抗生素類藥物的分析

關(guān)于抗生素類藥物的分析第1頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三第一節(jié)概述抗生素的定義

在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱抗生素是細菌、放線菌和真菌等微生物的代謝產(chǎn)物，對各種病原微生物有強大的抑制或殺滅作用。第2頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三一、抗生素類藥物的特點1.化學(xué)純度低同系物多、異構(gòu)體多、降解物多2.活性組分易發(fā)生變異微生物菌株的變化、發(fā)酵條件改變3.穩(wěn)定性差分子結(jié)構(gòu)大多不穩(wěn)定，降解后療效下降、失效或增加毒副作用第3頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三二、抗生素類藥物的質(zhì)量分析（一）鑒別試驗1.化學(xué)方法利用某些官能團的特性，利用適當?shù)脑囈号c其反應(yīng)顯色2.物理化學(xué)方法紫外分光光度法、紅外分光光度法3.生物學(xué)方法特異的酶反應(yīng)第4頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三二、抗生素類藥物的質(zhì)量分析（二）雜質(zhì)檢查1.影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的指標水分、酸堿度、干燥失重2.控制有機、無機雜質(zhì)的指標溶液的澄清度與顏色、重金屬、殘留溶劑、熾灼殘渣3.與臨床安全性密切相關(guān)的指標熱源、細菌內(nèi)毒素、無菌、降壓物質(zhì)4.其他指標β-內(nèi)酰胺類抗生素：聚合物第5頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（三）含量測定或效價測定1.微生物檢定法以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指標來衡量抗生素效價的一種方法。第6頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（三）含量測定或效價測定1.微生物檢定法優(yōu)點1、靈敏度高、需用量小、測定結(jié)果直觀2、測定原理與臨床一致，適用范圍廣3、同一類型的抗生素?zé)o需分離，一次測定總效價缺點1、操作繁瑣2、培養(yǎng)時間長3、測定誤差大第7頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三2.理化方法適用于提純的以及化學(xué)結(jié)構(gòu)已確定的抗生素優(yōu)點1.操作簡單、省時、方法準確2.專屬性1.不一定代表生物效價缺點2.易受雜質(zhì)干擾第8頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三3.抗生素活性表示方法效價：每ml或每mg中含有某種抗生素的有效成分的多少第9頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三三、抗生素的分類（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）：

β–內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、其他抗生素類第10頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三第二節(jié)β–內(nèi)酰胺類抗生素

青霉素類第11頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三頭孢菌素類第12頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三青霉素（青霉素G、芐青霉素）第13頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三氨芐西林

（氨芐青霉素）第14頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三阿莫西林

（羥氨芐青霉素）第15頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三普魯卡因青霉素第16頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三頭孢氨芐第17頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三頭孢拉定第18頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三頭孢羥氨芐第19頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三頭孢噻吩鈉第20頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)Na與堿金屬(Na+、K+)成鹽1.酸性和溶解度易溶于水第21頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三與有機堿(普魯卡因)成鹽

難溶于水，易溶于甲醇普魯卡因青霉素第22頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三2.旋光性

頭孢菌素類C6C7青霉素類C3C5C6

﹡﹡﹡﹡﹡第23頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三

3.紫外吸收特征頭孢菌素類母核有共軛體系青霉素類母核無明顯UV

多數(shù)有苯環(huán)取代基第24頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三4.β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性水溶液不穩(wěn)定干燥純凈穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素四元環(huán)張力大酰胺鍵易水解第25頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三例青霉素的降解反應(yīng)青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑?；u胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2第26頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（一）呈色反應(yīng)1.羥肟酸鐵反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類NaOH呈色硫酸鐵銨試液H+二、鑒別第27頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三2.茚三酮反應(yīng)△α-氨基第28頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三2.雙縮脲反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類（開環(huán)分解）似肽鍵第29頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三3.與重氮苯磺酸反應(yīng)（偶合）酚羥基頭孢哌酮第30頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（二）沉淀反應(yīng)1.遇酸→↓在過量HCl或有機溶劑（乙醇、三氯甲烷、乙醚）中溶解第31頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三2.重氮化-偶合反應(yīng)重氮化-偶合反應(yīng)芳伯氨基第32頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三K+、Na+反應(yīng)（三）

焰色→鮮黃色

+醋酸氧鈾鋅→↓黃

Na+

焰色→紫色

+0.1%四苯硼鈉+Ac→↓白

K+第33頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三光譜法（四）1、UV法樣品、分解產(chǎn)物第34頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（五）IR法第35頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三色譜法（五）1、TLC法對照品對照法2、HPLC法第36頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三三、特殊雜質(zhì)的檢查高分子雜質(zhì)檢查頭孢他啶、頭孢曲松鈉、頭孢哌酮鈉分子排阻色潽法、離子交換色譜法、反相色譜法吸光度檢查青霉素鈉吸光度：0.80-0.8第37頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三四、含量測定微生物檢定法汞量法HPLC第38頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三汞量法（一）1.原理（水解）青霉素族ChP青霉素與汞鹽不反應(yīng)降解產(chǎn)物與汞鹽反應(yīng)巰基化合物與汞定量反應(yīng)，可測得總青霉素含量第39頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三2.方法青霉素鈉含量測定

取本品約50mg，精密稱定，加水5ml溶解后，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，放置15分鐘，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸鹽緩沖(pH4.6)20ml及水20ml，搖勻，照電位滴定法，在35～40℃，用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)緩慢滴定（控制滴定過程約為15分鐘）。每1ml硝酸汞滴定(0.02mol/L)相當于7.128mg的總青霉素

第40頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三另取本品約0.5g，精密稱定，加水與上述醋酸鹽緩沖液各25ml，振搖使完全溶解，在室溫下，立即用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)滴定，終點判斷方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg的降解物?？偳嗝顾氐陌俜趾颗c降解物的百分含量之差值即為青霉素的含量。第41頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三4、計算第42頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三

精密稱取含水量為0.5%的青霉素鈉0.0502g，按藥典方法測定總青霉素含量時，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密稱取上述樣品0.5013g，按藥典方法測定降解物含量時，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品計算，求樣品中青霉素的含量。例青霉素鈉含量測定第43頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三HPLC法（二）ChP頭孢菌素類內(nèi)標法＋校正因子外標法特點快速、高效、靈敏專屬性強、重現(xiàn)性好一法多用（鑒別、檢查、含測）第44頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三第三節(jié)氨基糖苷類抗生素常見藥物：硫酸鏈霉素硫酸阿米卡星新霉素卡那霉素硫酸慶大霉素妥布霉素氨基環(huán)醇與氨基糖縮合形成含有多羥基，又稱為多羥基抗生素第45頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺苷元糖鏈霉雙糖胺第46頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺第47頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺第48頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三慶大霉素

糖苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+加洛糖胺

糖第49頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第50頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第51頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三慶大霉素C復(fù)合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3

慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

慶大霉素C1aR、R1、R2=H

慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH3第52頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三二、性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素3個慶大霉素5個堿性中心堿性1水溶性溶解性2.旋光性第53頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三鏈霉素pH4～7慶大霉素pH2～12穩(wěn)定UV4.穩(wěn)定性3.鏈霉素在230nm處有紫外吸收第54頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三坂口反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)水解產(chǎn)物第55頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三二、鑒別試驗

茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)第56頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）坂口反應(yīng)（二）方法：取本品0.5mg，加水4ml溶解，加氫氧化鈉試液2.5ml與0.1%8-羥基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至15℃，加次溴酸鈉試液3滴，即顯橙紅色第57頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三

麥芽酚反應(yīng)（三）

鏈霉糖特有反應(yīng)H+分子重排硫酸鏈霉素的反應(yīng)：取本品約20mg，加水5ml溶解后，加氫氧化鈉溶液0.3ml，置水浴上加熱5分鐘，加硫酸鐵銨溶液0.5ml，即顯紫紅色第58頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（四）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對二甲氨基苯甲醛H+紅色（Elson-Morgan反應(yīng)）第59頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（五）硫酸鹽的鑒別反應(yīng)H+TLC法（六）第60頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三三、特殊雜質(zhì)檢查及組分分析鏈霉素雜質(zhì)鏈霉素B（水解后為甘露糖、鏈霉素）

方法TLC中的對照品法1.來源反應(yīng)中間體第61頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三薄層色譜法檢查鏈霉素B取本品0.25g，精密稱定，置回流瓶中，加5ml新鮮配制的硫酸-甲醇溶液溶解，加熱回流1小時，冷卻，用甲醇沖洗冷凝管，合并沖洗液，并用甲醇定量稀釋成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液。第62頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三薄層色譜法檢查鏈霉素B精密稱取甘露糖對照品36mg，置回流瓶中，同法處理后定量制成每1ml中含72ug的溶液，作為對照溶液取上述溶液，點于同一薄層板上，展開，晾干，顯色供試品溶液所顯鏈霉素B斑點的顏色與對照溶液主斑點比較，不得更深第63頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三四、含量測定鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計，比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。第64頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三第四節(jié)四環(huán)素類抗生素ABCD第65頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三123456789101112第66頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三四環(huán)素（TC）tetracycline第67頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三金霉素(CTC)chlortetracycline氯四環(huán)素第68頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三土霉素(OTC)oxytetracycline氧四環(huán)素第69頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三多西環(huán)素(DOTC)doxycycline脫氧土霉素第70頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三美他環(huán)素（METC）metacycline第71頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三第72頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（二）性質(zhì)酸堿性1.與酸、堿均能成鹽強酸或強堿中溶解度↑

酚羥基、烯醇型羥基弱酸性二甲胺基弱堿性第73頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三2.溶解性和吸濕性pH4.5-7.2，難溶于水pH低于4或高于8，溶解度增大具引濕性，含有結(jié)晶水第74頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三3.旋光性用于定性或定量4.紫外吸收和熒光性質(zhì)第75頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三5.不穩(wěn)定性（1）差向異構(gòu)化淡黃→黑藍色熒光第76頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三差向四環(huán)素第77頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化）第78頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（2）酸性條件下的降解λmax=445nmλmax=435nm橙黃色第79頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三脫水四環(huán)素第80頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三（3）堿性條件下的降解（熒光）第81頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+與金屬離子絡(luò)合6.第82頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三二、鑒別試驗H2SO4反應(yīng)（一）第83頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三FeCl3反應(yīng)（二）第84頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三熒光法（三）UV綠色熒光H+UV第85頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三TLC法（四）正相分配薄層色譜HPLC法（五）EDTA克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象第86頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三三、檢查有關(guān)物質(zhì)（一）HPLC法（2010版）第87頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三吸收度（二）第88頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三四、含量測定ChP、USPHPLC法（外標法）系統(tǒng)適用性試驗1.防護柱2.預(yù)試溶液

4-差向脫水四環(huán)素四環(huán)素3.RSD≤2.0%第89頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三1．下列哪個藥物會發(fā)生羥肟酸鐵反應(yīng)

A.青霉素

B.慶大霉素

C.紅霉素

D.鏈霉素

E.維生素C第90頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三2．中國藥典(2010年版)測定頭孢菌素類藥物的含量時，多數(shù)采用的方法是

A.微生物法

B.碘量法

C.汞量法

D.正相高效液相色譜法

E.反相高效液相色譜法第91頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三3．屬于-內(nèi)酰胺類的抗生素藥物有

A.青霉素

B.紅霉素

C.頭孢菌素

D.慶大霉素

E.四環(huán)素第92頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三4．能和茚三酮發(fā)生呈色反應(yīng)的物質(zhì)有

A．鏈霉素

B．慶大霉素

C．土霉素

D．氨基酸

E．苯巴比妥第93頁，講稿共100頁，2023年5月2日，星期三5.青霉素類藥物可用下面哪些方法測定

A.三氯化鐵比色法

B.汞量法

C.碘量法

D.硫醇汞鹽法