畢業(yè)設(shè)計(jì)論文-瘦肉精的危害及檢測方法

黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）報(bào)告題目：瘦肉精的危害及檢測方法學(xué) 生：指導(dǎo)教師：專 業(yè)： 生物技術(shù)及應(yīng)用班 級(jí)： 生物技術(shù)及應(yīng)用 1101班2013年12 月27日黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）摘 要瘦肉精是一類藥物，而不是某一種特定的藥物，任何能夠促進(jìn)瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。瘦肉精雖然能提高豬的瘦肉率帶來更多經(jīng)濟(jì)價(jià)值，但它是有很危險(xiǎn)的副作用，人體食用含有瘦肉精的肉會(huì)對(duì)身體產(chǎn)生危害，常見的有惡心、頭暈、四肢無力、手顫等中毒癥狀，特別對(duì)心臟病、高血壓患者危害更大，長期食用則可能導(dǎo)致染色體基變，誘發(fā)惡性腫。因此在生豬的收購、加工、市場銷售的過程中要加大檢測力度，來保證人民的身體健康。目前，除傳統(tǒng)檢測項(xiàng)目在生豬加工過程中使用外，也加入了瘦肉精的檢測，常見的檢測方法有氣相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜檢測法、酶聯(lián)免疫吸附法、液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法、膠體金檢測卡法等多種途徑。本文主要介紹了瘦肉精的特點(diǎn)、類型、發(fā)病癥狀、治療方法及防范措施、檢測方法等。詳細(xì)綜述了瘦肉精的檢測方法，并結(jié)合自己在眾品集團(tuán)實(shí)習(xí)方面的一些經(jīng)歷，介紹了目前較為流行的瘦肉精檢測方法及各自的優(yōu)勢，最后總結(jié)了瘦肉精檢測方法的發(fā)展前景。關(guān)鍵詞：瘦肉精 鹽酸克倫特羅 人體危害 液相色譜黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）目錄1.引言41.1瘦肉精的概念41.2瘦肉精的類型41.3瘦肉精事件21.4瘦肉精中毒癥狀51.5瘦肉精中毒治療辦法61.6瘦肉精的防治措施72.傳統(tǒng)生豬檢測83.瘦肉精的檢測方法83.1氣象色譜-質(zhì)譜檢測法83.2高效液相色譜檢測法93.3酶聯(lián)免疫吸附法93.4液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)93.5膠體金檢測卡法104.實(shí)習(xí)經(jīng)歷104.1樣品處理104.2使用方法114.3注意事項(xiàng)115.快速檢測的優(yōu)點(diǎn)126.瘦肉精檢測發(fā)展趨勢12致謝15文獻(xiàn)16I黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）瘦肉精的危害及檢測方法引言1.1瘦肉精的概念瘦肉精是一類藥物，而不是某一種特定的藥物，任何能夠促進(jìn)瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。使用瘦肉精可以促進(jìn)動(dòng)物體蛋白質(zhì)沉積、促進(jìn)脂肪分解抑制脂肪沉積，能顯著提高胴體的瘦肉率、增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率，因此曾被用作牛、羊、禽、豬等畜禽的促生長劑、飼料添加劑。瘦肉精在人體內(nèi)也會(huì)產(chǎn)生很大危害，可使人表現(xiàn)為面色潮紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、四肢麻木等一系列不良反應(yīng)。一次性攝入克倫特羅的量過大，還會(huì)迅速導(dǎo)致心率過速，對(duì)原有心律失常的病人更易突發(fā)心臟病，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)心肌梗死。我國政府也將瘦肉精列為動(dòng)物飼養(yǎng)中禁止添加藥品以及肉類產(chǎn)品必檢項(xiàng)目。1.2瘦肉精的類型瘦肉精的種類比較多，任何能夠促進(jìn)瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”,其中最常用的為鹽酸克倫特羅 (ClenbuterolHydrochloride) ，常見的有：鹽酸克倫特羅(ClenbuterolHydrochloride)萊克多巴胺(Ractopamine)沙丁胺醇(Salbutamol)硫酸沙丁胺醇(SalbutamolSulfate)鹽酸多巴胺(DopamineHydrochloride)西馬特羅(Cimaterol)I黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）硫酸特布他林(TerbutalineSulfate)苯乙醇胺A(PhenylethanolamineA)班布特羅(Bambuterol)鹽酸齊帕特羅(ZilpaterolHydrochloride)鹽酸氯丙那林(ClorprenalineHydrochloride)馬布特羅(Mabuterol)西布特羅(Cimbuterol)溴布特羅(Brombuterol)酒石酸阿福特羅(ArformoterolTartrate)富馬酸福莫特羅(FormoterolFumatrate)1.3瘦肉精事件一、雙匯瘦肉精事件18道檢驗(yàn)不檢瘦肉精消費(fèi)者熟悉的雙匯集團(tuán)旗下公司被央視3·15特別節(jié)目曝光。央視報(bào)道，雙匯宣稱“十八道檢驗(yàn)、十八個(gè)放心”，但豬肉不檢測“瘦肉精”。添加“瘦肉精”養(yǎng)殖的有毒生豬，順利賣到雙匯集團(tuán)旗下公司。據(jù)央視《每周質(zhì)量報(bào)告》的3·15特別節(jié)目《“健美豬”真相》報(bào)道，養(yǎng)豬場采用違禁動(dòng)物藥品“瘦肉精”飼養(yǎng)，有毒豬肉流向了雙匯。濟(jì)源雙匯食品有限公司是河南雙匯集團(tuán)下屬的分公司，以生豬屠宰加工為主，有自己的連鎖店和加盟店，“十八道檢驗(yàn)、十八個(gè)放心”的字樣隨處可見，但卻不包括“瘦肉精”檢測。濟(jì)源雙匯食品有限公司采購部業(yè)務(wù)主管承認(rèn)，他們廠的確在收購添加“瘦肉精”養(yǎng)殖的所謂“加精”豬，而且收購價(jià)格比普通豬還要貴一些。這種豬停喂“瘦肉精”一周后，送到他們廠里賣的時(shí)候就不容易被查出來。2黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）二、雨潤事件“雨潤”午餐肉：2009年安徽省質(zhì)監(jiān)局曾經(jīng)通報(bào)，阜陽“雨潤”、合肥“臘味思”各有一批次午餐肉和臘肉檢出含有禁用物質(zhì)“瘦肉精”。 《每日經(jīng)濟(jì)新聞》從安徽省質(zhì)監(jiān)局獲悉，雨潤集團(tuán)已將問題午餐肉全部召回并銷毀， 而合肥“臘味思”的該批次產(chǎn)品也未流向市場。根據(jù)安徽省質(zhì)監(jiān)局通報(bào)，合肥市臘味思食品有限公司2009年1月19日生產(chǎn)的臘肉、阜陽雨潤肉類加工有限公司2009年3月16日生產(chǎn)的午餐肉經(jīng)抽查發(fā)現(xiàn)含有“克倫特羅”（瘦肉精）。據(jù)安徽媒體報(bào)道，當(dāng)?shù)毓ど虉?zhí)法人員于21日上午對(duì)上述2個(gè)批次產(chǎn)品展開市場清查，但并沒有發(fā)現(xiàn)合肥市臘味思公司的產(chǎn)品。而標(biāo)注為阜陽生產(chǎn)的“雨潤”肉制品很少。執(zhí)法人員只在一家中小超市內(nèi)發(fā)現(xiàn)一款阜陽生產(chǎn)的“雨潤”火腿腸，但沒有看到午餐肉制品?！霸撆萎a(chǎn)品的總量只有100盒左右，今天已全部召回并銷毀。”南京雨潤集團(tuán)相關(guān)負(fù)責(zé)人昨天向《每日經(jīng)濟(jì)新聞》表示，午餐肉是雨潤為數(shù)不多的高溫產(chǎn)品之一，只在安徽附近銷售，由阜陽雨潤肉類加工有限公司加工生產(chǎn)，產(chǎn)量小，一年銷售額大約只有10萬元左右?！睹咳战?jīng)濟(jì)新聞》記者從滬上零售市場看到，上海所售的“雨潤”火腿腸等產(chǎn)品幾乎都產(chǎn)自江蘇南京，并沒有阜陽產(chǎn)的“雨潤”午餐肉。 多家超市也表示從來沒有采購過合肥“臘味思”這一產(chǎn)品。 不過，為了安全起見，部分超市已開始對(duì)“雨潤”品牌旗下的其他產(chǎn)品進(jìn)行清查， 并要求供應(yīng)商提供各批次產(chǎn)品的質(zhì)檢合格報(bào)。三、山東瘦肉精羊河北198只瘦肉精羊已全部撲殺中新社石家莊4月11日電（記者牛琳)河北省畜牧局11日透露，由山東流入河北的198只“瘦肉精羊”已全部撲殺，并進(jìn)行無害化處理。2011年4月1日，由山東省慶云縣運(yùn)往河北省青縣宰殺點(diǎn)待宰殺的 198只綿羊，3黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）被河北省畜牧局現(xiàn)場抽檢出“瘦肉精”成分。 2日，該省獸藥監(jiān)察所對(duì)查獲的疑似“瘦肉精羊”進(jìn)行二次檢驗(yàn)，抽取 48份尿樣，經(jīng)檢測全部為“瘦肉精”陽性，這批待宰羊隨后由當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)部門異地封存圈養(yǎng)。據(jù)介紹，在河北省畜牧獸醫(yī)局和滄州市農(nóng)牧局工作人員的監(jiān)督下，青縣組織有關(guān)部門對(duì)該批肉羊全部撲殺，并進(jìn)行無害化處理。2011年3月31日晚，河北省食品整治辦接到舉報(bào)稱，山東省一批“瘦肉精羊”運(yùn)至滄州青縣戴莊子村尹中路屠宰點(diǎn)，擬于當(dāng)日晚間或次日晨屠宰。1日凌晨，河北省食品整治辦工作人員與當(dāng)?shù)赜嘘P(guān)部門會(huì)合，共同對(duì)尹中路屠宰點(diǎn)進(jìn)行突擊檢查。經(jīng)查，現(xiàn)場共有待宰羊198只，系畜主山東慶云縣渤海路西石官堂村劉玉國于3月31日下午從山東運(yùn)來，準(zhǔn)備在此宰殺。四、河北瘦肉精羊河北省昌黎縣人民法院29日宣判一起“瘦肉精”案件，昌黎縣龍家店鎮(zhèn)西刁坨村38歲的農(nóng)婦韓立榮違反中國食品衛(wèi)生管理法規(guī)，明知“瘦肉精”是有毒、有害的非食品原料且國家明令禁止給家畜喂食，仍故意給其飼養(yǎng)的育肥羊投喂，結(jié)果被追究刑事責(zé)任。法院以生產(chǎn)、銷售有毒、有害食品罪判處韓立榮有期徒刑5年，并處罰金人民幣7萬元。昌黎縣人民法院經(jīng)審理查明：被告人韓立榮于2009年開始飼養(yǎng)肉用育肥羊。因給育肥羊喂食含有“鹽酸克侖特羅”（俗稱“瘦肉精”）的飼料，其丈夫于2009年受到昌黎縣畜牧發(fā)展局處罰。昌黎縣畜牧發(fā)展局在處罰的同時(shí)告知被告人韓立榮，含有“鹽酸克侖特羅”的藥品不能喂羊。2011年，韓立榮飼養(yǎng)了220只育肥羊，被告人韓立榮從一商販?zhǔn)种匈徺I了兩千多片含有“鹽酸克侖特羅”成分的藥片，并在明知此藥片含有“鹽酸克侖特羅”成分且畜牧部門不準(zhǔn)給飼養(yǎng)的家畜喂食的情況下，仍繼續(xù)給其飼養(yǎng)的育肥羊喂食。2011年3月22日，被告人韓立榮被昌黎縣畜牧發(fā)展局執(zhí)法人員查獲，有關(guān)人員當(dāng)日當(dāng)場對(duì)其中六頭育肥羊的尿樣進(jìn)行抽樣， 結(jié)果呈陽性。其中兩份尿樣送交秦皇島市出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心檢驗(yàn)， 確認(rèn)被告人韓立榮飼養(yǎng)的育肥羊尿液含“鹽酸克侖特羅”成分。 被告人韓立榮當(dāng)庭供述,220只羊一個(gè)月后售出，得款7萬元。4黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）昌黎縣人民法院認(rèn)為，公訴機(jī)關(guān)指控被告人韓立榮犯罪的事實(shí)清楚，提供的證據(jù)充分，故對(duì)其指控的罪名成立。被告人韓立榮違反中國食品衛(wèi)生管理法規(guī)，明知“鹽酸克侖特羅”藥片是有毒、 有害的非食品原料，且國家明令禁止給家畜喂食的前提下，仍故意給其飼養(yǎng)的育肥羊投喂該藥品， 其行為已構(gòu)成生產(chǎn)、銷售有毒、有害食品罪。依據(jù)《中華人民共和國刑法》和《最高人民法院、最高人民檢察院關(guān)于辦理非法生產(chǎn)、銷售、使用禁止在飲料和動(dòng)物飲用水中使用的藥品等刑事案件具體應(yīng)用法律若干問題的解釋》的相關(guān)規(guī)定，昌黎縣人民法院作出上述一審判決。1.4瘦肉精中毒癥狀在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，由于經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使以及檢測方法、手段還不完善，一些非法生產(chǎn)者將其作為一種生長促進(jìn)劑添加到動(dòng)物飼料中。 在豬等肉用牲畜中投喂克倫特羅，即使是屠宰前七天停藥，肝、肺中仍可檢出較高濃度的克倫特羅。由于克倫特羅分解溫度較高，一般烹調(diào)的方法（ 100℃）無法破壞其生物活性，即使是油炸（260℃）也只能使其活性損失一部分。人在食用超過鹽酸克倫特羅殘留限量的肉后會(huì)出現(xiàn)急性中毒癥狀，表現(xiàn)為面色潮紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、四肢麻木等一系列不良反應(yīng)。一次性攝入克倫特羅的量過大，還會(huì)迅速導(dǎo)致心率過速，對(duì)原有心律失常的病人更易突發(fā)心臟病，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)心肌梗死。同時(shí)，由于激活了Na+-K+-ATP酶，促使鉀離子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)引起血鉀降低，從而導(dǎo)致心律失常?？藗愄亓_通過增加肌糖原的分解，引起血液中乳酸、丙酮酸的升高，并可出現(xiàn)酮體，容易引起糖尿病人代謝紊亂，導(dǎo)致酮癥酸中毒或乳酸中毒。通過對(duì)大鼠毒理試驗(yàn)結(jié)果的研究，使用2000μg/kg·d的高劑量克倫特羅，可極大地降低體內(nèi)牛磺酸的貯備，使骨骼肌收縮增加，并且破壞快縮肌纖維和慢縮肌纖維的融合現(xiàn)象，因此可引發(fā)肌肉震顫，四肢和面部肌肉痙攣，出現(xiàn)行走不穩(wěn)、無法握物等癥狀。盡管反復(fù)使用會(huì)產(chǎn)生耐受性，對(duì)支氣管擴(kuò)張作用減弱及持續(xù)時(shí)間縮短。但是對(duì)于原有心律失常、高血壓、青光眼、糖尿病、甲狀腺功[能亢進(jìn)、前列腺肥大等疾病的患者，上述癥狀更易發(fā)生，甚至危及生命。雖然鹽酸克倫特羅殘留的毒作用為輕度的， 但長期食用含有瘦肉精的豬肉和5黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）內(nèi)臟會(huì)引起人體心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。臨床表現(xiàn)為：1．急性中毒有心悸，面頸、四肢肌肉顫動(dòng)，有手抖甚至不能站立，頭暈，乏力，原有心律失常的患者更容易發(fā)生反應(yīng)，心動(dòng)過速，室性早搏，心電圖示S-T段壓低與T波倒置。2．原有交感神經(jīng)功能亢進(jìn)的患者，如有高血壓、冠心病、甲狀腺功能亢進(jìn)者上述癥狀更易發(fā)生。3．與糖皮質(zhì)激素合用可引起低血鉀，從而導(dǎo)致心律失常。4．反復(fù)使用會(huì)產(chǎn)生耐受性，對(duì)支氣管擴(kuò)張作用減弱及持續(xù)時(shí)間縮短。雖然克倫特羅殘留的毒作用為輕度的， 但美國FDA研究表明，應(yīng)用擬交感神經(jīng)藥者或?qū)η八庍^敏者，對(duì)克倫特羅的反應(yīng)要比正常健康個(gè)體更為嚴(yán)重。FDA擔(dān)心非法應(yīng)用克倫特羅可導(dǎo)致此藥的生產(chǎn)工人患病或死亡。 FDA指出，職業(yè)性吸入克倫 特羅對(duì)心血管的影響，可能要比經(jīng)食品攝食的危害性更大，但有待于進(jìn)一步的證實(shí)。1.5瘦肉精中毒治療辦法在食用含有瘦肉精的肉類及肉類產(chǎn)品后感到不適時(shí)應(yīng)當(dāng)立即到醫(yī)院就診，并保留食物到質(zhì)檢中心檢驗(yàn)是否瘦肉精中毒。2．立即洗胃、輸液，促使毒物排出。2．在心電圖監(jiān)測及電解質(zhì)測定下，使用保護(hù)心臟藥物如 6-二磷酸果糖(FDP)及β1-受體阻滯劑倍他樂克。喝水稀釋其含量，停止使用該種肉類。6黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）1.6瘦肉精的防治措施加強(qiáng)輿論宣傳加強(qiáng)輿論宣傳進(jìn)一步加強(qiáng)輿論宣傳，通過各種媒體宣傳“瘦肉精”對(duì)人類的危害，認(rèn)清“瘦肉精”的本質(zhì)。加強(qiáng)生產(chǎn)者的職業(yè)道德教育，同時(shí)提高消費(fèi)者識(shí)別、抵制能力。大力宣傳畜產(chǎn)品安全生產(chǎn)的意義和要求，強(qiáng)化畜產(chǎn)品衛(wèi)生安全意識(shí)，增強(qiáng)生產(chǎn)者的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)意識(shí)、食品質(zhì)量安全意識(shí)：及時(shí)通報(bào)查處“瘦肉精”案例，以震懾不法分子，對(duì)于打擊不力的連續(xù)發(fā)生“瘦肉精”中毒的地區(qū)予以曝光，停運(yùn)、停銷違規(guī)地區(qū)的生豬，確保畜產(chǎn)品安全。加大經(jīng)費(fèi)投入以擴(kuò)大檢測范圍就目前情況來看，“瘦肉精”監(jiān)測大多集中在大城市，而在偏遠(yuǎn)的地區(qū)，設(shè)施落后，經(jīng)費(fèi)不足無法開展“瘦肉精”檢測工作，導(dǎo)致出現(xiàn)“瘦肉精”檢測空白區(qū)。因此國家應(yīng)加大必要的經(jīng)費(fèi)投入，保證更好地開展“瘦肉精”檢測工作。加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)豬企業(yè)的日常監(jiān)督和生豬出欄前的“瘦肉精”殘留檢測，在當(dāng)前生豬尿樣檢測的基礎(chǔ)上擴(kuò)大監(jiān)測覆蓋面，增加抽檢頻率，切實(shí)加強(qiáng)對(duì)生豬源頭的檢查監(jiān)督。消費(fèi)者購買豬肉時(shí)要揀帶些肥膘(1-2cm)的肉，顏色不要太鮮紅，豬內(nèi)臟因瘦肉精殘留量多不宜食用。各地政府及動(dòng)物檢疫局要始終保持高度警惕，防止死灰復(fù)燃，防止流散在社會(huì)個(gè)人手中的“瘦肉精”產(chǎn)生新的危害。 公安部將發(fā)動(dòng)全國公安機(jī)關(guān)特別是基層派出所會(huì)同有關(guān)部門立足轄區(qū)，主動(dòng)摸排，信息共享，關(guān)口前移，力爭對(duì)食品安全等違法犯罪線索早發(fā)現(xiàn)、早檢測、早查處，減少危害。同時(shí)也希望廣大群眾積極舉報(bào)，一旦發(fā)現(xiàn)此類犯罪活動(dòng)，公安機(jī)關(guān)將依法嚴(yán)肅查處、嚴(yán)懲不貸。國務(wù)院副總理、國務(wù)院食品安全委員會(huì)主任李克強(qiáng)表示，要以堅(jiān)決的態(tài)度、過硬的舉措、更大的力度，持續(xù)深入整治食品非法添加行為， 切實(shí)解決影響食品安全的突出問題，要以《食品安全法》為準(zhǔn)繩，重典治亂，加大懲處力度，切實(shí)改變違法成本低的問題，讓不法分子付出高昂代價(jià)，真正起到震懾作用。中國衛(wèi)生部下發(fā)通知，要求衛(wèi)生系統(tǒng)做好嚴(yán)厲打擊食品非法添加行為，切實(shí)7黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）加強(qiáng)食品添加劑監(jiān)管，高度重視對(duì)非法添加行為造成食品安全事故的責(zé)任調(diào)查。傳統(tǒng)生豬檢測在瘦肉精事件發(fā)生以前，肉制品企業(yè)對(duì)所收購的生豬進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)只進(jìn)行豬的疫病、體重、以及形態(tài)進(jìn)行檢查?？谔阋?、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、炭疽、豬丹毒、豬肺疫、豬副傷寒、豬Ⅱ型鏈球菌病、豬支原體肺炎、副豬嗜血桿菌病、絲蟲病、豬囊尾蚴病、旋毛蟲病。入場（廠、點(diǎn)）時(shí)，只要具備有效的《動(dòng)物檢疫合格證明》，無規(guī)定的傳染病和寄生蟲病，需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室疫病檢測的，檢測結(jié)果合格，只要履行規(guī)程規(guī)定的檢疫程序， 檢疫結(jié)果符合規(guī)定的都可以進(jìn)入屠宰生產(chǎn)。瘦肉精的檢測方法瘦肉精的檢測方法很多，因此，大家一直都在關(guān)注瘦肉精的檢測方法。 但是由于瘦肉精的種類增長速度快，現(xiàn)在的一些常檢測方法不能有效的檢測出來。所以，檢測方法的完善在這方面就起到了至關(guān)重要的作用。 最早的檢測方法比較復(fù)雜，靈敏性底不能有效的達(dá)到檢測目的。以下是幾種比較常見的檢測方法：3.1氣象色譜-質(zhì)譜檢測法氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)法優(yōu)點(diǎn)是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機(jī)合起來，能在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對(duì)某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。 FenteC.A 等用GC-MS法檢測牛毛中CLB的殘留，最低檢測限為5ng/g；PteerBatioens應(yīng)用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS-MS)對(duì)牛、羊、豬組織中的CLB含量進(jìn)行檢測，最低檢測限為2μg/g；劉琪等用GC-MS法(EI離子源）檢測豬尿中的CLB,檢測限為0.5μg/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基嗎啉衍生物檢測尿提取物中的CLB,衍生物用電脈沖方式或化學(xué)離子化方式掃描，會(huì)產(chǎn)生更高的靈敏度。另外,GC-MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低。因此，中國將 GC-MS法定8黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）為檢測CLB的確證性方法(NY/T468~2001)。3.2高效液相色譜檢測法HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性的 β-激動(dòng)劑及其代謝產(chǎn)物，而且 ,HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)和質(zhì)譜 (MS)等系統(tǒng)聯(lián)用，容易實(shí)現(xiàn)分析過程的自動(dòng)化。黃士新等 (1995)應(yīng)用紫外檢測器，在 λ=243nm,色譜柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn,流速：1mL/min,柱溫：室溫30℃的條件下檢測豬肝臟和豬肉中的 CLB殘留，最低檢測限可達(dá)2μg/g。國外有人應(yīng)用 HPLC(二極管陣列檢測器）測定動(dòng)物性食品中 CLB殘留，測得最低檢測限為 1.26ng/g,回收率達(dá)98.9%。中國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1～15μg/g,其優(yōu)點(diǎn)是專屬性好、選擇性強(qiáng)、檢測精確度較高，而且假陽性率低；缺點(diǎn)是樣品處理時(shí)間長，檢測過程煩瑣、難于操作，需貴重儀器，在實(shí)際應(yīng)用中受到一定的限制。3.3酶聯(lián)免疫吸附法利用免疫學(xué)抗原抗體特異性結(jié)合和酶的高效催化作用， 通過化學(xué)方法將植物辣根過氧化物酶(HRP)與克倫特羅(CL)結(jié)合，形成酶偶聯(lián)克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體（羊抗兔IgG抗體）與特異性的抗克倫特羅抗體結(jié)合， 然后加入待測克倫特羅和酶偶聯(lián)克倫特羅， 它們競爭性與克倫特羅抗體結(jié)合， 洗滌后加底物，根據(jù)有色物的變化計(jì)量待測克倫特羅量。 若待測克倫特羅多，則被結(jié)合的酶偶聯(lián)克倫特羅少，有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克倫特羅含量，比色的最佳波長為450nm,參比波長應(yīng)大于600nm。3.4液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)參見SN/T1924—2007進(jìn)出口動(dòng)物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于動(dòng)物源性食品肌肉和內(nèi)臟中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測。試樣中的藥物殘留采用pH5.2的乙酸銨緩沖液提取，同時(shí)加入 β-鹽酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶進(jìn)行酶9黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）解后，提取液經(jīng)C18和SCX雙SPE柱凈化，液相色譜—質(zhì)譜進(jìn)行測定內(nèi)標(biāo)法定量。3.5膠體金檢測卡法此法速度快，適合于基層單位作初步篩選檢測。用BSA偶聯(lián)的克倫特羅分子于膠體會(huì)顆粒結(jié)合后，包被在醋酸纖維素膜上；在硝酸纖維素膜上將克倫特羅抗體和BSA抗體分別包被在檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)。加入樣品后，樣本中的克倫特羅分子與克倫特羅一BSA一膠體金偶聯(lián)物一起層析泳動(dòng)到檢測區(qū)競爭與克倫特羅抗體結(jié)合，剩余的克倫特羅一BSA～膠體金繼續(xù)泳動(dòng)到質(zhì)控區(qū)與抗體結(jié)合。當(dāng)樣品中的克倫特羅濃度超過～定量后，膠體金偶聯(lián)物就不能與克倫特羅抗體結(jié)合，只有質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)紫紅色線條，檢測區(qū)不出現(xiàn)線條；相反則質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)都出現(xiàn)線條。實(shí)習(xí)經(jīng)歷下面我將詳細(xì)介紹在我實(shí)習(xí)期間所進(jìn)行的測試方法：我所在的眾品公司所進(jìn)行的瘦肉精檢測方法主要以快速檢測卡為主，如果檢測卡呈陽性再以儀器檢測進(jìn)行確認(rèn)，檢測尿液、組織和飼料樣本中萊克多巴胺的殘留量。宰前按批次進(jìn)行抽查，當(dāng)原料豬數(shù)量低于十頭時(shí)逐頭進(jìn)行檢測，當(dāng)數(shù)量大于十頭時(shí)抽檢其百分之十進(jìn)行檢測，宰后檢測采用隨機(jī)抽查檢測方法和宰前一致，其中瘦肉精的檢驗(yàn)采用快速試劑卡檢測，所用快速檢測卡為北京庫爾生物技術(shù)有限公司所產(chǎn)的萊克多巴胺、沙丁胺醇、克倫特羅檢測試劑卡。4.1樣品處理1、用干燥、潔凈的離心管或適當(dāng)容器采集 50ml左右尿液。如果不立即檢測，尿樣在2-8℃冷藏可保存24小時(shí)，要注意避免腐敗造成失效或污染。出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)應(yīng)按法定程序分瓶封裝樣品用于確證法檢測。2、將瘦肉或內(nèi)臟樣本剪碎，裝入 1.5ml離心管中，蓋緊管蓋。放入沸水浴中加熱5分鐘以上使有液汁浸出，取出離心管放至室溫。3、如果不立即檢測，尿樣在 2-8℃冷藏可保存24小時(shí)，要注意避免腐敗造成失效或污染。10黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）4.2使用方法1、測試前將未開封的檢測卡恢復(fù)至室溫。2、從鋁箔袋中取出檢測卡（在一小時(shí)內(nèi)使用）。3、將檢測卡平放于臺(tái)面，用塑料吸管垂直滴加 1滴無氣泡的樣本滲出液 (約20-30ul)于加樣孔，30秒后再加入展開液2-3滴(約60-80ul)。4、反應(yīng)10min后，展開區(qū)出現(xiàn)紫色條帶為陰性結(jié)果，無條帶者為陽性結(jié)果。5、結(jié)果解釋陽性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶。在測試區(qū)（ T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表明：尿液中的鹽酸克倫特羅濃度在閾值（ 3μg/ml）以上。陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（ T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)。陰性結(jié)果表明：尿液中的鹽酸克倫特羅濃度在閾值（ 3μg/ml）以下。無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，提示測試失敗或試紙已失效。注意：測試區(qū)（T）內(nèi)的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判定為陰性結(jié)果。4.3注意事項(xiàng)1、檢測卡在室溫20-25℃下一次性使用。2、脂肪會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果，取樣時(shí)棄去肉眼可見的脂肪部分。3、檢測時(shí)避免陽光直射。4、出現(xiàn)陽性結(jié)果，應(yīng)用本卡復(fù)查并作陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。必要時(shí)送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步定量。5、附帶的瘦肉精陽性對(duì)照液為 5μg/ml。6、儲(chǔ)存及有效期：2-10℃冷藏儲(chǔ)存，有效期為12個(gè)月。11黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）快速檢測的優(yōu)點(diǎn)與傳統(tǒng)的檢測相比，傳統(tǒng)的瘦肉精檢測，大都在實(shí)驗(yàn)室中，需要在現(xiàn)場提取檢測樣品然后在實(shí)驗(yàn)室里面利用儀器進(jìn)行化驗(yàn)分析用，使用不方便且成本極高，工作效率低下，還要專業(yè)儀器操作人員。目前檢測瘦肉精的方法有以下幾種，膠體金快檢卡是最快速簡單的一種方法，適用于多種流通領(lǐng)域和各種實(shí)驗(yàn)室。各種檢測方法的對(duì)比：檢測方法費(fèi)用步驟檢出限時(shí)間特點(diǎn)液質(zhì)聯(lián)用/高，尿液、肉類大約一般由檢測機(jī)構(gòu)實(shí)很高復(fù)雜0.5ppb(μg/kg)，飼料長氣質(zhì)聯(lián)用施，作為確證方法10ppb高效液相高復(fù)雜高，尿液、肉類大約長一般由檢測機(jī)構(gòu)實(shí)色譜法0.5ppb(μg/kg)施，作為確證方法酶聯(lián)免疫較復(fù)高，尿液0.1ppb(μ便宜g/kg肉類0.3-0.5ppb，較長用于大量篩查試劑盒雜飼料5ppb膠體金快便宜簡單略低，尿液約3ppb；肉短用于大量篩查，但檢卡類1ppb；飼料5-10ppb需要確證方法瘦肉精檢測發(fā)展趨勢根據(jù)目前國內(nèi)外檢測 CLB各種方法的進(jìn)展情況以及 CLB濫用及殘留的嚴(yán)峻性，建立一種克服上述各種檢鍘方法缺點(diǎn)的簡便、快速、精確、準(zhǔn)確、可實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢測的測定 CLB技術(shù)勢在必行。滴金免疫技術(shù) (DIGFA)和生物傳感器技術(shù)(Biosensor，BS)是兩種快速、高教的殘留物分析技術(shù)．如能研究、開發(fā)運(yùn)用到檢測生物樣品中 CLB的殘留可能會(huì)產(chǎn)生理想的效果和大的飛躍。1、滴金免疫技術(shù)(DIGFA)DIGFA的關(guān)鍵技術(shù)是抗 CLB單克隆抗體的制備、膠體金的制備、膠體金標(biāo)記的單克隆抗體的制備、免疫滲濾裝置(如，硝酸纖維抗體包被膜)的制備。后三種12黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）關(guān)鍵技術(shù)已比較成熟，最關(guān)鍵的是制備出特異性強(qiáng)、純度高的抗CLB的單克隆抗體。目前，DlGFA已成功地運(yùn)用于早孕診斷、弓形蟲病診斷、血吸蟲病診斷等，靈敏度及準(zhǔn)確度均很理想。如果研制成檢測CLB的滴金免疫試紙條或滴金免疫測試盒可實(shí)現(xiàn)CLB的高效現(xiàn)場檢測。所以運(yùn)用D1GFA技術(shù)將是一種較理想、很有發(fā)展前景及研究價(jià)值的檢測CLB技術(shù)。2、生物傳感器技術(shù)(BS)生物傳感器技術(shù)也是。邁向 21世紀(jì)的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)”之一。生物傳感器是近30年來發(fā)展起來的一項(xiàng)新型、高效的分析技術(shù)。所謂生物傳感器即由生物活性物質(zhì)作為敏感元件，即生物識(shí)別系統(tǒng)(感受器)，再配上適當(dāng)?shù)膿Q能器及輸出顯示裝置所構(gòu)成的分析工具。其原理為分子識(shí)別部分與被識(shí)別物質(zhì)相接觸，可發(fā)生化學(xué)變化、熱變化、光變化以及直接誘導(dǎo)電信號(hào)，而后利用電學(xué)測量方法進(jìn)行檢測和控制及顯示輸出。生物傳感器的種類包括離子選擇電極傳感器、氣敏電極傳感器、酶免疫傳感器、壓電晶體傳感器等，可測定離子、氣體、底物、酶、抗生素、維生素等物質(zhì)。最早研制成功的是 l967年updike等研制的葡萄糖傳感器，它是一種酶傳感器。原理是將肛 n葡萄糖氧化酶(GOD)固定在聚丙烯酰胺凝膠固定化膜上，以氧電極作為換能器，將此驥固定在氧電極上．D一葡萄糖在GOD的作用下消耗氧生成葡萄糖內(nèi)酯和水，在此過程中產(chǎn)生化學(xué)變化，用氧電極將此化學(xué)變化轉(zhuǎn)化為電信號(hào)并顯示輸出葡萄糖的含量。國外已有用生物傳感器技術(shù)檢測CLB殘留的資料報(bào)道，如 PlzzarieIlo Andrea應(yīng)用分子印跡聚合膜(MIP)作為分子識(shí)別系統(tǒng)，選擇固相基質(zhì)復(fù)合電報(bào) (SBMCE)作為換能器，微分脈沖電壓電流表(DPV)作為輸出顯示裝置檢測牛肝臟中 CLB殘留，結(jié)果此方法特異性強(qiáng)，與其他同類物質(zhì)交叉反應(yīng)低，缺點(diǎn)是反應(yīng)時(shí)間較長，靈敏度還有待于提高”】。酶標(biāo)免疫傳感技術(shù)是酶標(biāo)免疫技術(shù)與光電分析技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的一種電化學(xué)免疫分析技術(shù)，是利用生物傳感器進(jìn)行免疫測定的一種實(shí)驗(yàn)手段。 其特點(diǎn)是利用酶的化學(xué)放大作用，通過測定抗原或抗體標(biāo)記酶作為示蹤酶， 將酶與底物反應(yīng)的化學(xué)變化用換能器轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，從而輸出待測物質(zhì)的含量。目前酶免疫傳感器的靈敏度最高可達(dá) 0.01μg／g，而且可在幾分鐘之內(nèi)完成檢測全過程，比 EUSA法更靈敏、更簡便和快速，而且可用于各種抗原物質(zhì)的測定，尤其對(duì)體液中的藥物和激素的檢測更為適用。所以，如果研制成功測定13黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）CLB殘留的酶免疫傳感器，則可使 CLB的監(jiān)測及檢測工作變得簡單、高效。所以研制和開發(fā)測定CLB殘留的生物傳感器是完成 CLB殘留監(jiān)控規(guī)劃的一項(xiàng)理想的方案。綜上所述．由于已經(jīng)禁止在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用CLB，所以在許多國家并沒有確定動(dòng)物性產(chǎn)品中CLB的最大殘留限量(MRL)。荷蘭規(guī)定牛、馬肝臟中CLB的MRL值為0.5μg／g，英國規(guī)定可食性組織中MRL值為0.1μg/g，有人建議應(yīng)定為0.08μg／g。上述四種檢測CLB的方法中，HPLC，GC·Ms、CE的最低檢測限都在0.5μg／g以上，而且檢測過程煩瑣、檢測時(shí)間長，需貴重儀器、難于操作，不能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢測；EIA法最低檢測限可達(dá)O.05μg/g．靈敏度和精確度都符合標(biāo)準(zhǔn)，但假陽性率高而且也不能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢測。如果研制成功檢測CLB殘留的D1GFA試紙條和酶免疫傳感器，則可克服上述方法的缺點(diǎn)，并且從定性和定量兩個(gè)方面實(shí)現(xiàn)CLB殘留的現(xiàn)場監(jiān)測。所以，研制高效、方便、迅速的 DIGFA試紙條和酶免疫傳感器是檢測 CLB殘留的較為理想的方法和途徑，值得探人探討和開發(fā)。14黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）致謝在本論文設(shè)計(jì)過程中，感謝胡老師給了我鍛煉的機(jī)會(huì)。從選題指導(dǎo)到細(xì)節(jié)修改，胡老師都給予了我認(rèn)真的指導(dǎo)，提出了很多寶貴的意見與建議；在論文的寫作工程中，胡老師經(jīng)常詢問論文進(jìn)程，并為我解答疑問。因此，我的論文里不僅凝聚著自己對(duì)知識(shí)的總結(jié)，還包含著胡老師的認(rèn)真負(fù)責(zé)、兢兢業(yè)業(yè)求真態(tài)度。胡老師治學(xué)態(tài)度嚴(yán)謹(jǐn)、對(duì)待工作精益求精；他視野開闊，思維敏銳，給了我深深的啟迪。同時(shí)胡老師還在思想、生活上給予我啟發(fā)，在此向胡老師致以崇高的敬意和誠摯的謝意。感謝黃河水院環(huán)境與化學(xué)工程系的老師們，特別是胡曉冰老師、王振偉老師、陳希良老師、王愷老師武琳琳老師以及其他對(duì)我?guī)椭^的任課老師。他們一絲不茍的作風(fēng)，嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的態(tài)度，一直是我工作、學(xué)習(xí)的榜樣；他們循循善誘的教導(dǎo)和不拘一格的思路，不僅授我以知識(shí)，而且教我做人，給予我無盡的啟迪。對(duì)我專業(yè)思維及專業(yè)技能的教育培養(yǎng)，以及在學(xué)業(yè)上的細(xì)心指導(dǎo)，為我工作和繼續(xù)學(xué)習(xí)打下了良好的基礎(chǔ)。在此，向諸位老師致以我最崇高的敬意和最真誠的謝意！感謝陪我一起愉快度過三年大學(xué)生活的生物技術(shù)及應(yīng)用1101班的各位同學(xué)們，正是由于你們對(duì)我的學(xué)習(xí)、生活和工作的關(guān)心、幫助和支持，我才能克服一個(gè)一個(gè)的困難和疑惑，直至本文的順利完成。是你們給予我不少的幫助。三年來我們真心相待，和睦共處，不是兄弟姐妹勝似兄弟姐妹！正是一路上有你們，我的求學(xué)生涯才不會(huì)感到孤獨(dú)，馬上就要各奔前程了，希望你們有好的前途。感謝我的爸爸媽媽，辛辛苦苦的把我培養(yǎng)這么大，對(duì)于父母的養(yǎng)育之情無法用言語表達(dá)。在以后的生活中我會(huì)更加的關(guān)心體貼我的爸爸媽媽，成為一個(gè)讓你們值得驕傲的孩子！感謝所有授我專業(yè)的老師，課堂上傳授給了我們各種專業(yè)知識(shí)，正是有了這些知識(shí)的學(xué)習(xí)，我才能寫出現(xiàn)在的總結(jié)。感恩之余，誠懇地請(qǐng)各位老師對(duì)我的論文多加批評(píng)指正，使我及時(shí)完善論文的不足之處。謹(jǐn)以此致謝，最后，我要向百忙之中抽時(shí)間對(duì)本文進(jìn)行審閱的各位老師表示衷心的感謝。15黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）文獻(xiàn)邱建琴.左曉磊畜產(chǎn)品中萊克多巴胺殘留的快速檢測[期刊論文]-畜牧獸醫(yī)科技信息[J]2010(5)李前勇.王忠翊.張德志.王慶華犬實(shí)驗(yàn)性"瘦肉精"中毒的臨床病理學(xué)觀察-上海畜牧獸醫(yī)通訊[J]2009(4)劉維紅動(dòng)物產(chǎn)品中鹽酸克倫特羅殘留危害及檢測方法-安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)[J]2009(23)張群.劉燁固相萃取-反相高效液相色譜法測定鮮肉中鹽酸克倫特羅殘留量的條件優(yōu)化-現(xiàn)代食品科技[J]2009(3)徐青萍.易水生內(nèi)標(biāo)加入順序?qū)y定豬尿中鹽酸克倫特羅殘留量的影響-中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志 2008(2)嵇大圣.熊漢國.付自政.孫明導(dǎo)納米技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用研究進(jìn)展-中國食品添加劑2008(1)徐少平鹽酸克倫特羅(CL)(瘦肉精)的危害與檢測方法-吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)報(bào)[J]2006(4)謝芳豬肉質(zhì)量安全研究進(jìn)展-肉類研究[J]2006(11)左曉磊.張峰.褚素巧.劉海生應(yīng)用ELISA對(duì)畜產(chǎn)品瘦肉精殘留的快速篩選河北農(nóng)業(yè)科學(xué)[J]2006(3)10.時(shí)瑾鹽酸克倫特羅時(shí)間分辨熒光免疫分析方法的建立[D]碩士2006張清安.范學(xué)輝動(dòng)物性食品中殘留鹽酸克倫特羅的研究進(jìn)展-食品科學(xué)[J]2005(5)劉平年HPLC-DAD法測定豬肝中的鹽酸克倫特羅-化學(xué)分析計(jì)量[J]2005(5)賀利民.蘇貽娟.張嘉慧氣相色譜-質(zhì)譜法測定動(dòng)物組織及飼料中克倫特羅[J]-質(zhì)譜學(xué)報(bào)2005(3)高燕紅.梁春穗.魯琳食物中毒樣品中克倫特羅檢測方法的比較[J]-中國食品衛(wèi)生雜志2005(2)陶燕飛.劉登才.馬素英.袁宗輝.范盛先.王玉蓮.陳冬梅衍生固相萃取16黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）GC-MS檢測?？墒辰M織中克倫特羅的殘留量 [J]-分析測試學(xué)報(bào)2004(z1)賀鐵明.胥傳來.王武康鹽酸克倫特羅免疫原的合成與鑒定[J]-中國糧油學(xué)報(bào)2004(2)張清安.范學(xué)輝動(dòng)物性食品中鹽酸克倫特羅(瘦肉精)殘留危害及其檢測方法研究進(jìn)展[J]-食品與發(fā)酵工業(yè)2004(9)胥傳來.王武康.賀鐵明食品中殘留鹽酸克倫特羅免疫原的合成與鑒定[J]- 食品科學(xué)2004(12)陳存社.呂會(huì)田.劉玉峰飼料中鹽酸克倫特羅的氣相色譜-質(zhì)譜法測定分析[J]-飼料工業(yè)2004(5)劉見免疫金試紙法快速檢測鹽酸克倫特羅[J]-上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué)版）2004(4)甘賓賓.蔣世瓊畜禽產(chǎn)品中鹽酸克侖特羅的檢測[J]-生命科學(xué)儀器2004(2)裴艷濤.孫繼國.林密.蘇小庚動(dòng)物性產(chǎn)品中"瘦肉精"殘留的檢測方法研究進(jìn)展[J]-動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)2004(1)王?；?黃素珍鹽酸克倫特羅的危害性與檢測[J]-動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展2003(4)17黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）請(qǐng)刪除以下內(nèi)容， O(∩_∩)O謝謝！?。heoriginoftaxationintheUnitedStatescanbetracedtothetimewhenthecolonistswereheavilytaxedbyGreatBritainoneverythingfromteatolegalandbusinessdocumentsthatwererequiredbytheStampTax.Thecolonists'disdainforthistaxationwithoutrepresentation (so-calledbecausethecolonieshadnovoiceintheestablishment ofthetaxes)gaverisetorevoltssuchastheBostonTeaParty. However,evenaftertheRevolutionaryWarandtheadoptionof theU.S.Constitution,themainsourceofrevenueforthenewly createdstateswasmoneyreceivedfromcustomsandexcise taxesonitemssuchascarriages,sugar,whiskey,andsnuff. IncometaxfirstappearedintheUnitedStatesin1862,duringtheCivilWar.Atthattimeonlyaboutonepercentofthepopulationwasrequiredtopaythetax.Aflat-rateincometaxwasimposedin1867.Theincometaxwasrepealedinitsentiretyin1872.IncometaxwasarallyingpointforthePopulistpartyin1892, andhadenoughsupporttwoyearslaterthatCongresspassedtheIncomeTaxActof1894. Thetaxatthattimewastwopercentonindividualincomesinexcessof$4,000,whichmeantthat itreachedonlythewealthiestmembersofthepopulation.TheSupremeCourtstruckdown thetax,holdingthatitviolatedtheconstitutionalrequirementthatdirecttaxesbeapportionedamongthestatesbypopulation(pollockv.farmers'loan&trust,158U.S.601,15S.Ct.912,39L.Ed.1108[1895]).Aftermanyyearsofdebateandcompromise,thesixteenthamendmenttotheConstitutionwasratifiedin1913,providingCongresswiththepowertolayandcollecttaxesonincomewithoutapportionmentamongthestates.Theobjectivesoftheincometaxweretheequitabledistributionofthetaxburdenandtheraisingofrevenue.Since1913theU.S.incometaxsystemhasbecomeverycomplex.In1913theincometaxlawswerecontainedineighteenpagesoflegislation;theexplanationofthetaxreformactof1986wasmorethanthirteenhundredpageslong(Pub.L.99-514,Oct.22,1986,100Stat.2085).CommerceClearingHouse,apublisheroftaxinformation,releasedaversionoftheInternalRevenueCodeintheearly1990sthatwasfourtimesthickerthanitsversionin1953.Changestothetaxlawsoftenreflectthetimes.Theflattaxof1913waslaterreplacedwithagraduatedtax.AftertheUnitedStatesenteredworldwari,theWarRevenueActof1917imposedamaximumtaxrateforindividualsof67percent,comparedwitharateof13percentin1916.In1924SecretaryoftheTreasuryAndrewW.Mellon,speakingtoCongressaboutthehighleveloftaxation,stated,Thepresentsystemisafailure.Itwasanemergencymeasure,adoptedunderthepressureofwarnecessityandnottobecounteduponasapermanentpartofourrevenuestructure.Thehighratesputpressureontaxpayerstoreducetheirtaxableincome,tendtodestroyindividualinitiativeandenterprise,andseriouslyimpedethedevelopmentofproductivebusiness.Wayswillalwaysbefoundtoavoidtaxessodestructiveintheirnature,andtheonlywaytosavethesituationistoputthetaxesonareasonablebasisthatwillpermitbusinesstogoonandindustrytodevelop.Consequently,theRevenueActof1924reducedthemaximumindividualtaxrateto43percent(RevenueActs,June2,1924,ch.234,43Stat.253).In1926theratewasfurtherreducedto25percent.TheRevenueActof1932wasthefirsttaxlawpassedduringtheGreatDepression(RevenueActs,June6,1932,ch.209,47Stat.169).Itincreasedtheindividual18黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）maximumratefrom25to63percent,andreducedpersonalexemptionsfrom$1,500to$1,000forsinglepersons,andfrom$3,500to$2,500formarriedcouples.Thenationalindustrialrecoveryactof1933(NIRA),partofPresidentfranklind.roosevelt'snewdeal,imposedafivepercentexcisetaxondividendreceipts,imposedacapitalstocktaxandanexcessprofitstax,andsuspendedalldeductionsforlosses(June16,1933,ch.90,48Stat.195).Therepealin1933oftheeighteenthamendment,whichhadprohibitedthemanufactureandsaleofalcohol,broughtinanestimated$90millioninnewliquortaxesin1934.Thesocialsecurityactof1935providedforawagetax,halftobepaidbytheemployeeandhalfbytheemployer,toestablishafederalretirementfund(OldAgePensionAct,Aug.14,1935,ch.531,49Stat.620).TheWealthTaxAct,alsoknownastheRevenueActof1935,increasedthemaximumtaxrateto79percent,theRevenueActsof1940and1941increaseditto81percent,theRevenueActof1942raiseditto88percent,andtheIndividualIncomeTaxActof1944raisedthe individualmaximumrateto94percent.The post-WorldWarIIRevenueActof1945reducedthe individualmaximumtaxfrom94percentto91percent. TheRevenueActof1950,duringthekoreanwar,reduced itto84.4percent,butitwasraisedthenextyearto92 percent(RevenueActof1950,Sept.23,1950,ch.994,Stat. 906).Itremainedatthisleveluntil1964,whenitwasreducedto70percent.TheRevenueActof1954revisedtheInternalRevenueCodeof1939,makingmajorchangesthatwerebeneficialtothetaxpayer,includingprovidingforchildcaredeductions(laterchangedtocredits),anincreaseinthecharitablecontributionlimit,ataxcreditagainsttaxableretirementincome,employeedeductionsforbusinessexpenses,andliberalizeddepreciationdeductions.From1954to1962,theInternalRevenueCodewasamendedby183separateacts.In1974theemployeeretirementincomesecurityact(ERISA)createdprotectionsforemployeeswhoseemployerspromisedspecifiedpensionsorotherretirementcontributions(Pub.L.No.93-406,Sept.2,1974,88Stat.829).ERISArequiredthattobetaxdeductible,theemployer'splancontributionmustmeetcertainminimumstandardsastoemployeeparticipationandvestingandemployerfunding.ERISAalsoapprovedtheuseofindividualretirementaccounts(IRAs)toencouragetax-deferredretirementsavingsbyindividuals.TheEconomicRecoveryTaxActof1981(ERTA)providedthelargesttaxcutuptothattime,reducingthemaximumindividualratefrom70percentto50percent(Pub.L.No.97-34,Aug.13,1981,95Stat.172).ThemostsweepingtaxchangessinceworldwariiwereenactedintheTaxReformActof1986.ThisbillwassignedintolawbyPresidentronaldreaganandwasdesignedtoequalizethetaxtreatmentofvariousassets,eliminatetaxshelters,andlowermarginalrates.Conservativeswantedtheacttoprovideasingle,lowtaxratethatcouldbeappliedtoeveryone.Althoughthissingle,flatratewasnotincludedinthefinalbill,taxrateswerereducedto15percentonthefirst$17,850ofincomeforsinglesand$29,750formarriedcouples,andsetat28to33percentonremainingincome.Manydeductionswererepealed,suchasadeductionavailabletotwo-incomemarriedcouplesthathadbeenusedtoavoidthe"marriagepenalty"(agreatertaxliabilityincurredwhentwopersonsfiledtheirincometaxreturnasamarriedcoupleratherthanasindividuals).Althoughthepersonalexemptionexclusionwasincreased,anexemptionforelderlyandblindpersonswhoitemizedeductionswasrepealed.Inaddition,aspecialcapitalgainsratewasrepealed,aswasaninvestmenttaxcreditthathadbeenintroducedin1962byPresidentjohnf.kennedy.TheOmnibusBudgetReconciliationActof1993,thefirstbudgetandtaxactenactedduringtheClintonadministration,wasvigorouslydebated,andpassedwithonlytheminimumnumberofnecessaryvotes.Thislawprovidedforincometaxratesof15,28,31,36,and39.6percentonvaryinglevelsofincomeandforthetaxationofsocialsecurityincomeifthetaxpayerreceivesotherincomeoveracertainlevel.In2001CongressenactedamajorincometaxcutattheurgingofPresidentgeorgew.bush.Overthecourseof11yearsthelawreducesmarginalincometaxratesacrossalllevels19黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)報(bào)告）ofincome.The36percentratewillbeloweredto33percent,the31percentrateto28percent,the28percentrateto25percent.Inaddition,anewbottom10percentratewascreated.Sincetheearly1980s,aflat-ratetaxsystemratherthanthegraduatedbracketedmethodhasbeenproposed.(Thegraduatedbracketedmethodistheonethathasbeenusedsincegraduatedtaxeswereintroduced:thepercentageoftaxdiffersbasedontheamountoftaxableincome.)Theflat-ratesystemwouldimposeonerate,suchas20percent,onallincomeandwouldeliminatespecialdeductions,credits,andexclusions.Despitefirmsupportbysome,theflat-ratetaxhasnotbeenadoptedintheUnitedStates.Regardlessofthechangesmadebylegislatorssince1913,thebasicformulaforcomputingtheamountoftaxowedhasremainedbasicallythesame.Todeterminetheamountofincometaxowed,certaindeductionsaretakenfromanindividual'sgrossincometoarriveatanadjustedgrossincome,fromwhichadditionaldeductionsaretakentoarriveatthetaxableincome.Oncetheamountoftaxableincomehasbeendetermined,taxratechartsdeterminetheexactamountoftaxowed.Iftheamountoftaxowedislessthantheamountalreadypaidthroughtaxprepaymentorthewithholdingoftaxesfrompaychecks,thetaxpayerisentitledtoarefundfromtheIRS.Iftheamountoftaxowedismorethanwhathasalreadybeenpaid,thetaxpayermustpaythedifferencetotheIRS.CalculatingthegrossincomeofrestaurantemployeeswhoseincomeispartiallyderivedfromgratuitiesleftbycustomershasledtodisputeswiththeIRSandemployersoverhowmuchtheyshouldcontributeinfederalinsurancecontributionact(fica)taxes.Althoughcustomerspaythesetipsdirectlytoemployees,federallawdeemsthetipstohavebeenwagespaidbytheemployerforFICAtaxpurposes.Employersareimputedtohavepaidlargesumsofmoneytheyneverhandledandforwhichtheynowayofascertainingtheexactamount.TheSupremeCourt,inUnitedStatesv.FiorD'Italia,536U.S.238,122S.Ct.2117,153L.Ed.2d280(2002),upheldtheIRS"aggregatemethod"ofreportingtipincome.InsteadofrequiringtheIRStomakeindividualdeterminationsofunreportedtipsforeachemployeewhencalculatingFICAtax,theCourtheldthattheIRScouldmakeemployersreporttheirgrosssalesonamonthlystatementtohelpdeterminetipincome.Employeesalsomustreporttheirtipincomemonthlyonaform.TheIRSthenusesthesetwopiecesofinformationtocalculatewhattheemployerneedstocontributeinFICAtax.基于C8051F單片機(jī)直流電動(dòng)機(jī)反饋控制系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與研究基于單片機(jī)的嵌入式Web服務(wù)器的研究MOTOROLA單片機(jī)MC68HC（8）05PV8/A內(nèi)嵌EEPROM的工藝和制程方法及對(duì)良率的影響研究基于模糊控制的電阻釬焊單片機(jī)溫度控制系統(tǒng)的研制基于MCS-51系列單片機(jī)的通用控制模塊的研究基于單片機(jī)實(shí)現(xiàn)的供暖系統(tǒng)最佳啟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