獸醫(yī)微生物學第十七章支原體

第十七章支原體（Mycoplasma）第一節(jié) 概述支原體（Mycoplasma）又譯作霉形體，是一類無細胞壁的細菌，細胞柔軟，高度多形性，能通過細菌濾器，能在無細胞的人工培養(yǎng)基中生長繁殖，含有DNA和RNA，以二分裂或芽生方式繁殖。在固體培養(yǎng)基上形成特征性的“煎荷包蛋”狀菌落，基因組中核酸G+C mol%比一般細菌低，對青霉素有抵抗力。支原體廣泛分布于污水、土壤、植物、動物和人體中，腐生、共生或寄生，常污染實驗室的細胞培養(yǎng)及生物制品，有30多種對人或畜禽有致病性。支原體的煎荷包蛋狀菌落支原體在分類上歸為柔膜體綱，下設(shè)4目、7科、11個屬。獸醫(yī)學研究的主要對象為支原體屬(Mycoplasma)及脲原體屬(Ureaplasma)的成員。1700年發(fā)現(xiàn)牛傳染性胸膜肺炎的病原，1898年Nocard等用無細胞人工培養(yǎng)基分離培養(yǎng)成功，稱胸膜肺炎微生物。其后不斷從人體、各種動物、昆蟲、植物、土壤及污水中分離到相似的微生物，統(tǒng)稱為類胸膜肺炎微生物。1956年正式命名為Mycoplasma，并沿用至今。由于支原體細胞外圍只有柔軟的胞漿膜，故具有多形性、可塑性和濾過性。常呈球狀、兩極狀環(huán)狀、桿狀，有些偶見分枝絲狀。球形細胞直徑

0.3～0.8μm，絲狀細胞大小0.3～0.4μm×2～150μm不等。在加壓情況下，能通過孔徑450～220nm的濾膜。無鞭毛，有些能滑動。革蘭氏染色呈陰性，通常著色不良，用姬姆薩或瑞氏染色良好，呈淡紫色。形態(tài)及染色特性姬姆薩染色革蘭氏染色培養(yǎng)特性支原體的核質(zhì)與細菌一樣，是一個環(huán)形雙股

DNA，但分子量比細菌小，僅有大腸桿菌的

1/5，生物合成能力較弱，營養(yǎng)要求較高，培養(yǎng)支原體的人工培養(yǎng)基中需要添加外源脂肪酸和淄醇。為抑制細菌生長，常加入青霉素、醋酸坨、疊氮鈉等藥物。多數(shù)在有氧條件下生長良好，但用固體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)時，在5%CO2和95%N2的環(huán)境中，生長為佳，瓊脂濃度則以1%～1.5%為宜。適合生長的pH7.0～8.0，脲原體屬較低，pH6.0士0.5，適宜溫度為36℃。支原體生長緩慢，在瓊脂培養(yǎng)基上孵育2～6d，才長出必須用低倍顯微鏡才能觀察到的微小菌落，直徑從10～600μm不等，圓形、透明、露滴狀，溶脲脲原體的菌落僅l0～40μm，故稱"T”株。支原體的典型菌落呈

"煎荷包蛋狀"，菌落中心深入培養(yǎng)基中、至密、色暗，周圍長在培養(yǎng)基表面、較透明。豬肺炎支原體和肺支原體等的菌落則不典型，無中心生長點。支原體的“煎蛋樣”菌落支原體在液體培養(yǎng)基中生長數(shù)量較少，不易見到渾濁，有時見到小顆粒黏于管壁或沉管底?？稍陔u胚的卵黃囊或絨毛尿囊膜上生長，有些菌株可致雞胚死亡。也能在細胞培養(yǎng)中生長，不一定引起細胞病變，但可妨礙病毒的細胞培養(yǎng)。支原體與細菌L型的主要區(qū)別支原體為：1、發(fā)生在自然界的固有生命形態(tài);2、在無抗生素等誘導物的培養(yǎng)基中生長無返祖現(xiàn)象;3、生長需要甾醇;4、抗體能抑制生長;5、DNA中G+C

mol%低于細菌;6、對洋地黃苷的溶解作用敏感。細菌L型為：1、細菌變異形態(tài)，常常是實驗室形成的（與人為因素有關(guān)）；2、去除誘導物時易返祖成母菌形態(tài);3、一般不需要甾醇;4、抗體不能抑制生長;5、DNA中G+C

mol%與細菌相同;6、對洋地黃苷的溶解作用有抵抗力。生理生化特性一般根據(jù)對糖類分解利用能力不同，分為兩群。一群能分解葡萄糖及其他多種糖類產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，稱發(fā)酵型；另一群不能分解糖，稱為非發(fā)酵型，但能利用精氨酸作為碳素和能量來源。僅有少

數(shù)幾種支原體例外，二者兼而有之，或均不能

利用。某些糖發(fā)酵株能產(chǎn)生H2O2，在含血液的

培養(yǎng)基中其菌落周圍可形成B型或a型溶血。少

數(shù)株能液化明膠、消化凝固血清或酪蛋白?？乖Y(jié)構(gòu)抗原結(jié)構(gòu)：細胞膜上的蛋白質(zhì)和糖脂各型交叉少補體結(jié)合試驗：糖脂

ELISA試驗：蛋白質(zhì)生長抑制試驗（GIT）代謝抑制試驗（MIT） 血清抗體抵抗力比細菌敏感，易被消毒劑滅活對醋酸鉈、結(jié)晶紫抵抗力強對青霉素等耐藥對干擾蛋白質(zhì)合成的抗生素敏感致病性與免疫性病原性支原體常常定居于多種動物呼吸道、泌尿生殖道、消化道黏膜表面、乳腺及眼

等，并對胸腺、腹膜、關(guān)節(jié)滑液囊膜的間

質(zhì)細胞以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的親和力較強。

主要營寄生生活，部分營腐生生活，單獨

感染時常常是癥狀輕微或無臨床表現(xiàn)，當

細菌或病毒等繼發(fā)感染或受外界不利因素

的作用，引起疾病。特點是潛伏期長，呈慢性經(jīng)過，地方性流行，多具有種的特性。除實驗動物的支原體外，一般不引起實驗動物病變。致豬疾病的支原體主要有豬肺炎支原體等3種，致禽疾病有禽敗血支原體、滑液囊支原體等3種，致牛、羊疾病的分別有8和7種。喘氣病豬呼吸困難喘氣病豬肺臟實變免疫力：動物自然發(fā)生支原體病后具有免疫力，很少發(fā)生再次感染，例如豬發(fā)生支原體肺炎后保護期至少60周，牛患傳染性胸膜肺炎以后免疫保護達12～30個月。支原體感染后，機體主要引起體液免疫應答，可產(chǎn)生IgM、IgG和IgA。支原體的疫苗研究比較困難。微生物學診斷支原體形態(tài)多樣，直接鏡檢意義不大，應取病料進行分離培養(yǎng)和形態(tài)學、生理生化及血清學鑒定。將無菌病料用液體培養(yǎng)基稀釋成乳劑，再10倍倍比稀釋至10-5～10-6，37℃培養(yǎng)2～7d。污染的病料可過濾除菌后接種。初代培養(yǎng)末發(fā)生顏色變化時可盲目傳代2～3次。多種支原體初代分離時在含有

5%～10%CO2或5%CO2加95%N2的環(huán)境中生長更佳。固體培養(yǎng)基接種后必須置于高濕環(huán)境培養(yǎng)。新分離菌株在鑒定前必須先進行細菌L型鑒定和2～3次克隆、純化。1

分離培養(yǎng)：先作毛地黃苷敏感性測定，以確定分離物是支原體或無膽淄原體，再作葡萄糖、精氨酸分解試驗將其分為發(fā)酵葡萄糖和水解精氨酸兩類，以縮小選用抗血清的范圍。但種的鑒定必須用血清學方法最后確定，這與細菌鑒定到種只需作生理生化測定不同。2

生理生化性狀測定血清學試驗方法中特異性較強、敏感性較高、應用較多的是生長抑制試驗和代謝抑制試驗以及表面免疫熒光試驗。生長抑制試驗(GIT)支原體在固體培養(yǎng)基上生長可被相應的抗血清所抑制，常用圓紙片法。在接種被檢支原體的平板培養(yǎng)基上，貼上含已知抗血清的圓紙片，培養(yǎng)后觀察圓紙片周圍有無菌落抑制圈的產(chǎn)生。抑制寬度達2mm以上時為同種，無抑制圈為異種。3血清學鑒定支原體的代謝活性可被相應的抗血清所抑制。常用的有發(fā)酵抑制試驗(FIT)、精氨酸代謝抑制試驗(AIT)以及脲酶代謝抑制試驗。FIT是將支原體接種于含葡萄活性是否被抑制。可根據(jù)指示劑色調(diào)變化判定葡萄糖分解的抑制程度。AIT是將支原體接種于含精氨酸加指示劑的液體培養(yǎng)基中，能分解精氨酸使培養(yǎng)基變堿者，可因加入相應的抗血清所抑制。代謝抑制試驗(MIT)用已知抗血清制成熒光抗體，直接染色瓊脂塊上的支原體菌落，在入射式光源熒光顯微鏡下觀察菌落的特異性熒光。也可用抗血清與菌落反應后再用熒光標記的抗抗體染色。此法特異性和敏感性與KIT法一樣，但簡單、省時。表面免疫熒光法(epi-IF)上述3種血清學方法是國際細菌分類委員會支原體分類分會推薦使用的標準方法。近年來研究應用PCR技術(shù)進行支原體的檢測，例如以特異性引物擴增脲酶基因。第二節(jié)豬的支原體對豬致病性的有豬肺炎支原體、豬鼻支原體和豬滑液支原體。豬肺炎支原體（M. hyopneumomiae）可引起豬地方流行性肺炎（豬喘氣病）。豬鼻支原體（M. hyorhinis）可引起豬的肺炎、伴發(fā)多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎。豬滑液支原體（M.

hyosynoviae）可引起豬的急性滑膜炎和關(guān)節(jié)炎。支原體引起的豬喘氣病癥狀及病理變化支原體引起的豬關(guān)節(jié)炎癥狀及病理變化第三節(jié)禽的支原體對禽致病性的有雞毒支原體、火雞支原體和滑液囊支原體。雞毒支原體（M.gallispticum）可引起呼吸道癥狀為主的慢性呼吸道?。?/p>

chronicrespiratory

disease,CRD）?；耗抑гw（M. synoviae）可引起雞和火雞的傳染性滑液囊炎。二者均可垂直傳播。特

征咳嗽、流鼻液、呼吸道羅音和張口呼吸。疾病發(fā)展緩慢，病程長；成年雞多為隱性感染，可在雞群長期存在和蔓延。雞毒支原體（M.

gallispticum）Mycopulasma

synoviae滑液囊支原體防

制目前認為泰樂菌素、壯觀霉素、鏈霉素和紅霉素對本病有相當療效?？股刂委煏r，停藥后往往復發(fā)，因此應考慮幾種藥輪換使用。國內(nèi)已研制出有效菌苗，對雞滴鼻免疫后，安全有效，能抵抗強毒敗血支原體的侵害。第四節(jié)牛羊的支原體對牛羊致病性的支原體主要是絲狀支原體（M.mycoides

cluster）。絲狀支原體絲狀亞種（M.mycoides

ssp.Mycoides，

Mmm

）

可引起牛肺疫（牛傳染性胸膜肺炎，

CBPP）、關(guān)節(jié)炎、乳腺炎，對羊不致病。絲狀支原體山羊亞種（M.mycoides

ssp.Capri，Mmc）可引起山羊呼吸系統(tǒng)疾病。山羊支原體（M.capricolum）肺炎亞種可引起山羊的傳染性胸膜肺炎（CCPP）；山羊亞種引起綿羊和山羊的肺炎、乳腺炎和關(guān)節(jié)炎。牛肺疫的癥狀及病理變化我國消滅牛肺疫的歷程1949年后，我國通過采取免疫、隔離、撲殺等綜合

性防控措施，有效地控制了牛肺疫疫情。1996年我國自行宣布消滅牛肺疫。2008年9月，我國向OIE正式提交中國無牛肺疫認證申請報告，此后又兩次補充材料回答OIE方面的技術(shù)質(zhì)疑。2010年11月，OIE專家來華對我國牛肺疫消滅情況進行實地考察，全面評估了我國牛肺疫監(jiān)測能力，核查了牛肺疫監(jiān)測控制工作的規(guī)范性。2011年5月24日，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）第79屆年會通過決議，認可我國為無牛傳染性胸膜肺炎（簡稱

“牛肺疫”）國家。此前，全世界只有美國、澳大利亞、瑞士、葡萄牙、博茨瓦納和印度等6個國家獲得了OIE無牛肺疫國家認證。第五節(jié)嗜血支原體包括原來的嗜血巴通體（Haemobartonella）和附紅細胞體（Eperythrozoon）

，原歸于立克次體，現(xiàn)分別歸屬于嗜血支原體的I群和II群。嗜血支原體I群包括犬血支原體、貓血支原體、鼠血支原體、類球狀支原體等，可引起相應宿主的傳染性貧血、免疫抑制，又稱血巴通體病。嗜血支原體II群包括豬支原體、溫氏支原體、綿羊支原體等，可引起相應宿主的傳染性貧血、免疫抑制，又稱