基于UPLC-Q-TOFMS及CORT誘導(dǎo)的低分化PC12抑郁細(xì)胞模

基于UPLC-Q-TOF/MS及CORT誘導(dǎo)的低分化PC12抑郁細(xì)胞模型的柴胡抗抑郁活性成分活性成請(qǐng)將通訊作者姓名、（本刊編委）、職稱、職務(wù)、主要研究方向補(bǔ)充完整。分研究*請(qǐng)將通訊作者姓名、（本刊編委）、職稱、職務(wù)、主要研究方向補(bǔ)充完整。于靜波1,2，韓越3**，收稿日期：2022-06-24修回日期：2022-10-25基金項(xiàng)目：湖南省自然科學(xué)基金委員會(huì)青年項(xiàng)目（2021JJ40410）：基于外周油酰胺代謝的柴胡-白芍藥對(duì)治療輕中度抑郁癥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：于靜波；湖南省自然科學(xué)基金委員會(huì)青年項(xiàng)目（2020JJ5415）：基于代謝調(diào)整的黃連對(duì)中焦脾胃濕熱證干預(yù)作用及質(zhì)量標(biāo)志物研究，負(fù)責(zé)人：韓越；湖南省教育廳一般項(xiàng)目（20C1413）：基于血液代謝組學(xué)整合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的復(fù)方柴金解郁片治療肝郁脾虛型抑郁癥的作用機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：于靜波。通訊作者：韓越，講師，主要研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究；王宇紅，研究員，博士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥神經(jīng)精神藥理研究。，周梓洋1,2，牟晴蕊1,2收稿日期：2022-06-24修回日期：2022-10-25基金項(xiàng)目：湖南省自然科學(xué)基金委員會(huì)青年項(xiàng)目（2021JJ40410）：基于外周油酰胺代謝的柴胡-白芍藥對(duì)治療輕中度抑郁癥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：于靜波；湖南省自然科學(xué)基金委員會(huì)青年項(xiàng)目（2020JJ5415）：基于代謝調(diào)整的黃連對(duì)中焦脾胃濕熱證干預(yù)作用及質(zhì)量標(biāo)志物研究，負(fù)責(zé)人：韓越；湖南省教育廳一般項(xiàng)目（20C1413）：基于血液代謝組學(xué)整合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的復(fù)方柴金解郁片治療肝郁脾虛型抑郁癥的作用機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：于靜波。通訊作者：韓越，講師，主要研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究；王宇紅，研究員，博士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥神經(jīng)精神藥理研究。（1．湖南中醫(yī)藥大學(xué)，科技創(chuàng)新中心.湖南中醫(yī)藥大學(xué)科技創(chuàng)新中心/中藥粉體與創(chuàng)新藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南長(zhǎng)沙410208；2．湖南中醫(yī)藥大學(xué)，抑郁類疾病中醫(yī)藥防治湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙410208；3．.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，藥學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410208）Studyonanti-depressionactiveingredientsofBupleuriRadixbasedonUPLC-Q-TOF/MSintegratedwithCORT-inducedpoorlydifferentiatedPC12depressioncellmodelYUJing-bo1,2,HANYue3**,ZHOUZi-yang1,2,MUQing-rui1,2,CHENJing-mei3,OU-YANGYu-qin3,FEIZhang3,WANGYu-hong1,2**1.HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,TechnologyInnovationCenter/NationalKeyLaboratoryBreedingBaseofChineseMedicinePowdersandInnovativeDrugs,Changsha410208,China;2.HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,HunanKeyLaboratoryofTraditionalChinesesMedicinePrevention&TreatmentofDepressionDiseases;3.HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,CollegeofPharmacy,Changsha410208,China*基金項(xiàng)目：湖南省自然科學(xué)基金委員會(huì)青年項(xiàng)目（2021JJ40410）：基于外周油酰胺代謝的柴胡-白芍藥對(duì)治療輕中度抑郁癥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：于靜波；湖南省自然科學(xué)基金委員會(huì)青年項(xiàng)目（2020JJ5415）：基于代謝調(diào)整的黃連對(duì)中焦脾胃濕熱證干預(yù)作用及質(zhì)量標(biāo)志物研究，負(fù)責(zé)人：韓越；湖南省教育廳一般項(xiàng)目（20C1413）：基于血液代謝組學(xué)整合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的復(fù)方柴金解郁片治療肝郁脾虛型抑郁癥的作用機(jī)制研究,負(fù)責(zé)人：于靜波；**通訊作者：韓越，講師，主要研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究；王宇紅，研究員，博士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥神經(jīng)精神藥理研究。

摘要摘要：目的分析鑒定柴胡水提物中的化學(xué)成分，探究柴胡抗抑郁活性成分。方法利用超高效液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF/MS）分析鑒定柴胡水提物中的化學(xué)成分。采用皮質(zhì)酮（CORT）誘導(dǎo)低分化PC12抑郁細(xì)胞模型，給予柴胡單體成分預(yù)處理PC12細(xì)胞24h，利用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力；利用乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒檢測(cè)細(xì)胞LDH釋放率。結(jié)果共鑒定出53個(gè)化學(xué)成分，主要為I型、II型及III型柴胡皂苷類成分。其中，柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F和6″-O-乙?；窈碥誂對(duì)柴胡代謝輪廓的貢獻(xiàn)度最大，并可增強(qiáng)CORT誘導(dǎo)PC12細(xì)胞活力（P<<0.05、P<0.01）；柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F可降低CORT誘導(dǎo)PC12細(xì)胞LDH釋放率（P<<0.05、P<0.01）。結(jié)論柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F可能為柴胡抗抑郁的主要活性成分，為柴胡質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供依據(jù)。關(guān)鍵詞：柴胡；抑郁癥；液質(zhì)聯(lián)用；PC12細(xì)胞；活性成分中圖分類號(hào)：R284.1StudyonAnti-DepressionActiveIngredientsofBupleuriRadixBasedonUPLC-Q-TOF/MSIntegratedwithCORT-InducedPoorlyDifferentiatedPC12DepressionCellModelYuJingbo1,2,HanYue3,ZhouZiyang1,2,MuQingrui1,2,ChenJingmei3,OuyangYuqin3,FeiZhang3,WangYuhong1,2（1.HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,TechnologyInnovationCenter/NationalKeyLaboratoryBreedingBaseofChineseMedicinePowdersandInnovativeDrugs,Changsha410208,China;2.HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,HunanKeyLaboratoryofTraditionalChineseMedicinePrevention&TreatmentofDepressionDiseases,Changsha410208,China;3.HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,CollegeofPharmacy,Changsha410208,China）Abstract:ObjectiveToanalyzethechemicalconstituentsinthewaterextractofBupleuriRadixandinvestigatetheactiveingredientsofBupleuriRadixforthetreatmentofdepression.MethodsThechemicalconstituentsinthewaterextractofBupleuriRadixwereidentifiedbyUltra-high-performanceliquidchromatographycoupledwithquadrupoletime-of-flightmassspectrometry(UPLC-Q-TOF/MS).CORT-inducedpoorlydifferentiatedPC12depressioncellmodelwaslaunched,andPC12cellswerepretreatedwithmonomericcompoundsfromBupleuriRadixfor24h.ThecellviabilityandLDHreleaserateweremeasuredbyCCK-8assykitandLDHassaykit,respectively.ResultsAtotalof53compoundswereidentifiedinthewaterextractofBupleuriRadix,mainlyincludingtypeI,typeIIandtypeIIIsaikosaponins.Amongthem,saikosaponinA,saikosaponinB2,saikosaponinC,saikosaponinE,saikosaponinFand6″-acetylsaikosaponinAcontributedthemosttothemetaboliteprofileofBupleuriRadix,andcouldimprovetheviabilityofCORT-inducedPC12cells(P<<0.05,P<0.01).Furthermore,saikosaponinA,saikosaponinB2,saikosaponinC,saikosaponinEandsaikosaponinFcoulddecreasetheLDHreleaserateofCORT-inducedPC12cells(P<<0.05,P<0.01).ConclusionThemajoranti-depressionactiveingredientsinBupleuriRadixmaybeSaikosaponinA,saikosaponinB2,saikosaponinC,saikosaponinEandsaikosaponinF,whichlaysafoundationfortheresearchofthequalitycontrolandpharmacodynamicmaterialbasisofBupleuriRadix.KeywordsKeywords:BupleuriRadixdepressionDepressionLC-MStechniquePC12cellsactiveActiveingredients抑郁癥是以情緒功能障礙、思維遲緩、意志力減退、認(rèn)知功能損害和社會(huì)功能障礙為主要臨床特征的精神疾病[1]。抑郁癥現(xiàn)已成為自殺的首要因素，嚴(yán)重影響人類生活質(zhì)量[2]。柴胡BupleuriRadix為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狹葉柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根，性微寒，味辛苦辛、苦，歸肝、膽、肺經(jīng)，具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣之功[3]。柴胡為臨床治療抑郁癥中最為常用的中藥，是多個(gè)抗抑郁療效明確的復(fù)方如《傷寒論》中四逆散、《太平惠民和劑局方》中逍遙散、《景岳全書》中柴胡疏肝散等的基礎(chǔ)藥物[4]。從柴胡中已分離鑒定得到皂苷類、黃酮類、多糖類、木脂素類等成分。研究表明柴胡皂苷類成分具有抗抑郁作用[5]。在柴胡抗抑郁活性成分研究中，關(guān)于柴胡總皂苷、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D的研究報(bào)道較多。由于柴胡皂苷極性強(qiáng)、結(jié)構(gòu)相似、同分異構(gòu)體較多，其他成分的抗抑郁作用尚需進(jìn)一步探明。因此本實(shí)驗(yàn)通過超高效液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF/MS）技術(shù)獲得柴胡代謝輪廓，鑒定柴胡中的化學(xué)成分，并利用皮質(zhì)酮（CORT）誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷模型對(duì)關(guān)鍵成分進(jìn)行活性篩選，最終探究柴胡抗抑郁活性成分。1儀器與試藥1.1儀器AcquityTMUPLC液相色譜儀、XEVOG2-XSQ-TOF/MS質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI）、MassLynxV4.1工作站（美國(guó)Waters公司）；LE204E/02型電子天平（梅特勒托利多儀器有限公司）；KQ5200DV型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Mini-QIntergral純水系統(tǒng)（美國(guó)Millipore公司）。1.2試藥柴胡飲片（產(chǎn)地為河北，批號(hào)20180601），購于北京同仁堂藥店；對(duì)照品柴胡皂苷A（批號(hào)P03M9F50593）、柴胡皂苷D（批號(hào)P26N11F132137）、6″-O-乙酰基柴胡皂苷A（批號(hào)Z02A10L94589）、柴胡皂苷E（批號(hào)M28GB150097）和阿魏酸（批號(hào)G27A11L112005）購于上海源葉生物科技有限公司；柴胡皂苷C（批號(hào)wkq21101907）、柴胡皂苷F（批號(hào)wkq21070102）、柴胡皂苷B2（批號(hào)wkq21070611）和槲皮苷（批號(hào)wkq21022402）購于四川維克奇生物科技有限公司；前柴胡皂苷F（批號(hào)21121701）購于成都普菲德生物技術(shù)有限公司；綠原酸（批號(hào)110753-201817）和異槲皮苷（批號(hào)111809-201804）購于中國(guó)食品藥品鑒定研究院；以上標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥≥98.00%。質(zhì)譜純甲醇、乙腈購于美國(guó)ThermoFisher公司；甲酸購于德國(guó)CNW公司，其他試劑均為分析純；CCK-8試劑盒（批號(hào)CK04）購于日本同仁化學(xué)研究所；乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（批號(hào)C0017）購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司。2方法2.1色譜條件色譜柱為ACQUITYUPLCBEHC18柱（100mm××2.1mmi.d.,1.7μm）；流動(dòng)相為0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），洗脫梯度為0~-2min，98%~%-90%A；2~-6min，90%~%-80%A；6~-12min，80%~%-65%A；12~-15min，65%~%-60%A；15~-22min，60%~%-50%A；22~-26min，50%~%-20%A；26~-27min，20%~%-0%A；柱溫40℃；樣品倉溫度10℃；流速為0.3mL/·min-1；進(jìn)樣體積6μL；色譜儀流出液不經(jīng)分流直接注入質(zhì)譜儀進(jìn)行正負(fù)離子掃描。2.2質(zhì)譜條件電噴霧離子源（ESI），正負(fù)離子檢測(cè)的全模式，質(zhì)量掃描范圍：m/z50~-1500Da，毛細(xì)管電壓正負(fù)模式下分別為3.0kV、2.5kV，樣品錐孔電壓：40V，離子源溫度100℃，去溶劑化氣流溫度400℃，錐孔氣流50L/·h-1，去溶劑氣流量800L/800L·h-1。利用亮氨酸-腦啡肽（[M+H]+=556.2771，[M-H]-=554.2615）作為內(nèi)標(biāo)液進(jìn)行質(zhì)量實(shí)時(shí)校正，流速10μL/·min-1。2.3對(duì)照品溶液的制備精密稱取阿魏酸、綠原酸、槲皮苷、異槲皮苷、柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F、前柴胡皂苷F、6″-O-乙?；窈碥誂對(duì)照品適量，以甲醇溶解，分別配置成濃度為1.0mg/·mL-1的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，置于同一容量瓶中，再用逐級(jí)甲醇稀釋，得到混合對(duì)照品溶液。過0.22μm濾膜供液質(zhì)分析。2.4供試品溶液的制備將柴胡飲片在15倍量水中浸泡1h，煎煮2h，紗布過濾，收集濾液；濾渣加10倍量水，煎煮1.5h，紗布過濾，合并兩次濾液。將濾液旋轉(zhuǎn)濃縮，冷凍干燥制備成凍干粉。取柴胡凍干粉50mg左右，精密稱定，置于10mL容量瓶中，加50%甲醇溶液定容至刻度，密封，并超聲30min，溶液于4℃，1300013000rpm請(qǐng)換算為r·min-1離心15min，取上清液。上清液過0.22μm請(qǐng)換算為r·min-12.5柴胡抗抑郁活性成分篩選2.5.1細(xì)胞分組、造模及給藥低分化PC12細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛、100U/·mL-1青霉素和100μg/·mL-1鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，放置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待2~-3d后天后進(jìn)行細(xì)胞傳代處理。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PC12細(xì)胞，以1××104/·mL-1接種于96孔板中，分為對(duì)照組、模型組和給藥組等，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)24h后，棄去培養(yǎng)基，模型組加入含200μMmol·L-1CORT的無血清培養(yǎng)基；給藥組加入含25μMmol·L-1待測(cè)單體和200μMmol·L-1CORT的無血清培養(yǎng)基；對(duì)照組加入等量的無血清培養(yǎng)基。各組繼續(xù)培養(yǎng)24h后，根據(jù)試劑盒進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.5.2細(xì)胞活力的測(cè)定取待測(cè)96孔板，每孔加入10μLCCK-8溶液，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1~-4h后，用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。細(xì)胞活力=（A實(shí)驗(yàn)組-A培養(yǎng)液）/（A對(duì)照組-A培養(yǎng)液）×100%2.5.3乳酸脫氫酶（LDH）的測(cè)定取待測(cè)96孔板，400×g請(qǐng)換算為r·min-1離心5min，收集細(xì)胞培養(yǎng)液于新的96孔板，向各孔中加入LDH檢測(cè)工作液，混勻后室溫避光孵育30min，在490nm處測(cè)定LDH吸光度值。LDH釋放率=（A實(shí)驗(yàn)組-A培養(yǎng)液）/（A對(duì)照組-A培養(yǎng)液）×100%請(qǐng)換算為r·min-12.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±S.D.均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）形式表示。利用SPSS17SPSS17.0進(jìn)行ANOVA差異分析，P<<0.05表示具有顯著性差異，P<<0.01表示具有極顯著性差異。3結(jié)果3.1基于UPLC-Q-TOF/MS的柴胡水提物化學(xué)成分鑒定采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)對(duì)柴胡水提物中的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，獲得其代謝產(chǎn)物的化學(xué)信息。正、負(fù)離子模式下，代表性的柴胡水提物代謝輪廓見圖1。根據(jù)采集的化合物MS/MS質(zhì)譜信息結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)庫、參考文獻(xiàn)[6-14]及標(biāo)準(zhǔn)品等對(duì)柴胡體外成分進(jìn)行分析表征。利用采集的精確分子量計(jì)算化合物的元素組成，利用采集的二級(jí)碎片信息對(duì)該成分進(jìn)行表征。最終鑒定柴胡中54個(gè)化學(xué)成分，其中酚酸及其苷類10個(gè)，包括綠原酸、隱綠原酸、阿魏酰基奎寧酸等；黃酮及其苷類5個(gè)，如蘆丁、異槲皮苷、水仙苷等；皂苷類35個(gè)，如柴胡皂苷A、柴胡皂苷C、柴胡皂苷B2等；其他有機(jī)酸類、氨基酸類、核苷酸類4個(gè)成分，結(jié)果見表1。圖1正離子模式（A）和負(fù)離子模式（B）下，基于UPLC-Q-TOF/MS的柴胡水提物代謝輪廓

表1柴胡體外成分鑒定序號(hào)tR(（min)）測(cè)量值加合離子質(zhì)量誤差(（ppm)）分子式碎片離子推測(cè)化合物參考文獻(xiàn)11.16191.0199[M-H]-+3.7C6H8O7191.01,173.01,129.01,111.01枸櫞酸（Citric

acid）枸櫞酸（Citricacid）[17]21.54268.1044[M+H]+-0.7C10H13N5O4268.10,136.06,119.03腺苷（Adenosine）[18]31.64282.0840[M-H]-+0.7C10H13N5O5282.08,150.04,133.01鳥苷（Guanosine）mzCloudDatabse#41.74169.0132[M-H]--3.0C7H6O5169.01,125.02,108.02,97.02沒食子酸（Gallicacid）[17]52.42315.0718[M-H]-+0.6C13H16O9315.07,153.02,109.03原兒茶酸-葡萄糖苷（Protocatechuicacid-glucoside）mzCloudDatabse#62.61153.0194[M-H]-+3.9C7H6O4153.02,109.03原兒茶酸（Protocatechuicacid）[18]72.89353.0873[M-H]--0.3C16H18O9353.09,191.05,179.03,173.05,161.02,135.05新綠原酸（Neochlorogenicacid）[20]#83.13205.0971[M+H]+-2.9C11H12N2O2205.10,188.07,170.06,143.07,118.06色氨酸（Tryptophan）[19]93.60353.0863[M-H]--0.3C16H18O9353.09,191.05,179.03,173.04,161.02,135.04綠原酸（Chlorogenicacid）*[6]103.78353.0879[M-H]-+1.7C16H18O9353.09,191.05,179.03,173.04,161.02,135.04隱綠原酸（Cryptochlorogenicacid）[20]#113.86367.1029[M-H]--1.1C17H20O9367.10,323.12,193.05,191.05,173.05,134.03阿魏?；?奎寧酸（Feruloyl-quinicacid）[20]#124.03179.0342[M-H]--1.1C9H8O4179.03,135.04咖啡酸（Caffeicacid）[18]134.32221.0086[M-H]-+1.4C10H6O6221.01,177.02,135.01柴胡色原酮酸（Saikochromicacid）[19]145.96609.1467[M-H]-+1.8C27H30O16300.02,271.09蘆?。≧utin）[15]155.96193.0488[M-H]-+1.6C10H10O4178.03,134.04阿魏酸（FerulicacidFerulicacid）*[12]166.21463.0895[M-H]--2.6C21H20O12301.03,300.03,283.03,271.02,255.03,243.03,151.00,135.00異槲皮苷（Isoquercitrin）*[15]176.86515.1188[M-H]--0.4C25H24O12353.09,191.05,179.03,173.04,135.04二咖啡?；鼘幩幔―icaffeoylquinicacid）[20]#186.97623.1612[M-H]--1.9C28H32O16315.05,300.02水仙苷（Narcisin）[6]197.15447.0928[M-H]-+0.2C21H20O11301.03,300.03,271.01,151.04槲皮苷（Quercitrin）*[15]207.331003.5076[M+HCOO]--3.8C48H78O191003.51,957.50,811.46,795.50柴胡皂苷Q（SaikosaponinQ）[13]218.641017.4843[M+HCOO]--3.2C48H76O201017.48,971.48,941.45,779.42,633.41未鑒定（Notidentified）-2210.68843.4714[M+HCOO]--3.6C42H70O14843.47,797.47,635.42羥基-柴胡皂苷A（Hydroxysaikosaponin

A）[15]2311.82987.5120[M+HCOO]--4.6C48H78O18987.51,941.50,795.44,779.45,633.41柴胡皂苷C（SaikosaponinC）[16]2312.04987.5121[M+HCOO]--4.5C48H78O18987.51,941.50,795.44,779.45,633.42柴胡皂苷N（SaikosaponinN）[13]2412.33989.5273[M+HCOO]--4.9C48H80O18989.53,943.52,797.45,781.48,635.41羥基柴胡皂苷C（Hydroxysaikosaponin

C）[13]2512.83987.5128[M+HCOO]--3.7C48H78O18987.51,941.50,795.45,779.45,633.40柴胡皂苷S（SaikosaponinS）[13]2613.41971.5192[M+HCOO]--2.5C48H78O17971.52,925.51,779.45,763.46,617.39柴胡皂苷C（SaikosaponinC）*[12]2713.57973.5327[M+HCOO]--4.6C48H80O17973.53,927.53,781.47,765.47,619.41柴胡皂苷F（SaikosaponinF）*[12]2813.901013.5273[M+HCOO]--4.8C50H80O181013.53,967.53,925.51,907.48,779.45乙?；窈碥誄（Acetyl-SaikosaponinC）[13]2914.051015.5428[M+HCOO]--4.9C50H82O181015.54,969.54,927.53,909.51,781.45乙?；窈碥誇（Acetyl-SaikosaponinF）[13]3015.001013.5286[M+HCOO]--3.5C50H80O181013.53,967.53,925.51,907.50,779.48乙?；窈碥誄（Acetyl-SaikosaponinC）[13]3115.171015.5438[M+HCOO]--3.9C50H82O181015.54,969.54,927.52,909.51,781.45乙酰基柴胡皂苷F（Acetyl-SaikosaponinF）[13]3215.68987.5123[M+HCOO]--4.3C48H78O18987.51,941.50,779.46,617.42醉魚草皂苷IV或其異構(gòu)體（BuddlejasaponinIVoritsisomer）[13]3315.77987.5123[M+HCOO]--4.2C48H78O18987.51,941.50,779.45,617.42醉魚草皂苷IV或其異構(gòu)體（BuddlejasaponinIVoritsisomer）[13]3416.15825.4639[M+HCOO]-+0.4C42H68O13825.46,779.45,617.40,161.04,145.05柴胡皂苷A（SaikosaponinA）*[12]3916.30825.4595[M+HCOO]--5.0C42H68O13825.46,779.45,617.40,161.04,145.05柴胡皂苷B2（SaikosaponinB2）*[12]3516.64987.5118[M+HCOO]--4.8C48H78O18987.51,941.51,779.46,617.42醉魚草皂苷IV或其異構(gòu)體（BuddlejasaponinIVoritsisomer）[13]3616.95987.5125[M+HCOO]--4.1C48H78O18987.51,941.50,779.46,617.42醉魚草皂苷IV或其異構(gòu)體（BuddlejasaponinIVoritsisomer）[13]3717.09867.4703[M+HCOO]--4.2C44H70O14867.47,821.46,779.45,761.45,617.40,471.34,161.04,145.052″-O-乙?；窈碥誂（2″-O-Acetyl-SaikosaponinA）[12]3817.28867.4706[M+HCOO]--4.1C44H70O14867.47,821.46,779.45,761.45,617.40,471.35,161.04,145.053″-O-乙?；窈碥誂（3″-O-Acetyl-SaikosaponinA）[12]4017.58867.4703[M+HCOO]--4.5C44H70O14867.47,821.46,779.45,761.44,617.40,471.35,161.04,145.054″-O-乙?；窈碥誂（4″-O-Acetyl-SaikosaponinA）[12]4117.68663.4104[M+HCOO]-+0.4C36H58O8663.41,617.40,471.34前柴胡皂苷F（ProsaikogeninF）*[13]4218.34809.4667[M+HCOO]--2.5C42H68O12809.47,763.46,601.41,161.04柴胡皂苷E（SaikosaponinE）*[12]4319.07867.4706[M+HCOO]--4.1C44H70O14867.47,821.46,779.45,761.44,617.40,471.34,161.04,145.056″-O-乙?；窈碥誂（6″-O-Acetyl-SaikosaponinA）*[12]4419.36809.4657[M+HCOO]--3.7C42H68O12809.47,763.45,601.41柴胡皂苷M（SaikosaponinM）[12]4519.71865.4563[M+HCOO]--3.1C44H68O14865.46,819.46,777.42,759.47,615.3723,28-Dihydroxy-16-oxooleana-11,13(18)-dien-3-yl3-O-(acetyl-β-D-glucopyranosyl)-6-deoxy-β-D-galactopyranoside#4620.17825.4634[M+HCOO]--0.2C42H68O13825.46,799.46,617.40柴胡皂苷D（SaikosaponinD）*[12]4720.24867.4711[M+HCOO]--4.8C44H70O14867.47,821.46,779.46,761.46,617.40乙?；窈碥誃2（Acetyl-SaikosaponinB2）[13]4820.62867.4711[M+HCOO]--3.6C44H70O14867.47,821.46,779.46,761.45,617.402″-O-乙?；窈碥誅（2″-O-Acetyl-SaikosaponinD）[12]4920.75823.4434[M+HCOO]--5.6C42H66O13823.44,777.44,615.39,469.3323-Hydroxy-13,28-epoxyolean-11-en-16-one-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-fucopyranoside[13]5020.83909.4815[M+HCOO]--3.6C46H72O15909.48,863.48,821.47,803.45,779.46,761.44,617.40二乙?；窈碥誂（DiacetylsaikosaponinA）[6,14]5121.10909.4814[M+HCOO]--3.7C46H72O15909.48,863.47,821.47,803.45,779.45,761.44,617.40二乙?；窈碥誃2（DiacetylsaikosaponinB2）[6,14]5221.56867.4695[M+HCOO]--5.4C44H70O14867.47,821.46,779.45,761.44,617.403″-O-乙?；窈碥誅（3″-O-Acetyl-SaikosaponinD）[12]5323.31867.4706[M+HCOO]--5.1C44H70O14867.47,821.46,779.46,761.45,617.406″-O-乙?；窈碥誅（6″-O-Acetyl-SaikosaponinD）[12]5423.66865.4563[M+HCOO]--3.1C44H68O14865.46,819.45,777.43,759.45,615.4223-Hydroxy-13,28-epoxyolean-11-en-16-one-3-O-(acetyl-β-D-glucopyranosyl)-β-D-fucopyranoside#注：“*”代表化學(xué)成分經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)品鑒定；“#”代表在柴胡中首次發(fā)現(xiàn)。3.1.1酚酸及其苷類成分鑒定從柴胡中共鑒定了10個(gè)酚酸類成分，包括化合物4~-7、9~-12、15、17。該類化合物的主要裂解途徑為H2O、COOH、CO等小分子丟失，且羰基處易于斷裂而產(chǎn)生相應(yīng)的碎片離子。以綠原酸為例（圖2），保留時(shí)間3.60min，ESI-模式下檢測(cè)到綠原酸的準(zhǔn)分子離子峰為m/z353.0863[M-H]-，計(jì)算其元素組成為C16H18O9；二級(jí)質(zhì)譜顯示母離子酯鍵斷裂產(chǎn)生碎片峰m/z191.0542[M-H-C9H6O3]-和m/z161.0222[M-H-C7H12O6]-；碎片離子m/z191.0542脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片峰m/z173.0441，再脫去CH2O2產(chǎn)生碎片峰m/z127.0378；母離子C-O鍵斷裂產(chǎn)生碎片離子m/z179.0316[M-H-C7H10O5]-和碎片離子m/z173.0441[M-H-C9H8O4]-；碎片離子m/z179.0316脫去CO2產(chǎn)生碎片峰m/z135.0421。圖2負(fù)離子模式下，綠原酸全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級(jí)質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）3.1.2黃酮及其苷類成分鑒定從柴胡中共鑒定了5個(gè)黃酮及其苷類成分，其中14、16、18、19均為黃酮醇苷類化合物。該類化合物的主要裂解途徑為苷鍵斷裂、苷元C環(huán)RDA裂解發(fā)生1，3鍵和0，2鍵的斷裂及CO、H2O等中性離子丟失。以異槲皮苷為例（圖3），保留時(shí)間6.21min，ESI-模式下檢測(cè)到異槲皮苷的準(zhǔn)分子離子峰為m/z463.0895[M-H]-，計(jì)算其元素組成為C21H20O12；二級(jí)質(zhì)譜顯示母離子脫去葡萄糖殘基產(chǎn)生苷元m/z301.0345[M-H-Glu]-及m/z300.0276[M-2H-Glu]-；苷元脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片峰m/z283.0264，再丟失CO產(chǎn)生碎片峰m/z255.0295；苷元丟失CH2O產(chǎn)生碎片峰m/z271.0246，再丟失CO產(chǎn)生碎片峰m/z243.0290；苷元C環(huán)1，3鍵斷裂產(chǎn)生碎片峰m/z151.0028[1,3A]-；苷元C環(huán)0，2鍵斷裂產(chǎn)生碎片峰m/z135.0074[0,2B]-。圖3負(fù)離子模式下，異槲皮苷全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級(jí)質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）3.1.3柴胡皂苷類成分鑒定柴胡皂苷結(jié)構(gòu)均為五環(huán)三萜齊墩果烷型衍生物，其苷元可分為環(huán)氧醚型（I型），異環(huán)雙稀型（II型），12-稀型（III型），同環(huán)雙稀型（IV型），12-稀-28-羧酸型（V型），異環(huán)雙稀-30-羧酸型（VI型），18-稀型（VII型）7種不同類型，柴胡皂苷中一般只含有葡萄糖，夫糖，鼠李糖，木糖和戊糖醇[15]。通過分析對(duì)照品柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷F等的二級(jí)質(zhì)譜圖對(duì)柴胡皂苷類成分質(zhì)譜裂解途徑進(jìn)行歸納。柴胡皂苷A屬于I型柴胡皂苷。如圖4所示，保留時(shí)間16.15min，ESI+模式下檢測(cè)到柴胡皂苷A的準(zhǔn)分子離子峰為m/z781.4736[M+H]+，另外還存在加合形式為[M+Na]+的離子m/z803.4551，計(jì)算其元素組成為C42H68O13；二級(jí)質(zhì)譜顯示母離子脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z763.4595[M+H-H2O]+，再脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z745.4531[M+H-2H2O]+；碎片離子m/z763.4595脫去1個(gè)葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z601.4061，進(jìn)一步脫去1個(gè)夫糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z455.3508；碎片離子m/z745.4531脫去1個(gè)葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z583.3939，進(jìn)一步脫去1個(gè)夫糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z437.3431。柴胡皂苷D與柴胡皂苷A為差向異構(gòu)體，產(chǎn)生的二級(jí)碎片相同。柴胡皂苷B2屬于II型柴胡皂苷。如圖5所示，保留時(shí)間16.30min，ESI+模式下檢測(cè)到柴胡皂苷B2的準(zhǔn)分子離子峰為m/z781.4766[M+H]+，另外還存在加合形式為[M+Na]+的離子m/z803.4597，計(jì)算其元素組成為C42H68O13；二級(jí)質(zhì)譜顯示母離子脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z763.4666[M+H-H2O]+，再脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z745.4558[M+H-2H2O]+；碎片離子m/z763.4666脫去1個(gè)葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z601.4129，進(jìn)一步脫去1個(gè)夫糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z455.3533，還可同時(shí)脫去C16位羥基與C17位羥甲基產(chǎn)生碎片峰m/z407.3314；碎片離子m/z745.4558脫去1個(gè)葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z583.4021，再脫去1個(gè)夫糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z437.3425。柴胡皂苷F屬于III型柴胡皂苷。如圖6所示，保留時(shí)間13.57min，ESI+模式下檢測(cè)到柴胡皂苷F的準(zhǔn)分子離子峰為m/z929.5519[M+H]+，另外還存在加合形式為[M+Na]+的離子m/z951.5340，計(jì)算其元素組成為C48H80O17；二級(jí)質(zhì)譜顯示母離子脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z911.5388[M+H-H2O]+，再脫去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z893.5281[M+H-2H2O]+；碎片離子m/z911.5388脫去1個(gè)鼠李糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z765.4766，再脫去1個(gè)葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z603.4261，進(jìn)一步脫去1個(gè)葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z441.3725，還可同時(shí)脫去C16位羥基與C17位羥甲基產(chǎn)生碎片峰m/z393.3501；碎片離子m/z893.5281脫去1個(gè)鼠李糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z747.4681，再脫去1個(gè)葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z585.4155，再脫去1個(gè)葡萄糖殘基產(chǎn)生碎片峰m/z423.3621。故推測(cè)柴胡皂苷的裂解方法主要為糖基及苷元上取代基的丟失，并以此為基礎(chǔ)對(duì)柴胡中其他皂苷類成分進(jìn)行表征。圖4正離子模式下，柴胡皂苷A全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級(jí)質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）

圖5正離子模式下，柴胡皂苷B2全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級(jí)質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）圖6正離子模式下，柴胡皂苷F全掃描質(zhì)譜圖（A）、二級(jí)質(zhì)譜（B）和裂解途徑（C）根據(jù)BPI色譜圖中各成分的相對(duì)峰面積與總相對(duì)峰面積比值判斷其對(duì)柴胡代謝輪廓貢獻(xiàn)程度大小，進(jìn)而篩選活性成分[16]。經(jīng)計(jì)算得到柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷F、柴胡皂苷E、6″-O-乙?；窈碥誂對(duì)柴胡代謝輪廓的貢獻(xiàn)度較大，作為柴胡潛在抗抑郁活性成分。其中，柴胡皂苷A的貢獻(xiàn)度最大，占總輪廓的23.12%，見表2。

表2鑒定化合物對(duì)柴胡代謝輪廓的貢獻(xiàn)度序號(hào)鑒定化合物貢獻(xiàn)度1柴胡皂苷A（SaikosaponinA）23.12%2柴胡皂苷B2（SaikosaponinB2）6.07%3柴胡皂苷C（SaikosaponinC）8.97%4柴胡皂苷E（SaikosaponinE）1.75%5柴胡皂苷F（SaikosaponinF）8.08%66″-O-乙?；窈碥誂（6″-O-Acetyl-SaikosaponinA）14.62%3.2柴胡關(guān)鍵成分對(duì)CORT誘導(dǎo)的低分化PC12細(xì)胞活力的影響細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)中，如圖7所示，在200μMmol·L-1CORT作用下，PC12細(xì)胞活力為（58.27±%±3.04）%%）。與對(duì)照組比較，模型組PC12細(xì)胞活力顯著降低（P<<0.01）；與模型組比較，柴胡皂苷A組、柴胡皂苷B2組、柴胡皂苷C組、柴胡皂苷E組、柴胡皂苷F組、6″-O-乙?；窈碥誂組細(xì)胞活力顯著升高（P<<0.01或P<<0.05）。圖7柴胡關(guān)鍵成分對(duì)CORT誘導(dǎo)的低分化PC12細(xì)胞活力的影響（注：與空白組相比，**P<<0.01Vs空白；與皮質(zhì)酮組；相比，#P<<0.05,，##P<<0.01Vs皮質(zhì)酮組）。3.3柴胡關(guān)鍵成分對(duì)CORT誘導(dǎo)的低分化PC12細(xì)胞LDH釋放率的影響LDH釋放率實(shí)驗(yàn)中，如圖8所示，在200μMmol·L-1CORT作用下，PC12細(xì)胞的LDH實(shí)驗(yàn)率為（58.27±%±3.04）%%）。與對(duì)照組比較，模型組PC12細(xì)胞LDH釋放率顯著升高（P<<0.05）；柴胡皂苷A組、柴胡皂苷B2組、柴胡皂苷C組、柴胡皂苷E組、柴胡皂苷F組LDH釋放率顯著降低（P<<0.01或P<<0.05）。圖8柴胡關(guān)鍵成分對(duì)CORT誘導(dǎo)的低分化PC12細(xì)胞LDH釋放率的影響（*注：與空白組相比，**P<<0.05Vs空白01；與皮質(zhì)酮組；相比，#P<<0.05,，##P<<0.01Vs皮質(zhì)酮組）。4討論抑郁癥是一種具有廣泛臨床表現(xiàn)及多系統(tǒng)發(fā)病機(jī)制的精神疾病[17]，以整體觀念為指導(dǎo)原則的中醫(yī)藥在抑郁癥防治中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[18]。大量臨床及實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道柴胡提取物、藥對(duì)及類方抗抑郁癥作用明確[19-21]。但除柴胡皂苷A、柴胡皂苷D和柴胡皂苷B2，柴胡其他成分在抗抑郁作用方面的研究還未見報(bào)道。本研究首先利用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)對(duì)柴胡水提取物進(jìn)行成分分析，共鑒定包括酚類、黃酮類、皂苷類等54個(gè)化學(xué)成分，其中8個(gè)化學(xué)成分為從柴胡中首次報(bào)道，并推測(cè)鑒定出化合物45和54這2個(gè)苷元16位為羰基的新型柴胡皂苷類化合物。柴胡水提物中化學(xué)成分主要為I型、II型及III型柴胡皂苷類成分，且化學(xué)結(jié)構(gòu)之間具有聯(lián)系。柴胡皂苷A、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷E和6″-O-乙酰基柴胡皂苷A等均屬于I型柴胡皂苷。其中，柴胡皂苷A與2″-O-乙?；窈碥誂、3″-O-乙?；窈碥誂、4″-O-乙?；窈碥誂和6″-O-乙酰基柴胡皂苷A苷元相同，柴胡皂苷C與柴胡皂苷E苷元相同。柴胡皂苷A，可在體內(nèi)代謝為前柴胡皂苷F和柴胡皂苷元F[22]。柴胡皂苷B2、柴胡皂苷M和柴胡皂苷N等屬于II型柴胡皂苷，柴胡皂苷F屬于III型柴胡皂苷。柴胡皂苷B2可由I型柴胡皂苷柴胡皂苷D轉(zhuǎn)化而來。根據(jù)各成分相對(duì)峰面積與總相對(duì)峰面積比值判斷柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷F、柴胡皂苷E、6″-O-乙?；窈碥誂對(duì)柴胡代謝輪廓的貢獻(xiàn)度較大。四逆散為具有明確抗抑郁療效的中藥復(fù)方，周佳等[23]利用UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定四逆散水提物中主要成分的含量，測(cè)得柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D的含量分別為886.60μg/·g-1、122.32μg/·g-1、160.16μg/·g-1、29.61μg/·g-1，證明柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2和柴胡皂苷C對(duì)方中君藥柴胡的重要貢獻(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)通過測(cè)定細(xì)胞活力和LDH釋放率發(fā)現(xiàn)，具有較高貢獻(xiàn)度的柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷F、柴胡皂苷E、6″-O-乙?；窈碥誂對(duì)CORT誘導(dǎo)的低分化PC12抑郁細(xì)胞模型產(chǎn)生保護(hù)作用。文獻(xiàn)報(bào)道柴胡皂苷A可改善慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激誘導(dǎo)的圍絕經(jīng)期雌性大鼠的抑郁樣行為，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)海馬體中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)及炎癥因子相關(guān)[24]。Wang等[25]研究發(fā)現(xiàn)柴胡皂苷A可通過p-CREB/BDNF信號(hào)通路改善中風(fēng)化抑郁大鼠模型快感缺失、自主活動(dòng)降低、絕望等抑郁行為及抑制海馬神經(jīng)元凋亡。柴胡皂苷B2能夠保護(hù)CORT誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷，其作用機(jī)制主要與調(diào)節(jié)D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代謝、減少線粒體凋亡通路和抑制p38/NF-κB信號(hào)通路等密切相關(guān)[26]。曲中原等[27]利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷F可作用于MAPK1、FGF2、CASP3、MAPK8等14個(gè)核心靶點(diǎn)，通過PI3K-Akt、Ras、MAPK等信號(hào)通路發(fā)揮抗抑郁、抗炎、抗腫瘤作用。綜上推斷，由于柴胡皂苷結(jié)構(gòu)相近，如I型柴胡皂苷為具有13,28-環(huán)氧結(jié)構(gòu)的化合物，氧環(huán)不穩(wěn)定，在煎煮過程中或體內(nèi)代謝過程中轉(zhuǎn)化為II型柴胡皂苷，可協(xié)同發(fā)揮抗抑郁作用。本研究基于UPLC-Q-TOF/MS及CORT誘導(dǎo)的低分化PC12抑郁細(xì)胞模型，確定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F可能為柴胡主要的抗抑郁活性成分，為柴胡質(zhì)量控制及抗抑郁藥物研發(fā)提供依據(jù)。利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突參考文獻(xiàn)：1DaiYT,LiZY,XueLM,etal.Metabolomicsstudyontheanti-depressioneffectofxiaoyaosanXiaoyaosanonratmodelofchronicunpredictablemildstress.JEthnopharmacol,2010,128(2):482-489.2HuanY,WangY,WangHProf,Yueqin,Huang,etal.PrevalenceofmentaldisordersinChina:aAcross-sectionalepidemiologicalstudy.LancetPsychiatry,2019,6(3):211-224.3中國(guó)藥典[S].一部.2020請(qǐng)根據(jù)一下格式補(bǔ)充相關(guān)信息：國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部).北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:1271..請(qǐng)根據(jù)一下格式補(bǔ)充相關(guān)信息：國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部).北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:1271.4于冰清,邵欣欣,付曉凡,等.抗抑郁中藥復(fù)方的組方特點(diǎn)及作用機(jī)制研究.中草藥,2021,52(11):3344-3352.5楊久山,張楠,宋銘晶,等.柴胡總皂苷對(duì)小鼠抑郁樣行為及學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2016,22(24):134-139.6ShanLL,YangN,ZhaoYW,etal.ArapidclassificationandidentificationmethodappliedtotheanalysisofglycosidesinBupleuriradixandliquoricebyultrahighperformanceliquidchromatographycoupledwithquadrupoletime-of-flightmassspectrometry.JSepSci,2018,41(19):3791-3805.7LiuWX,ChengXL,KangR,etal.SystematiccharacterizationandidentificationofsaikosaponinsinextractsfromBupleurummarginatumvar.stenophyllumusingUPLC-PDA-Q/TOF-MS.FrontChem,2021,9:747987.8LeiTL,ChenSF,WangK,etal.Characterizationanddiscriminationofrawandvinegar-bakedBupleuriradixbasedonUHPLC-Q-TOF-MScoupledwithmultivariatestatisticalanalysis.BiomedChromatogr,2018,32(2).):10.9ZhuL,LiangZT,YiT,etal.ComparisonofchemicalprofilesbetweentherootandaerialpartsfromthreeBupleurumspeciesbasedonaUHPLC-QTOF-MSmetabolomicsapproach.BMCComplementAlternMed,2017,17(1):305.10孫健,張立富,范斌,等.柴胡皂苷類化學(xué)成分的LC-MS分析.中國(guó)藥物警戒,2012,9(12):725-727.11LiZY,SunHM,XingJ,etal.Chemicalandbiologicalcomparisonofrawandvinegar-bakedRadixBupleuri.JEthnopharmacol,2015,165:20-828.12歐小龍,黃濤陽.柴胡屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展.中藥材,2021,44(3):751-757749-755.13梁鴻,趙玉英,崔艷君,等.北柴胡中黃酮類化合物的分離鑒定.北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2000,32(3):223-225.14SunH,LiuJH,ZhangAH,etal.CharaterizationCharacterizationofthemultiplecomponentsofAcanthopanaxSenticosu