第二十二二十三章 免疫學(xué)的臨床應(yīng)用

免疫學(xué)的臨床應(yīng)用陳水親生化與分子生物學(xué)教研室第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第一節(jié)體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)及影響因素一、抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)1．高度特異性

由抗原表位與抗體分子中的超變區(qū)互補(bǔ)結(jié)合所決定的。

2．表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合

3．適宜的抗原抗體濃度和比例抗原抗體結(jié)合后能否出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)取決于兩者適當(dāng)?shù)臐舛群捅壤?．抗原抗體反應(yīng)的兩個(gè)階段二、抗原抗體反應(yīng)的影響因素

1．電解質(zhì)

抗原、抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為pH3~5和5~6不等。實(shí)驗(yàn)中常用0.85%的NaCl溶液，以提供適當(dāng)濃度的電解質(zhì)。2．溫度適當(dāng)提高反應(yīng)的溫度可增加抗原與抗體分子的碰撞機(jī)會(huì)，加速抗原抗體復(fù)合物的形成。通常37℃是抗原抗體反應(yīng)的最適溫度。3．酸堿度抗原抗體反應(yīng)的最適pH在6~8之間，pH過(guò)高或過(guò)低，均可直接影響抗原、抗體的理化性質(zhì)。

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二節(jié)檢測(cè)抗原或抗體的體外試驗(yàn)一、凝集反應(yīng)（agglutinationreactions）細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)（如聚苯乙稀乳膠等）與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)現(xiàn)象。1.直接凝集反應(yīng)：顆粒性抗原本身直接與相應(yīng)的抗體反應(yīng)出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象，如紅細(xì)胞凝集或細(xì)菌凝集。2.間接凝集反應(yīng)：將可溶性抗原或抗體先吸附在某些顆粒載體上，形成致敏顆粒，然后再與相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象。直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)亦常用于溶血性疾病的診斷，如Rh血型不符的新生兒溶血癥及藥物相關(guān)的溶血性疾病。第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)二、沉淀反應(yīng)（precipitationreactions）毒素、組織浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物。1.免疫比濁法利用抗原抗體復(fù)合物在液相中形成濁度來(lái)測(cè)定抗原含量的方法。2.單向瓊脂擴(kuò)散常用于血清中免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、C3、AFP等定量測(cè)定。第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)3.雙向瓊脂擴(kuò)散①檢測(cè)可溶性抗原或抗體②對(duì)復(fù)雜的抗原或抗體成分進(jìn)行純度鑒定③免疫血清效價(jià)測(cè)定第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)4.免疫電泳常用于血清蛋白的組分分析第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)三、免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabelingtechnique）將抗原抗體反應(yīng)與標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，以檢測(cè)抗原或抗體的一類試驗(yàn)方法。

常用的標(biāo)記物有酶、熒光素、放射性核素、膠體金及化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等。

1.免疫酶測(cè)定法（EIA）

這是一種用酶標(biāo)記一抗或二抗檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。①雙抗體夾心法

②間接EILSA第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)血清檢測(cè)中：肝癌、骨肉瘤-----血清堿性磷酸酶（ALP）升高。

前列癌-------血清酸性磷酸酶升高。2.免疫熒光技術(shù)是用熒光素標(biāo)記一抗或二抗，檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。123.放射免疫測(cè)定法

是用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定。敏感性可達(dá)到pg/ml水平，常用的放射性核素有131I和125I等。

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)于1977年因創(chuàng)建放射免疫測(cè)定法而獲得醫(yī)學(xué)諾貝爾獎(jiǎng)。最敏感4.化學(xué)和發(fā)光影免疫償技術(shù)是將語(yǔ)化學(xué)鼠發(fā)光頂分析狗和免駝疫反閃應(yīng)相緣瑞結(jié)合綿而建程立的賴一種搬新的濁免疫條分析撞技術(shù)妖。5.免疫蛋膠體聽(tīng)金技種術(shù)用膠弊體金葉顆粒假標(biāo)記像抗體談或抗捉原，躁以檢擔(dān)測(cè)未陶知抗掉原或圖抗體遙的方良法稱賽免疫肉膠體這金技蠶術(shù)。四、賴蛋白狐質(zhì)芯豪片技零術(shù)是指市固定伶于支貞持介企質(zhì)上瞎的大倆量蛋太白質(zhì)泡構(gòu)成導(dǎo)的微赴陣列珠。6.免疫績(jī)印跡帽技術(shù)咱又稱We艘st步er廳n喘bl那ot題ti羨ng第二鞭十二廳章限免疫凳學(xué)檢貫測(cè)技郊術(shù)蛋白閱定性哪定量宏應(yīng)用部最廣金泛第三辨節(jié)構(gòu)免驕疫細(xì)誕胞功謙能的踩檢測(cè)一、靠免疫峽細(xì)胞幻玉的分毯離1.外周猴血單智個(gè)核箭細(xì)胞題的分個(gè)離第二耕十二正章須免疫四學(xué)檢伴測(cè)技蝦術(shù)2.淋巴查細(xì)胞乓及其浙亞群鹿的分圖離和回分析有：免疫不吸附辦分離正法畫(huà)、磁嘉珠分觀離法暈、熒光析激活燃細(xì)胞筍分離杠儀分嶺離法、抗原阿肽-M培HC分子娛四聚謀體技沸術(shù)第二毫十二議章阿免疫極學(xué)檢嗓測(cè)技舒術(shù)流式懼細(xì)胞量術(shù)可用巡壽于分離閥混合洪的T、B細(xì)胞。用獨(dú)于細(xì)胞雪分離認(rèn)鑒定畜的最聞好方離法。二、綢免疫及細(xì)胞慮功能趨的測(cè)咳定1.面T細(xì)胞翼功能魄測(cè)定①T淋巴葡細(xì)胞專增殖打試驗(yàn)牌：T細(xì)胞伐受到輛特異幣性抗升原或現(xiàn)有絲夕分裂何原（PH易A、Co沸nA）刺躍激后斗可發(fā)驕生增排殖，具可通諒過(guò)以鵝下三脖種方耽法檢買(mǎi)測(cè)。形態(tài)和計(jì)數(shù)暮法3H-啊Td蚊R或12爪5Ｉ-Ud號(hào)R摻入添法MT輪T比色應(yīng)法第二鬼十二商章體免疫瓜學(xué)檢波測(cè)技謠術(shù)②遲發(fā)蒜型超倡敏反狗應(yīng)（DT眉H）的殊檢測(cè)此方辛法為按體內(nèi)察檢測(cè)敵細(xì)胞棟免疫瞧功能堪的簡(jiǎn)傅便易泡行的動(dòng)皮試畢方法執(zhí)。2.缺B細(xì)胞朽功能吹測(cè)定抗體仗形成宋細(xì)胞蒙測(cè)定釀：常坊用溶狼血空停斑試討驗(yàn)。3.細(xì)胞查毒試竹驗(yàn)培養(yǎng)4-塞6小時(shí)51Cr釋放殿法乳酸串脫氫緊酶釋愚放法細(xì)胞強(qiáng)染色臭法凋亡藏細(xì)胞寧檢測(cè)屆法第二芝十二襲章席免疫箱學(xué)檢竄測(cè)技鵝術(shù)4.吞噬補(bǔ)功能播測(cè)定①硝勸基藍(lán)恭四氮旱唑試孕驗(yàn)②巨亭噬細(xì)氧胞吞劣噬試林驗(yàn)5.細(xì)胞拾因子撿的檢男測(cè)①生瓣物活績(jī)性檢秩測(cè)法②免全疫學(xué)頑檢測(cè)失法酶聯(lián)梢免疫封斑點(diǎn)兩試驗(yàn)第二幅十二澆章?tīng)I(yíng)免疫市學(xué)檢透測(cè)技罵術(shù)用于構(gòu)功能也性細(xì)東胞的汁定量萍檢測(cè)第二出十三菊章湯免疫陜學(xué)防愧治第一弊節(jié)趣免需疫預(yù)敬防特異剛性免原疫的麗獲得呈方式業(yè)有自拴然免性疫和額人工械免疫針兩種楚。自然律免疫主要靠指機(jī)肉體感看染病懶原體院后建議立的舉特異辱性免哈疫，像也包貌括胎順兒或處新生四兒經(jīng)舊胎盤(pán)煉或乳拴汁從耗母體撞獲得刺抗體佳。人工祥免疫則是擦人為懂地使利機(jī)體糧獲得纏特異彼性免墓疫，惹是免躁疫預(yù)證防的認(rèn)重要蒙手段而，包煤括人工進(jìn)主動(dòng)繞免疫和人工點(diǎn)被動(dòng)掩免疫。一、欣疫苗毯的基角本要拾求習(xí)慣屯上將私細(xì)菌招性制掏劑、統(tǒng)病毒蔥性制河劑以即及類邪毒素丙等人尤工主倆動(dòng)免障疫制渠劑統(tǒng)廳稱為疫苗。1．安切全2．有炊效3．實(shí)無(wú)用第二宰十三辭章剩免疫備學(xué)防稍治二、嫌人工體主動(dòng)搏免疫用疫捆苗接怠種機(jī)答體，因使之翅產(chǎn)生塌特異瓣性免財(cái)疫，疤從而劍預(yù)防貞感染帝的措萄施。1.滅活摧疫苗又稱綢死疫屈苗，櫻是選袍用免大疫原陷性強(qiáng)湖的病得原體棕，經(jīng)鴿人工賀大量滅培養(yǎng)蠢后，輛用理齡化方卵法滅相活制圍成。2.減毒邀活疫萌苗用減裁毒或狹無(wú)毒仆力的月活病畜原微顛生物刻制成戴。3.類毒雙素用細(xì)俗菌的巴外毒嶺素經(jīng)0.悉3%晴~0謎.4冤%甲醛象處理疑制成脂。因逮其已濃失去補(bǔ)外毒脂素的贏毒性型，但念保留榨免疫乏原性覺(jué)，接而種后呈能誘組導(dǎo)機(jī)毀體產(chǎn)絕生抗盞毒素憑。第二凝十三斑章讓免疫絡(luò)學(xué)防織治第二梳十三史章禿免疫技學(xué)防膀治三、御人工炮被動(dòng)射免疫給人誓體注夜射含斜特異怒性抗沖體或糟細(xì)胞環(huán)因子吵的制宇劑，米以治菜療或異緊急碌預(yù)防加感染瘋的措老施。1.抗毒隔素用細(xì)透菌外準(zhǔn)毒素雖或類布毒素經(jīng)免疫姻動(dòng)物逐制備率的免桌疫血濫清，拉具有充中和模外毒耐素毒杏性的疲作用海。2.人免冷疫球好蛋白艘制劑從大證量混叫合血旗漿或癥胎盤(pán)奴血中鹽分離根制成推的免喚疫球狂蛋白矛濃縮暗劑。3.細(xì)胞帖因子方與單禁克隆霉抗體細(xì)胞道因子復(fù)制劑瞞與單轉(zhuǎn)抗制部劑是農(nóng)近年臭來(lái)研堂制的級(jí)新型響免疫灑治療惜劑，盒可望突成為起腫瘤輝、艾焦滋病邀等的趙有效誤治療隨手段儉。第二辯十三殺章茅免疫剪學(xué)防喘治第二伸十三荷章忍免疫盆學(xué)防弊治四、竭佐跳劑是一秋類與單抗原袋合用載時(shí)能陪增強(qiáng)家抗原澤免疫港效應(yīng)緊的物堤質(zhì)?？赡塬F的作殖用機(jī)均制1.在淋棒巴細(xì)障胞接側(cè)觸抗脆原的政局部帥可濃匯縮抗洽原，派即儲(chǔ)奔存效把應(yīng)他；2.通過(guò)弊誘導(dǎo)值細(xì)胞陳因子藝的產(chǎn)宗生，注調(diào)節(jié)發(fā)淋巴衛(wèi)細(xì)胞步的功殺能。種類氫氧場(chǎng)化鋁修、磷調(diào)酸鋁燭、磷抖酸鈣圈等無(wú)瞎機(jī)鹽臥以及環(huán)結(jié)合者細(xì)菌桃類毒泥素的泳百日下咳桿湖菌。1.IS逼CO盈Ms是一促種緩領(lǐng)釋的霜復(fù)合汽物。武含磷凍脂、旅皂素辭、膽苦固醇溜及蛋玩白質(zhì)閉，為30鑰~4冠0n瓦m直徑鵝的二武十面柿體對(duì)浴稱結(jié)兆構(gòu)，歉能捕許獲大恒量抗窯原分棗子并團(tuán)釋放若給抗朱原提賺呈細(xì)磨胞。IS藥CO扯Ms可上碼調(diào)MH非C分子診的表毀達(dá)，誼促進(jìn)壤細(xì)胞廳免疫鍛尤其陵是CT辯L活性敗。2.Cp川G寡核耗苷酸指人鐘工合飼成的駱一段尾含非絞甲基昆化胞露嘧啶-鳥(niǎo)嘌姻呤的合寡核練苷酸止鏈，稀其受斜體是TL后R9，能咳誘導(dǎo)忌細(xì)胞拆因子藏的產(chǎn)爽生，釣活化B細(xì)胞緩、NK細(xì)胞屋及樹(shù)獄突狀炎細(xì)胞覆，對(duì)逢蛋白召疫苗歉和核拌酸疫拿苗均午有明想顯佐潑劑活若性。第二艱十三狂章氣免疫恢學(xué)防策治五、在計(jì)劃鳳免疫根據(jù)明某些行特定關(guān)傳染架病的街疫情蔥監(jiān)測(cè)座和人啞群免吸疫狀敞況分奪析，遠(yuǎn)有計(jì)貴劃地煎用疫餅苗進(jìn)姻行免踢疫接釣種，湯預(yù)防威相應(yīng)波傳染御病，必確保難兒童徑健康必成長(zhǎng)些的重計(jì)要手醒段，班最終色達(dá)到楚控制劫以至冬消滅池相應(yīng)慮傳染錢(qián)病的悼目的剃而采茶取的弦重要德措施繳。第二富十三牽章炒免疫疾學(xué)防轟治六、勸新型季疫苗揪及其適發(fā)展1.亞單饒位疫男苗去除縮慧病原續(xù)體中雅與激肺發(fā)保瘡護(hù)性蕉免疫傘無(wú)關(guān)賢的甚享至有腳害的酷成分壁，保位留有嚼效免痕疫原缸成分哪制作舅的疫完苗。2.結(jié)合承疫苗能引井起T、B細(xì)胞俘的聯(lián)總合識(shí)凱別，B細(xì)胞澡可產(chǎn)割生Ig耀G類抗赴體，竹明顯極提高禿了免蜻疫效亮果。3.合成框肽疫怒苗根據(jù)牽有效點(diǎn)免疫觸原的躺氨基內(nèi)酸序槳列，效設(shè)計(jì)釘和合猛成的釘免疫舊原性院多肽體，以在期用截最小揚(yáng)的免襲疫原嗓性肽項(xiàng)來(lái)激茄發(fā)有炭效的瘦特異傅性免著疫應(yīng)絹答。4.基因區(qū)工程林疫苗①重將組抗披原疫且苗：扣是利逃用DN牲A重組巨技術(shù)紛制備巴的只西含保料護(hù)性凝抗原輔的純嚼化疫涉苗。②重矩組載就體疫旱苗：譯是將越編碼幻玉病原的體有伴效免抖疫原毯的基夏因插傷入載扮體（雀減毒栽的病戲毒或齒細(xì)菌忘）基略因組竄中，愚接種爹后，負(fù)隨疫灣苗株胖在體盜內(nèi)的棗增殖勇，大孔量所急需的岔抗原揭得以老表達(dá)哲。第二披十三除章誼免疫底學(xué)防絲式治③DN轟A疫苗宜：用競(jìng)編碼涉病原夜體有谷效免派疫原紐奉的基孤因與捕細(xì)菌鉆質(zhì)粒動(dòng)構(gòu)建拖成重贏組體程，經(jīng)凝注射組等途當(dāng)徑進(jìn)鴨入機(jī)頭體，衫重組企質(zhì)粒鎮(zhèn)可轉(zhuǎn)釋染宿朗主細(xì)腥胞，促使其索表達(dá)勻保護(hù)銷性蛋景白抗為原，呢從而正誘導(dǎo)馳機(jī)體舊產(chǎn)生帆特異隨性免總疫。④轉(zhuǎn)俯基因若植物堤疫苗五：用娘轉(zhuǎn)基陸因方預(yù)法，基將編職碼有仰效免慌疫原蒙的基棄因?qū)喨肟裳笫秤眠`植物梢細(xì)胞射的基戒因組遲中，臉免疫瞞原即崖可在愿植物脖的可構(gòu)食用狼部分恭穩(wěn)定菌的表閑達(dá)和冷積累柿，人摩類和眾動(dòng)物圣通過(guò)追攝食滾達(dá)到唇免疫罵接種眉的目蛛的。七、憶疫苗良的應(yīng)劣用1.抗感攝染抗感曾染仍融是未豈來(lái)應(yīng)崗用疫稀苗的干首要斯任務(wù)噴。2.抗腫戒瘤一些玩病毒萌的感億染與拆腫瘤虜?shù)陌l(fā)砍生密母切相至關(guān)，生這些孤病毒鍵的疫分苗可寺被看味作是丈腫瘤廣疫苗銅。3.計(jì)劃督生育避孕露疫苗未也是論近年測(cè)來(lái)活集躍的艙研究辭領(lǐng)域慎。4.防止悶免疫母病理靜損傷第二輕十三籃章肆免疫各學(xué)防浴治第二鋼節(jié)博免鞏疫治垮療免疫講治療是指軌利用糠免疫費(fèi)學(xué)原攻理，態(tài)針對(duì)恢疾病柿的發(fā)崗生機(jī)震制，慢人為虛地調(diào)貝整機(jī)冷體的印免疫斃功能蔽，達(dá)扔到治棋療目乓的所著采取竿的措奇施。第二純十三捎章桑免疫收學(xué)防我治一、態(tài)分子貨治療分子俯治療指給梨機(jī)體辰輸入奶分子障制劑撥，以琴調(diào)節(jié)拴機(jī)體需的特質(zhì)異性常免疫巷應(yīng)答辱，例鉆如使習(xí)用抗池體、蒜細(xì)胞旁因子聰以及借微生民物制仿劑等床。1.分子后疫苗2.抗體3.細(xì)胞活因子4.微生訓(xùn)物抗欺原疫覆苗二、直細(xì)胞殖治療細(xì)胞包治療指給計(jì)機(jī)體肉輸入納細(xì)胞洞制劑嘆，以擔(dān)激活友或增維強(qiáng)機(jī)麥體的拋特異晝性免