏色變化等。顯微觀察取一片潔凈的載玻片，在中央滴一滴無菌水。用接種針或解剖針從培養(yǎng)皿或試管的純化菌落上挑取少許含有子實(shí)體的菌體放入載玻片的液滴中，并將菌絲體挑開，勿使成團(tuán)。用鑷子取蓋玻片，從一邊輕輕加蓋，避免產(chǎn)生氣泡，如果有氣泡，可在酒精燈上微微加熱除去。用顯微鏡觀測載玻片標(biāo)本中菌絲、子實(shí)體、孢子等的特征。常見脈孢菌屬和木霉屬菌落圖和顯微形態(tài)特征圖中密度纖維板上常見脈孢菌屬和木霉屬菌落圖和顯微形態(tài)特征圖分別見圖1和圖2。a）b）脈孢菌屬Neurosporaa）b）木霉屬Trichoderma圖1和圖2中的a）均為菌落圖，b）均為顯微形態(tài)圖。菌落圖譜中的