乳酸脫氫酶及其輔酶的作用_第1頁(yè)
乳酸脫氫酶及其輔酶的作用_第2頁(yè)
乳酸脫氫酶及其輔酶的作用_第3頁(yè)
乳酸脫氫酶及其輔酶的作用_第4頁(yè)
乳酸脫氫酶及其輔酶的作用_第5頁(yè)
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關(guān)于乳酸脫氫酶及其輔酶的作用第1頁(yè)，講稿共7頁(yè)，2023年5月2日，星期三乳酸脫氫酶由酶蛋白和輔酶I組成，兩者單獨(dú)存在時(shí)，無(wú)催化活性，必須共同存在組成全酶才起作用。乳酸脫氫酶在各種組織細(xì)胞廣泛存在，它可逆地催化乳酸脫氫形成丙酮酸或丙酮酸接受氫生成乳酸。在代謝過(guò)程中，有重要意義，反應(yīng)中由輔酶I（NAD＋）起傳遞氫作用。乳酸脫氫酶屬于不需氧脫氫酶，不能直接將氫交給氧，反應(yīng)中生成的還原型輔酶I，可與其它酶蛋白結(jié)合，將氫傳給其它的遞氫體，通過(guò)呼吸鏈被徹底氧化。第2頁(yè)，講稿共7頁(yè)，2023年5月2日，星期三試驗(yàn)原理：

本實(shí)驗(yàn)以乳酸為底物。用新鮮的動(dòng)物肌肉的粗制提取液，分別制成酶蛋白部分（用白陶土吸附除去輔酶I）和輔酶部分（加熱破壞酶蛋白），觀察兩者單獨(dú)作用及共同作用。實(shí)驗(yàn)中為了便于觀察，用甲烯蘭（即美蘭）做為受氫體。已知甲烯蘭能從還原型黃酶接受氫而由藍(lán)色變成無(wú)色（甲烯白）。所以本實(shí)驗(yàn)中根據(jù)溶液蘭色的消退判斷乳酸脫氫反應(yīng)的發(fā)生。第3頁(yè)，講稿共7頁(yè)，2023年5月2日，星期三操作步驟：1、分別制備酶蛋白提取液及輔酸I提取液（1）除去輔酶I的酶蛋白提取液：取新鮮動(dòng)物肌肉組織3g，剪碎放研缽中加玻璃砂約0.5g，白陶土0.5g，加PH7.40.1M磷酸緩沖液8ml，研細(xì)成粥狀。移入離心管中，以2000rpm離心5分鐘，傾于另一試管中備用。（2）輔酶I提取液：取蒸餾水10ml于中試管中，加熱煮沸。取新鮮的肌肉組織3g，剪碎，放入沸水中，繼續(xù)煮沸10分鐘，為防止水分過(guò)多蒸發(fā)可加蓋。稍冷后傾入乳缽中研細(xì)，移入離心管中2500rpm離心5分鐘，取上清液備用。第4頁(yè)，講稿共7頁(yè)，2023年5月2日，星期三2、取試管4只，標(biāo)清管號(hào)，按下表加樣：12345%乳酸鈉提取液（ml）酶蛋白提取液（ml）輔酶Ⅰ提取液（ml）蒸餾水（ml）0.5%KCN液（滴）0.04%甲烯蘭液（滴）0.50.5/0.510100.5/0.50.510100.50.50.5/1010/0.50.50.51010第5頁(yè)，講稿共7頁(yè)，2023年5月2日，星期三3、充分混勻，向各管徐徐加入液體石臘5滴（避免與空氣接觸），靜置試管架上或放37C水浴15’～30’，隨時(shí)觀察并記錄各管退色情況，分析結(jié)果

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