生物堿類成分分析

關于生物堿類成分分析第1頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室1.薄層板的制備2.黃連藥材的鑒別：2.1對照品溶液的制備：小檗堿作為對照品，制備小檗堿甲醇對照品溶液；2.2黃連對照藥材溶液的制備：甲醇回流提取2.3供試品溶液的制備：甲醇浸漬提取2.4點樣及展開：按照薄層色譜法試驗，在同一薄層板上進行2.5檢視：供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點第2頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室1.藥味及活性成分的選擇黃連君藥小檗堿主要活性成分2.供試品溶液的制備：提取、純化（液－液萃取法）制備供試品溶液3.對照品溶液的制備：精密稱取干燥至恒重的小檗堿對照品溶液，溶于甲醇即得對照品溶液4.固定相即色譜柱的選擇：采用ODS柱5.流動相的選擇：部分含水溶劑，水用超純水，有機溶劑采用色譜純?nèi)軇?，并?.45um過濾膜過濾6.洗脫方式的選擇1.如何建立一清顆粒定含量測定分析方法？敘述實驗步驟及注意事項。第3頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室7.檢測器的選擇：UVD8.定量分析8.1方法學考察：專屬性，線性關系和范圍，精密度試驗，重現(xiàn)性試驗，穩(wěn)定性試驗8.2含量測定：第4頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第五章中藥制劑中各類化學成分分析第一節(jié)生物堿類成分分析第5頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室大綱要求熟悉生物堿類成分結構特征及理化性質(zhì)掌握生物堿類制劑定性鑒別常用方法掌握生物堿類制劑定量分析常用方法第6頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室問題生物堿類成分的理化性質(zhì)？含生物堿類成分的中藥制劑制備供試品時需考慮的問題？含生物堿類成分中藥制劑定性鑒別，以硅膠為載體時，展開系統(tǒng)需注意的問題？HPLC法分析制劑中單體生物堿的含量時，改進流動相的常用方法？第7頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室概述定義

生物堿是生物界除生物體必須的含氮化合物（如氨基酸、蛋白質(zhì)和B族微生素等）之外的所有含氮有機化合物，因其結構中氮原子上的未共享電子對而大多具有堿性。絕大多數(shù)具有顯著的生理活性中藥材中生物堿多和植物酸性成分結合成鹽的狀態(tài)存在第8頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室結構特征及理化性質(zhì)結構特征

CHON理化性質(zhì)物理性狀：結晶性固體；液體、小分子固體（揮發(fā)性、升華性），多無色溶解性：多樣性沉淀反應：生物堿沉淀試劑，定性（蛋白質(zhì)、多肽、鞣質(zhì)，避免假陽性）顯色反應：純品，少用于制劑中生物堿分析堿性：多呈堿性，堿性強成鹽弱游離，供試品制備及分析方法建立及條件選擇的依據(jù)紫外光譜特征：共軛體系，紫外吸收大多數(shù)生物堿在酸性水溶液中可以與某些試劑生成不溶于水的復鹽或分子復合物，這類試劑第9頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室定性鑒別一般理化鑒別沉淀反應多用：酸性條件，凈化處理（除蛋白質(zhì)、多肽、鞣質(zhì)），制劑中兩種以上含生物堿藥材（難說明問題）第10頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室馬錢子主含生物堿。以番木鱉堿(士的寧)與馬錢子堿(布魯生)為主,主效成分及毒性成分。生物堿以鹽的形式存在，加濃氨水使生物堿鹽轉(zhuǎn)變成游離堿，易溶于氯仿有機溶劑。地龍含較多多肽、蛋白質(zhì)等，不溶于有機溶劑。第11頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室定性鑒別色譜鑒別1.TLC法：常用載體：硅膠常用展開劑：氯仿、苯及相應極性調(diào)節(jié)劑硅膠弱酸性，形成鹽至Rf值小、拖尾、復斑，堿性展開系統(tǒng)or堿性條件下顯色劑：改良碘化鉍鉀（橘紅色）供試品的制備：處方、劑型、存在狀態(tài)、溶解性、共存成分的性質(zhì)第12頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第13頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第14頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室固體劑型——回流提取第15頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第16頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室液體劑型——液液萃取第17頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第18頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室固體劑型——大蜜丸第19頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第20頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室定性鑒別色譜鑒別2.紙色譜法：顯色：含硫酸的試劑不可3.HPLC法：快速、靈敏、微量Rt值法，峰面積or峰高加大法（用內(nèi)標）第21頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定反映中藥制劑中含生物堿的真實情況提取、凈化、分析測定均要準確方法學考察內(nèi)容1.提取凈化條件的考察2.測定方法與條件的選擇3.定量分析方法驗證3.1專屬性3.2線性關系考察3.3精密度試驗3.4準確度試驗3.5穩(wěn)定性試驗3.6測靈敏度及檢測限的測定第22頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定總生物堿含量測定化學分析法范圍：處方藥味少，內(nèi)含成分簡單的中藥制劑酸堿滴定法：生物堿堿性強弱，水/非溶液酸堿滴定法重量法：提取生物堿成沉淀or加生物堿沉淀試劑第23頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第24頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室酸堿滴定法第25頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第26頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第27頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第28頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第29頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室重量法溶液后標示的“（1－10）”等符號，系指固體溶質(zhì)1.0g或液體溶質(zhì)1.0ml加溶劑使成10ml的溶液；未指明用何種溶劑時，均系指水溶液；第30頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定分光光度法樣品分離、凈化（化學法、柱色譜法、TLC法等）直接測定法：不經(jīng)過化學反應用生物堿物質(zhì)自身的吸收波長范圍：藥物少，內(nèi)含成分簡單的中藥制劑離子對萃取比色法第31頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第32頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法：直接測定法2010版藥典：HPLC定量黃連、炒白芍第33頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第34頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法：直接測定法2010版藥典：HPLC定量黃連第35頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法離子對萃取比色法范圍：中藥制劑中微量生物堿的含量測定原理：一定PH介質(zhì)中，有機堿與一些酸性染料或磺酸類、酸類的陰離子，定量結合為有色離子對，離子對定量溶于某些有機溶劑，一定波長下測定有機溶劑的或堿化后釋放出的染料的吸收度，按分光光度法計算有機堿的含量。常用方法：酸性染料比色法和苦味酸鹽比色法第36頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法酸性染料比色法適當PH介質(zhì)中，生物堿可與氫離子結合成生物堿鹽的陽離子，而酸性染料在此條件下解離為陰離子，生物堿鹽的陽離子與染料陰離子定量地結合成有色的配合物（即離子對），此離子對可定量地溶于某些有機溶劑，測定有機溶劑的吸收度or經(jīng)堿化后釋放出的染料的吸收度，即可計算生物堿的含量。第37頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法酸性染料比色法關鍵：介質(zhì)的PH、酸性染料的種類、有機溶劑pH值的選擇：染料的性質(zhì)及生物堿的堿性，生物堿一元堿與溴百里酚藍形成1：1的離子對，pH(5.2~6.4)，二元堿形成1：2的離子對，pH(3.0~5.8)常用染料：溴百里酚藍、溴甲酚綠、溴酚藍、溴甲酚紫第38頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法酸性染料比色法有機溶劑的選擇：根據(jù)離子對與有機相能否形成氫鍵以及形成氫堿能力的強弱，氯仿、二氯甲烷與離子對形成氫鍵，有中等程度的萃取率，選擇性好，是常用的提取溶劑有機相中的水份的影響：微量水分使氯仿發(fā)生渾濁，且水相中的過量染料影響測定結果。有機溶劑提取液可加脫水劑或經(jīng)干燥濾紙濾過除去水分。第39頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室2010版烏頭總生物堿+麻黃HPLC定量第40頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第41頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室酸性染料分光光度法水相pH的選擇是分別取烏頭堿標準液，以不同pH的緩沖液進行試驗，pH3.0較好。該條件下，吸收度較大，指示液空白對照吸收度較小，呈色穩(wěn)定性好第42頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法雷氏鹽比色法雷氏鹽（雷氏銨or硫氰酸鉻銨）：微溶于冷水，易溶熱水，可溶于乙醇雷氏鹽酸性介質(zhì)中可與生物堿類成分定量地生成難溶于水的有色配合物，生物堿雷氏鹽沉淀易溶于丙酮，其丙酮溶液呈現(xiàn)的吸收特征是由于分子結構中硫氰酸鉻銨部分，而非生物堿部分。第43頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法雷氏鹽比色法I將此沉淀過濾洗凈后溶于丙酮/甲醇直接比色測定，換算生物堿的含量；II精密加入過量雷氏鹽試劑，濾除生產(chǎn)的生物堿雷氏鹽沉淀，用濾液進行比色測定殘存的過量雷氏鹽含量，間接計算生物堿的含量（雷氏鹽剩余比色法）。第44頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室分光光度法雷氏鹽比色法注意事項：1.雷氏鹽的水溶液室溫可分解，應新鮮配制，沉淀需在低溫進行2.中藥制劑應先純化處理3.雷氏鹽的丙酮or丙酮－水溶液吸收值，隨時間有變化，應盡快測定第45頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第46頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室超聲處理：不同功率、頻率超聲提取儀對含量測定的結果不同在同一提取器內(nèi)由于擺放部位不同提取效果也不一致。第47頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定單體生物堿的含量測定TLCHPLCGC第48頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定單體生物堿的含量測定TLC法：樣品需純化，吸附劑、展開劑及顯色與鑒別相似，要求更嚴格第49頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室3

第50頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室3

第51頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室2010版藥典：HPLC法定量黃連第52頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第53頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定HPLC法：反相HPLC法應用多（ODSorC18)硅醇基酸性大，生物堿可與其牢固鍵合，保留時間延長，峰形變寬，拖尾，克服措施：改進流動相改進固定相第54頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定HPLC法：改進流動相：①流動相中加入硅醇基抑制劑，競爭或部分阻斷硅醇劑的影響，最常用硅醇基抑制劑是二乙胺、三乙胺（TEA)等。②采用離子對色譜系統(tǒng)：合適的pH下，流動相中加入低濃度離子對試劑，通過與生物堿類成分生成離子對而掩蔽其堿性基團。常用離子對試劑：辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉。注意：清洗柱子，避免過夜，保證色譜柱的壽命。第55頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定HPLC法：改進流動相：③流動相中加入季銨鹽試劑，掩蔽固定相表面的硅醇基，如在水－甲醇中加入0.01mol/L的溴化四甲基胺。④流動相中加入電解質(zhì)緩沖鹽，通過改變流動相離子強度，穩(wěn)定pH值及促進離子對相互作用，起到改善峰形及分離效果的作用。第56頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第57頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室流動相+電介質(zhì)緩沖鹽第58頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第59頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室流動相+電介質(zhì)緩沖鹽第60頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第61頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第62頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室流動相+離子對試劑第63頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第64頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第65頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第66頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第67頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第68頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第69頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第70頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第71頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第72頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第73頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第74頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第75頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室含量測定GC法范圍：有揮發(fā)性，遇熱不分解的生物堿類（藥典未收載），如麻黃堿、檳榔堿、苦參堿、顛茄類生物堿等。第76頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第77頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第78頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第79頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室第80頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室常見生物堿類成分的中英文對照小檗堿：berberine士的寧：strychnine烏頭堿：aconitine苦參堿：matrine甜菜堿：betaine麻黃堿：ephrine水蘇堿：stachydrine吳茱萸堿：evodiamine第81頁，講稿共88頁，2023年5月2日，星期三中藥制劑教研室思考題小兒清熱片質(zhì)量分析方案設計，請設計本品定性鑒別、檢查及含量測定分析方案。定性鑒別：對照品、對照藥材、鑒別方法（要不少于5味藥材）檢查：片劑的檢查內(nèi)容含量測定：所測成分、提取凈化方法、測定方法、含量測定方法學考察內(nèi)容第82頁，講稿共88頁，2023年5月2日，