甾體激素類(lèi)藥物的分析藥物分析

基本要求1．掌握甾體結(jié)構(gòu)類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系。2．掌握甾體類(lèi)藥物的鑒別原理與方法。3．掌握甾體類(lèi)藥物的含量原理與方法。4．熟悉甾體類(lèi)藥物雜質(zhì)檢查的方法。返回本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲ABCD12345678910111213141516171819概述本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分分類(lèi)：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分腎上腺皮質(zhì)激素氫化可的松本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分腎上腺皮質(zhì)激素醋酸地塞米松本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分腎上腺皮質(zhì)激素曲安息龍本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分腎上腺皮質(zhì)激素地塞米松磷酸鈉本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分雄性激素甲睪酮本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分雄性激素丙酸睪酮本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分蛋白同化激素苯丙酸諾龍本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分孕激素黃體酮本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分孕激素醋酸甲地孕酮本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分雌性激素炔雌醇本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分雌性激素雌二醇本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分炔諾酮此外本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分炔諾孕酮返回本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

1.腎上腺皮質(zhì)激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑反應(yīng)

C17

–

α–醇酮基還原性本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑反應(yīng)

C17–

β–羥基可成酯本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分3.孕激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑反應(yīng)C17–甲酮基與亞硝基鐵氰化納反應(yīng)本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分4.雌性激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)A環(huán)為3–OH苯環(huán)UV、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)C17–乙炔基與AgNO3反應(yīng)C17–羥基可成酯返回本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分二、鑒別試驗(yàn)（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)甾體激素類(lèi)藥物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分與硫酸顯色反應(yīng)

顯色熒光加水稀釋潑尼松龍深紅

絮狀↓灰潑尼松橙

黃→藍(lán)綠炔雌醚橙紅

黃綠

↓紅色

炔雌醇橙紅

黃綠

絮狀↓玫紅醋酸可的松黃或微褪色并澄

帶橙清本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分(二)官能團(tuán)的反應(yīng)腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色四氮唑鹽OHˉ1、C17

–

α–醇酮基還原性呈色反應(yīng)此外還有斐林試液、多倫試液本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分甾酮類(lèi)激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類(lèi)藥物呈色亞硝基鐵氰化納間二硝基酚芳香醛3.甲酮基本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分黃體酮藍(lán)紫色亞硝基鐵氰化納其他甾體淡橙色不顯色本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分有機(jī)氟Fˉ有機(jī)破壞有機(jī)氯Clˉ4.有機(jī)鹵素茜素氟藍(lán)

硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀AgCl↓呈色

本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分雌激素類(lèi)藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羥基本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6.乙炔基的沉淀反應(yīng)↓本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分

(三)制備衍生物測(cè)定m.p.鹽酸氨基脲苯丙酸諾龍△縮氨基脲衍生物1.縮氨基脲的生成m.p.約180℃（分解）2.酯的水解丙酸睪酮堿性條件睪酮m.p.為150℃~156℃本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分△４-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結(jié)構(gòu)（四）UV法1.結(jié)構(gòu)依據(jù)240nm左右280nm左右本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分2.示例曲安西龍丙酸倍氯米松溶劑甲醇乙醇20μg/ml濃度20μg/ml結(jié)果判斷在238nm處有最大吸收在239nm處有最大吸收，A為0.57～0.60，在239nm與263nm處的吸收度比值為2.25～2.45本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇（五）IR法本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動(dòng)本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分黃體酮結(jié)構(gòu)特征：△４-3-酮、C17-酮基本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H雙鍵本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（七）TLC法

主要用于甾體激素類(lèi)藥物制劑的鑒別

方法：對(duì)照品法要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（八）HPLC法

主要用于甾體激素類(lèi)藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）

方法：對(duì)照品法要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對(duì)照品峰的tR一致。返回本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分三、特殊雜質(zhì)檢查（一）其他甾體的檢查

檢查意義：其他甾體與甾體激素藥物結(jié)構(gòu)相似，也有一定的藥理作用而又互不相同.

本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分檢查方法（具有一定分離能力）TLC法（高低濃度對(duì)比法）HPLC法（類(lèi)似高低濃度對(duì)比法）本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（1）TLC法（高低濃度對(duì)比法）

判定方法：

規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目

規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1）濃度：3.0mg/ml對(duì)照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60μg/ml層析：供試液點(diǎn)樣、展開(kāi)、斑點(diǎn)檢出。

對(duì)照液判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)，其顏色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（2）HPLC法（主成分自身對(duì)照法）判定方法：

規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分硒的檢查（二）來(lái)源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫有毒方法藥物氧瓶燃燒二氨基萘比色法測(cè)定本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（三）有機(jī)溶劑殘留量的檢查（靈敏度法）甲醇不得出峰檢測(cè)限=3.1ng丙酮≤5.0%內(nèi)標(biāo)法+校正因子以地塞米松磷酸鈉為例GC法本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分地塞米松磷酸鈉檢查甲醇和丙酮精密稱取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加水稀釋至刻度，作為供試液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)與丙酮100μl(≈79mg)置100ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液20ml，加水至刻度，作為對(duì)照液。照氣相色譜法測(cè)定，含丙酮不得過(guò)5.0%，并不得出現(xiàn)甲醇峰。本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（二）游離磷酸鹽的檢查地塞米松磷酸鈉對(duì)照品比色法供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸鉬藍(lán)：740nm對(duì)照液：同上本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（對(duì)照液0.0035%KH2PO4）返回本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多內(nèi)標(biāo)法）（甾體激素類(lèi)藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對(duì)利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計(jì)的比色法有干擾）四、含量測(cè)定測(cè)定對(duì)象：甾體激素類(lèi)藥物的原料和制劑。本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分示例：黃體酮的含量測(cè)定

色譜條件：固定相ODS，流動(dòng)相甲醇-水（65:35），檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，內(nèi)標(biāo)物己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：n>1000，R符合規(guī)定。

本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分測(cè)定樣品：黃體酮原料、注射液。

定量方法：內(nèi)標(biāo)法本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（二）UV法△４-3-酮240nm（±）腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥苯環(huán)280nm（±）雌激素本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分示例：醋酸地塞米松片的含量測(cè)定（1）配制供試液

（2）測(cè)定：240nm

（3）計(jì)算

本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基（1）原理異煙腙（黃）酮基異煙肼-3CHCl（縮合）1.異煙肼比色法（三）比色法本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分異煙腙（黃色）本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（2）方法對(duì)照品法55℃異煙肼?lián)]去乙醇對(duì)照液供試液A暗45′本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第56頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分（3）討論反應(yīng)速度（反應(yīng)專屬性）A.C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反應(yīng)反應(yīng)專屬性C3－酮基本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第57頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分B.溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇無(wú)水甲醇無(wú)水乙醇本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第58頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分C.水分、溫度、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí)→O2與光線無(wú)影響t℃↑→ν↑本文檔共67頁(yè)；當(dāng)前第59頁(yè)；編輯于星期一\17點(diǎn)50分D.酸的種類(lèi)和濃度及異煙肼的濃度酸:異煙肼