血清二氧化碳酶反應(yīng)終點(diǎn)法測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

血清二氧化碳酶反應(yīng)終點(diǎn)法測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)1.實(shí)驗(yàn)原理VitrosCO2試劑是一種干燥，多涂層的，在透明的聚合物支撐基片上涂有分析成份的化學(xué)干片。將一滴患者樣品滴于干片上，分布層會(huì)使之均勻地分布。分布層中的高PH值能確保樣品中所有的CO2以碳酸氫鹽的形式存在。碳酸氫鹽分布到凝膠層中，在磷酸烯醇式丙酮酸羥化酶的作用下被用來(lái)羥化磷酸烯醇式丙酮酸，生成草酰乙酸和無(wú)機(jī)磷。反應(yīng)最后是蘋(píng)果酸脫氫酶氧化NADH及還原草酰乙酸，生成NAD+和蘋(píng)果酸。本干片要在37℃下孵育。樣品中的CO2濃度是通過(guò)用反射光譜法測(cè)定未反應(yīng)的NADH的吸光度來(lái)確定的。測(cè)定方式：酶反應(yīng)終點(diǎn)法波長(zhǎng)：340nm測(cè)試時(shí)間和溫度：37℃約５分鐘反應(yīng)過(guò)程：磷酸烯醇式丙酮酸羥化酶碳酸氫根+磷酸烯醇式丙酮酸——————————→草酰乙酸+磷酸根蘋(píng)果酸脫氫酶草酰乙酸+NADH+H+————→蘋(píng)果酸+NAD2.標(biāo)本：2.1病人準(zhǔn)備：無(wú)特殊。2.2樣品類(lèi)型：血清；肝素鋰/鈉抗凝血漿。2.3標(biāo)本采集與處理：血清和血漿樣品：特別要注意的是：不要用枸櫞酸鹽作抗凝劑。不要從正在靜脈注射的手臂上采血。采血時(shí)盡量將真空管裝滿，否則測(cè)試結(jié)果最多會(huì)偏低3mmol/L。樣品采集后4小時(shí)內(nèi)要離心標(biāo)本，吸出血清。處理樣品時(shí)要將其當(dāng)成生物污染品。3.標(biāo)本的存放：血清、血漿室溫下密封保存最多24小時(shí)；4～8℃冷藏最多3天；-18℃冷凍保存可長(zhǎng)達(dá)1個(gè)月。4.標(biāo)本的運(yùn)輸：樣品要放在帶蓋的容器內(nèi)以防污染和蒸發(fā)，不加蓋的樣品杯在空氣中放置1小時(shí)，CO2濃度最多要偏低6mmol/L。5.標(biāo)本拒收的標(biāo)準(zhǔn)：污染、抗凝劑不符合要求，標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。6.試驗(yàn)材料：6.1測(cè)試CO2所需的物品包括：Vitros化學(xué)定標(biāo)物Kit2；Vitros特制質(zhì)控液；生理鹽水稀釋液。xx廠家提供原裝進(jìn)口，試劑盒外包裝上標(biāo)明了測(cè)試項(xiàng)目名稱(chēng)，試劑標(biāo)簽代碼，有效期限和儲(chǔ)藏溫度。6.1.1試劑組成：干片成分：反應(yīng)成份有磷酸烯醇式丙酮酸羥化酶，蘋(píng)果酸脫氫酶，磷酸烯醇式丙酮酸和NADH。其它成份有粘合劑，緩沖劑，抑制劑，染色劑，穩(wěn)定劑，表面活性劑和聚合物交叉連接劑。干片標(biāo)記：試劑盒外包裝上標(biāo)明了測(cè)試項(xiàng)目名稱(chēng)，試劑標(biāo)簽代碼，有效期限和儲(chǔ)藏溫度。6.1.2試劑準(zhǔn)備從冰箱中取出干片盒，在將干片盒打開(kāi)封裝并裝入儀器內(nèi)的干片儲(chǔ)藏器之前必須使其達(dá)到室溫狀態(tài)18～28℃。因此從冰箱中取出的試劑盒至少要在室溫下要放置60分鐘，而冷藏的試劑盒至少要在室溫下放置30分鐘。去除內(nèi)包裝后立即將干片盒放入儀器的儲(chǔ)藏器中。說(shuō)明：在試劑盒達(dá)到室溫后的24小時(shí)之內(nèi)必須將其裝入儀器中。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存未開(kāi)封的干片盒：存儲(chǔ)在2～8℃或低于該范圍。在機(jī)內(nèi)干片儲(chǔ)藏器中的干片盒：在儀器上放置時(shí)間不能超過(guò)4周，否則要更換新試劑。當(dāng)儀器關(guān)閉時(shí)間不超過(guò)2個(gè)小時(shí)時(shí)，可將干片盒留在儲(chǔ)藏器中。出現(xiàn)以下情形要做質(zhì)控檢測(cè)：儀器關(guān)閉時(shí)間超過(guò)2小時(shí)；再次裝載從儀器儲(chǔ)藏器中取出的干片盒。如果儲(chǔ)藏正確，VitrosCO2干片可保質(zhì)到包裝盒上標(biāo)明的有效期限。參見(jiàn)VITROS250干化學(xué)分析儀試劑穩(wěn)定性及貯存.SOP文件。6.1.4變質(zhì)指示：超過(guò)有效期的試劑干片不能使用。6.1.5注意事項(xiàng)：為避免干片盒打開(kāi)以前其內(nèi)包裝受損，不能摔打干片盒；不要讓尖利物刺入內(nèi)包裝。6.2校準(zhǔn)品：用Vitros化學(xué)定標(biāo)物Kit2。血清，尿液和腦脊液都用相同的定標(biāo)液，不過(guò)各自的SAVs值不同。有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)液的配制，使用及保存的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS250干化學(xué)分析儀校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3質(zhì)控品：使用Vitros特制的質(zhì)控物品；若使用其它的一些質(zhì)控物品，當(dāng)與別的CO2測(cè)試方法比較時(shí)就會(huì)出現(xiàn)差異，如：用人血清/血漿混合物分離制成的質(zhì)控物品；含有高濃度防腐劑，穩(wěn)定劑和其它化學(xué)添加劑的質(zhì)控物品；乙烯乙二醇作穩(wěn)定劑的質(zhì)控物品不能使用。有關(guān)質(zhì)控液的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS250干化學(xué)分析儀校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。7.儀器美國(guó)xx廠家VITROS250全自動(dòng)干式生化分析儀。具體測(cè)試程序請(qǐng)參閱操作手冊(cè)的介紹。8.操作步驟：將試劑復(fù)溫后直接放入儀器，樣品編程，儀器5分后自動(dòng)打印結(jié)果。具體測(cè)試程序請(qǐng)參閱VITROS250操作手冊(cè).SOP。具體定標(biāo)程序：參閱操作手冊(cè)的相關(guān)章節(jié)內(nèi)容。何時(shí)進(jìn)行定標(biāo)：——在維護(hù)和保養(yǎng)時(shí)更換了儀器的重要部件。——質(zhì)控結(jié)果持續(xù)超出線性范圍內(nèi)時(shí)，詳情參閱操作手冊(cè)。——管理?xiàng)l例上指定的時(shí)間，在美國(guó)，CLIA要求至少每6個(gè)月定標(biāo)一次。9.檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10.質(zhì)量控制：操作建議：將質(zhì)控物質(zhì)當(dāng)成生物污染品來(lái)處理；將質(zhì)控液與患者樣品同時(shí)進(jìn)行測(cè)試；每天至少做一次質(zhì)控以檢測(cè)儀器運(yùn)行狀況；選擇質(zhì)控濃度來(lái)檢查與臨床的相關(guān)性；其它詳情參閱操作手冊(cè)質(zhì)控章節(jié)的有關(guān)內(nèi)容。有關(guān)質(zhì)控操作的常規(guī)性條例可參照國(guó)際質(zhì)控檢測(cè)（IQCT）的內(nèi)容。在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把質(zhì)控血清作為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見(jiàn)生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11.計(jì)算方法：以用Vitros化學(xué)定標(biāo)物校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測(cè)結(jié)果，以mmol/L報(bào)告。12.參考值范圍國(guó)際單位(mmol/L)血清/血漿22-30mmol/L此參考范圍是測(cè)試60位健康成人，然后取靶值附近95%的結(jié)果計(jì)算所得。參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13.臨床意義：碳酸—碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)是人體中維持血液PH平衡的重要緩沖系統(tǒng)。進(jìn)行總二氧化碳（即碳酸氫鹽加上溶解的二氧化碳）測(cè)定，再結(jié)合臨床及實(shí)驗(yàn)室的其它測(cè)試值，可用于確定人體酸堿平衡的失調(diào)?；己粑运嶂卸荆x性堿中毒和堿攝入過(guò)量都會(huì)造成總CO2升高。CO2濃度下降見(jiàn)于代償性呼吸性堿中毒，代謝性酸中毒和腎功能失調(diào)使氫離子排泄不掉而導(dǎo)致的CO2降低。14.操作性能14.1線性范圍：血清5.0-40mmol/L。14.2精密度：在Vitros250生化儀上用質(zhì)控液來(lái)測(cè)精密度。結(jié)果反映了該方法的精密度。當(dāng)儀器維護(hù)，周?chē)h(huán)境，干片處理和保存，質(zhì)控液的復(fù)溶以及樣品處理等方面發(fā)生變化都會(huì)影響結(jié)果的重復(fù)性。日間精密度血清(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)室間精密度n=20天(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品1n=78270.5樣品1270.72.5樣品2n=78130.4樣品2130.53.9*日間精密度是將2至3份相同的樣品在一天中運(yùn)行兩次，然后對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算。**室間精密度是用同一個(gè)批號(hào)的干片每周定標(biāo)一次，然后對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算。14.3方法學(xué)比較：用Vitros700儀器和康寧965型分析儀測(cè)總二氧化碳的方法分別測(cè)試相同血清樣品，對(duì)比結(jié)果顯示Vitros方法的準(zhǔn)確度良好。用Vitros250儀器與Vitros700儀器測(cè)試相同的血清樣品，對(duì)比結(jié)果顯示Vitros250方法的準(zhǔn)確度良好，血清：Y=0.97X+0.23（r=0.993，N=90，檢測(cè)范圍6.8-28.4mmol/L）。14.4靈敏度：本試劑的檢測(cè)下限為血清5.0mmol/L。14.5特異性：經(jīng)測(cè)試，以下物質(zhì)對(duì)VitrosCO2干片法均無(wú)干擾（偏差<1.9mmol/L）。撲熱息痛20mg/dL、乙酰乙酸20mg/dL、乙酰水楊酸50mg/dL、α-酮已酸20mmol/L、氨基水楊酸60mg/dL、氨0.5mmol/L、精氨基琥珀酸20mmol/LL、維生素C3mg/dL、苯甲酰胺20mmol/L、苯磺酸鹽20mmol/L、苯甲酸20mmol/L、苯甲醇20mmol/L、膽紅素（未結(jié)合）20mg/dL等等。14.6病人結(jié)果可報(bào)告范圍：血清5.0-40mmol/L。15.超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限為血清40mmol/L。如果樣品中CO2濃度超出系統(tǒng)的測(cè)試線性范圍，請(qǐng)按下列步驟進(jìn)行稀釋?zhuān)貉寤蜓獫{用生理鹽水稀釋?zhuān)匦聹y(cè)試，將測(cè)試結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，就得到原始樣品中CO2的濃度。16.病危報(bào)警值的處理17.方法局限性17.1本法線性上限為血清40mmol/L。如果樣品中CO2CP濃度超出系統(tǒng)的測(cè)試線性范圍，請(qǐng)按下列步驟進(jìn)行稀釋?zhuān)貉寤蜓獫{用生理鹽水稀釋?zhuān)匦聹y(cè)試，將測(cè)試結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，就得到原始樣品中CO2CP的濃度。17.2干擾物質(zhì)：乳酸脫氫酶達(dá)4