實(shí)驗(yàn)二淀粉酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)報(bào)告

淀粉酶活性的測(cè)定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

酶的活力是酶的重要參數(shù);反映的是酶的催化能力;因此測(cè)定酶活力是

研究酶的基礎(chǔ)..酶活力由酶活力單位表征;通過(guò)計(jì)算適宜條件下一定時(shí)間

內(nèi)一定量的酶催化生成產(chǎn)物的量得到..

淀粉酶是水解淀粉的糖苷鍵的一類酶的總稱..α-淀粉酶是一種典型

的內(nèi)切型淀粉酶;主要作用于淀粉水解的液化階段;因此又叫液化酶..作

為一種最重要的工業(yè)酶制劑;α-淀粉酶廣泛存在于動(dòng)物;植物和微生物

中..其中;微生物α-淀粉酶以其經(jīng)濟(jì)易得成為工業(yè)生產(chǎn)主要來(lái)源..目

前;α-淀粉酶活性的測(cè)定方法很多種..

本實(shí)驗(yàn)采用楊氏改良法測(cè)定α-淀粉酶；掌握測(cè)定α-淀粉酶活性大小

與溫度關(guān)系的方法;通過(guò)分析得出酶的最適溫度范圍..

二、實(shí)驗(yàn)原理

酶促反應(yīng)中;反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度和pH值稱為某種酶作用時(shí)

的最適溫度和pH值..溫度對(duì)酶反應(yīng)的影響是雙重的：一方面隨著溫度的

增加;反應(yīng)速度也增加;直至最大反應(yīng)速度為止；另一方面隨著溫度的不斷

升高;而使酶逐步變性從而使反應(yīng)速度降低;其變化趨勢(shì)呈鐘形曲線變

化..

不同菌株產(chǎn)生的酶在耐熱性、酶促反應(yīng)的最適溫度、PH、對(duì)淀粉的水

解程度;以及產(chǎn)物的性質(zhì)等均有差異..α-淀粉酶屬水解酶;作為生物催化

劑可隨機(jī)作用于直鏈淀粉分子內(nèi)部的α-1;4糖苷鍵;迅速地將直鏈淀粉分

子切割為短鏈的糊精或寡糖;使淀粉的粘度迅速下降;淀粉與碘的反應(yīng)逐

0.4MNaOH/0.4MCHCOOH及0.1MHCl：0.4MNaOH/0.4MCHCOOH及0.1MHCl：30.005工作碘液：0.5克I和5.0克KI水中研磨;定容至1000mL；21%糊化淀粉溶液：稱取1.0克淀粉;加入25mL0.4MNaOH;60℃5min;冷稀釋?duì)?淀粉酶溶液：待測(cè)樣品

-淀粉酶不能水解淀粉支鏈的α-1;6糖苷鍵;因此最終水解產(chǎn)物是麥芽糖、

葡萄糖和α-1;6鍵的寡糖..

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)淀粉遇碘顯藍(lán)色;淀粉含量越高;顏色越深..用分管光度計(jì)

檢測(cè)顯色效應(yīng)大小;通過(guò)分管光度值計(jì)算酶活力

注意：實(shí)驗(yàn)中為了消除非酶促反應(yīng)引起的淀粉水解帶來(lái)的誤差;每組實(shí)

驗(yàn)都做了相應(yīng)的對(duì)照實(shí)驗(yàn);在最終計(jì)算酶的活性時(shí)以測(cè)量組的值減去對(duì)照

組的值加以校正..

在實(shí)驗(yàn)中要嚴(yán)格控制溫度及時(shí)間;以減小誤差..并且在酶的作用過(guò)程

中;三支測(cè)定管及空白管不要混淆..

三、材料、試劑與儀器

實(shí)驗(yàn)材料：α-淀粉酶

：分光光度計(jì)、電熱恒溫水浴鍋、小臺(tái)秤、研缽、玻璃若干

試劑：

①

②

③

卻后加25mL0.4MCHCOOH;定容至100mL；3

④

四、實(shí)驗(yàn)步驟

①10mL1淀粉溶液加入試管中;室溫25/45/65℃保溫10min

②于每管中各加酶稀釋液1mL;在室溫25/45/65℃恒溫水浴中水浴溫

取上述混合液1mL加入預(yù)先裝好10mL工作碘液的試管;搖勻..660nm測(cè)吸光度蒸餾水調(diào)零;記錄數(shù)據(jù)..注：吸光度測(cè)定勿漏空白對(duì)照取上述混合液1mL加入預(yù)先裝好10mL工作碘液的試管;搖勻..660nm測(cè)吸光度蒸餾水調(diào)零;記錄數(shù)據(jù)..注：吸光度測(cè)定勿漏空白對(duì)照2500-D100/D0100—對(duì)照組吸光度4565

③加1mL1M鹽酸終止反應(yīng)..

⑤

⑥

組

對(duì)照組為不加酶液;加相應(yīng)體積的水

五、數(shù)據(jù)整理及計(jì)算

溫度℃

OD660對(duì)照組OD660根據(jù)以上的數(shù)據(jù)整理的結(jié)果;結(jié)合以下公式計(jì)算兩種淀粉酶的活性：

酶活=D稀釋倍數(shù)

D—反應(yīng)混合液吸光度

D

100—系數(shù)%

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