微生物細(xì)胞大小的測定

關(guān)于微生物細(xì)胞大小的測定第1頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三一、目的要求

了解目鏡測微尺和鏡臺測微尺的構(gòu)造和使用原理；掌握微生物細(xì)胞大小的測定方法。第2頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三二、基本原理

微生物細(xì)胞大小，是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一。由于菌體很小，只能在顯微鏡下測量。用來測量微生物細(xì)胞大小的工具有目鏡測微尺（圖3）和鏡臺測微尺（圖4）。第3頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三

目鏡測微尺（圖3，A）是一塊可放在接目鏡內(nèi)的隔板上的圓形小玻片，其中央刻有精確的刻度，有等分50小格或100小格兩種，每5小格間有一長線相隔。由于所用接目鏡放大倍數(shù)和接物鏡放大倍數(shù)的不同，目鏡測微尺每小格所代表的實際長度也就不同，因此，目鏡測微尺不能直接用來測量微生物的大小，在使用前必須用鏡臺測微尺進(jìn)行校正，以求得在一定放大倍數(shù)的接目鏡和接物鏡下該目鏡測微尺每小格的相對值，然后才可用來測量微生物的大小。第4頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三第5頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三

鏡臺測微尺（圖4）是中央部分刻有精確等分線的載玻片。一般將1mm等分為100格（2mm等分為200格），每格長度等于0.01mm（即10μm），是專用于校正目鏡測微尺每格長度的。第6頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三圖4目測微尺和鏡臺測微尺

①目鏡測微尺②鏡臺測微尺③鏡臺測微尺的中心部放大

④鏡臺測微尺標(biāo)實目鏡測微尺時兩者重疊

A.目鏡測微尺B.鏡臺測微尺

第7頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三三、器材

釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）斜面菌種，目鏡測微尺，鏡臺測微尺，顯微鏡，擦鏡紙，香柏油，二甲苯等。第8頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三四、操作步驟

1．目鏡測微尺的標(biāo)定

（1）放置目鏡測微尺取出接目鏡，旋開接目鏡透鏡，將目鏡測微尺的刻度朝下放在接目鏡筒內(nèi)的隔板上（圖3，B），然后旋上接目透鏡，最后將此接目鏡插入鏡筒內(nèi)（圖3，C）。（2）放置鏡臺測微尺將鏡臺測微尺置于顯微鏡的載物臺上，使刻度面朝上。第9頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三（3）校正目鏡測微尺

先用低倍鏡觀察，對準(zhǔn)焦距，當(dāng)看清鏡臺測微尺后，轉(zhuǎn)動接目鏡，使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行，移動推動器，使目鏡測微尺和鏡臺測微尺的某一區(qū)間的兩對刻度線完全重合，然后計數(shù)出兩對重合線之間各自所占的格數(shù)。例如圖4④中A（目鏡測微尺）上5格對準(zhǔn)B鏡臺測微尺上的2格，B的1格為10μm，2格的長度為20μm,所以目鏡測微尺上1小格的長度為4μm。第10頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三

根據(jù)計數(shù)得到的目鏡測微尺和鏡臺測微尺重合線之間各自所占的格數(shù)，通過如下公式換算出目鏡測微尺每小格所代表的實際長度：

目鏡測微尺每小格長度（μm）=（兩對重合線間鏡臺測微尺格數(shù)×10）/兩對重合線間目鏡測微尺格數(shù)

同法校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長度。第11頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三2．菌體大小的測定

（1）將酵母菌斜面制成一定濃度的菌懸液（10-2）。（2）取一滴酵母菌菌懸液制成水浸片。（3）移去鏡臺測微尺，換上酵母菌水浸片，先在低倍鏡下找到目的物，然后在高倍鏡下用目鏡測微尺來測量酵母菌菌體的長，寬各占幾格（不足一格的部分估計到小數(shù)點后一位數(shù)）。測出的格數(shù)乘上目鏡測微尺每格的校正值，即等于該菌的長和寬。一般測量菌體的大小要在同一個標(biāo)本片上測定10-20個菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對數(shù)生長期的菌體進(jìn)行測定。第12頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三

3．取出目鏡測微尺，將接目鏡放回鏡筒，再將目鏡測微尺和鏡臺測微尺分別用擦鏡紙擦試后，放回盒內(nèi)保存。第13頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三五、實驗報告

1．將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表。接物鏡接物鏡倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)鏡臺測微尺格數(shù)目鏡測微尺每格代表的長度（μm）低倍鏡

高倍鏡

油鏡

接目鏡倍數(shù)_______________________第14頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三2．在高倍鏡和油鏡下測量酵母菌大小，將結(jié)果填入下表。菌體編號長（μm）寬（μm）菌體大?。ㄆ骄担╅L×寬（μm）目鏡測微尺格數(shù)菌體長度目鏡測微尺格數(shù)菌體寬度1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

注：結(jié)果計算

長/μm＝平均格數(shù)×校正值；寬/μm＝平均格數(shù)×校正值；

大小表示為寬/μm×長/μm第15頁，講稿共17頁，2023年5月2日，星期三