細(xì)胞培養(yǎng)-緒論

細(xì)胞培養(yǎng)第一頁，共五十五頁。精選ppt第一章緒論

第二頁，共五十五頁。精選ppt

細(xì)胞是一切生命現(xiàn)象的基石和載體，事實上人體諸多的奧秘，包括生理的和病理的都是從細(xì)胞的活動中揭示出來。細(xì)胞的信息傳遞、代謝、增殖、遺傳、變異、分化、疾病、衰老和死亡等無一不是整個機(jī)體生命過程的反映，甚至是縮影。細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)和細(xì)胞學(xué)的創(chuàng)立(chuànglì)是“十九世紀(jì)三大發(fā)現(xiàn)之一”；“每一個生物學(xué)問題的關(guān)鍵最終必然從細(xì)胞中去尋找”。研究細(xì)胞有多種方式、多條途徑以及不同層次，但最重要的是對單個或群體細(xì)胞的觀察與分析。其中細(xì)胞培養(yǎng)幾乎可以最直接、最簡單和最準(zhǔn)確地反第三頁，共五十五頁。精選ppt映生命的各種活動規(guī)律，以及部分地提供在機(jī)體中發(fā)生的各種信息。細(xì)胞培養(yǎng)是一門技術(shù)，包含有諸多方面的知識，涉及細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、動物學(xué)與植物學(xué)、病原學(xué)、遺傳學(xué)、腫瘤學(xué)、生物工程學(xué)甚至光學(xué)、物理學(xué)等學(xué)科，因此學(xué)習(xí)細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)有一定的其他(qítā)學(xué)科的知識，操作時刻不忘“無菌”概念。

第四頁，共五十五頁。精選ppt一、體外培養(yǎng)的概念體外培養(yǎng)技術(shù)是一門以模擬體內(nèi)生長條件為基礎(chǔ)而建立的“活體(huótǐ)”實驗技術(shù)。其相對于體內(nèi)試驗，具有能夠簡化細(xì)胞生長環(huán)境、明確生長條件、便于施加實驗因素、容易獲得活體(huótǐ)直接觀測結(jié)果以及方便控制培養(yǎng)產(chǎn)物等優(yōu)點。第五頁，共五十五頁。精選ppt

體外培養(yǎng)(invitroculture)：是將活體結(jié)構(gòu)成分(如活體組織、活體細(xì)胞或活體器官(qìguān)等)甚或活的個體從體內(nèi)或其寄生體內(nèi)取出，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下使之存活和生長發(fā)育的方法。按照體外培養(yǎng)的結(jié)構(gòu)成分，可將體外培養(yǎng)人為分為：組織培養(yǎng)(tissueculture)細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)器官培養(yǎng)(organculture)第六頁，共五十五頁。精選ppt組織培養(yǎng):指從生物體內(nèi)取出活的組織(多指組織塊）在體外進(jìn)行培養(yǎng)的方法。組織培養(yǎng)的對象在體外可以發(fā)生分化并保持組織的結(jié)構(gòu)和功能，但不具備器官的結(jié)構(gòu)和功能特點。細(xì)胞培養(yǎng)：指將活細(xì)胞(尤其(yóuqí)是分散的細(xì)胞)在體外進(jìn)行培養(yǎng)的方法。細(xì)胞培養(yǎng)強(qiáng)調(diào)在培養(yǎng)過程中分散的細(xì)胞不在形成組織。包括單細(xì)胞的培養(yǎng)、細(xì)胞克隆化培養(yǎng)。器官培養(yǎng)：指從生物體內(nèi)取出活的器官(一般是胚胎器官)

、器官的一部分在體外進(jìn)行培養(yǎng)的方法。器官培養(yǎng)的對象在體外環(huán)境下也可能發(fā)生一定程度的分化，但始終保持器官的基本結(jié)構(gòu)和功能特征。事實上，三種培養(yǎng)方法沒有截然的界限。第七頁，共五十五頁。精選ppt第八頁，共五十五頁。精選ppt

組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)組織不能在體外長期維持(wéichí)其結(jié)構(gòu)和功能，培養(yǎng)的時間長，經(jīng)過反復(fù)傳代，細(xì)胞出現(xiàn)單一化現(xiàn)象——趨向單一類型的細(xì)胞——最終成為細(xì)胞培養(yǎng)。同樣細(xì)胞在體外培養(yǎng)時也是相互依存的，而不是各自為政，表現(xiàn)為一定的“組織”特征，故組織培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)實為同義詞。是否有體內(nèi)培養(yǎng)(invivoculture)？第九頁，共五十五頁。精選ppt

體內(nèi)培養(yǎng)(invivoculture)：將活體結(jié)構(gòu)成分(如活體組織、活體細(xì)胞、活體器官等)甚至(shènzhì)活的個體從體內(nèi)或其寄生體內(nèi)取出，放在其他生物體內(nèi)讓其生長和發(fā)育的方法。最常見的體內(nèi)培養(yǎng)方式就是移植(trans-Plantation)。第十頁，共五十五頁。精選ppt二、體外培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展歷史

19世紀(jì)(shìjì)后葉實驗胚胎學(xué)的興起拉開了體外培養(yǎng)技術(shù)的序幕，一些著名實驗如下：

●1859年，法國解剖學(xué)家Vulpain最早嘗試將蛙胚尾部組織切下，放到普通水內(nèi)進(jìn)行“培養(yǎng)”，結(jié)果觀察到了生長和分化現(xiàn)象。

●1885年，德國人Roux用溫?zé)岬纳睇}水在體外使雞胚髓板組織存活了數(shù)天，被認(rèn)為是體外培養(yǎng)的萌芽實驗，他首次提出組織培養(yǎng)這一概念。

●1887年，Arnold將赤楊髓質(zhì)小片在蛙的體液中浸過，然后將木片分別種植到蛙的皮下或腹腔內(nèi)，木片被白細(xì)胞浸潤后，于種植后不同時間將木片取出并置于溫鹽水中，觀察到有白細(xì)胞從木片遷移到鹽水中，且能短期存活。

第十一頁，共五十五頁。精選ppt

●1897年，Loeb首次在含有少量血漿凝塊的試管中培養(yǎng)成年兔的肝、腎、甲狀腺與卵巢植塊，發(fā)現(xiàn)這些(zhèxiē)植塊在3d內(nèi)仍能保持正常的組織學(xué)結(jié)構(gòu)。被認(rèn)為是器官培養(yǎng)的最早嘗試。

●1903年，Jolly用懸滴法將蠑螈的白細(xì)胞在體外維持存活了近一個月時間。

●1906年，Beebe和Ewing以蓋片懸滴培養(yǎng)法用動物血清培養(yǎng)狗的淋巴肉瘤細(xì)胞在體外存活了約72h.

第十二頁，共五十五頁。精選ppt（一）體外培養(yǎng)技術(shù)的創(chuàng)立●1907年，實驗胚胎學(xué)家RHarrison在研究神經(jīng)突起的起源時進(jìn)行了一項著名的體外培養(yǎng)實驗：

實驗對象：蛙胚髓管部的小片組織

營養(yǎng)成分：蛙的淋巴液

實驗方法(fāngfǎ)：蓋玻片覆蓋凹窩懸滴培養(yǎng)法

實驗結(jié)果：將蛙胚髓管部的小片組織在體外培養(yǎng)了數(shù)周之久，并觀察到有神經(jīng)突起從種植的神經(jīng)組織塊長出。

貢獻(xiàn)：Harrison的工作較為完善地建立了體外培養(yǎng)活體組織的培養(yǎng)體系，第一次較為系統(tǒng)地觀察了體外培養(yǎng)活體組織的結(jié)果。被公認(rèn)為是體外培養(yǎng)技術(shù)的開始，標(biāo)志著體外培養(yǎng)技術(shù)的創(chuàng)立，標(biāo)志著蓋玻片懸滴培養(yǎng)法的建立，標(biāo)志著神經(jīng)組織體外培養(yǎng)的開始，也標(biāo)志著神經(jīng)突起是由神經(jīng)細(xì)胞長出的這一重大理論的誕生。

第十三頁，共五十五頁。精選ppt第十四頁，共五十五頁。精選ppt

●

1910年，ACarrel在沒有抗生素的情況下，僅靠小心細(xì)致的無菌操作，連續(xù)培養(yǎng)雞胚心臟植塊長達(dá)數(shù)年之久。Carrel對體外培養(yǎng)的貢獻(xiàn)：

◆將無菌操作觀念引入體外培養(yǎng)過程中。

◆將培養(yǎng)組織包埋技術(shù)、營養(yǎng)供應(yīng)以及繼續(xù)培養(yǎng)(也稱傳代或繼代(jìdài)培養(yǎng))等許多重要的培養(yǎng)條件和方法引入蓋玻片懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)，從而完善了Harrison的方法。

◆發(fā)現(xiàn)雞胚浸液能明顯地促進(jìn)多種細(xì)胞的體外生長。

◆設(shè)計卡氏培養(yǎng)瓶減少了污染，擴(kuò)大了細(xì)胞生存空間。第十五頁，共五十五頁。精選ppt

1910年，美國醫(yī)生MTBurrows對懸滴培養(yǎng)法的改進(jìn):

①用血漿凝塊替代蛙淋巴凝塊包埋要培養(yǎng)的組織，延長了組織在體外存活的時間。

②與Carrel合作，致力于發(fā)展哺乳動物組織的培養(yǎng)，證明體外培養(yǎng)細(xì)胞的壽命可以因傳代而延長。

③胚胎浸液與血漿混合使用，培養(yǎng)物可以活的更好。通過Carrel等學(xué)者的工作，使得體外連續(xù)營養(yǎng)供應(yīng)和傳代成為可能?，F(xiàn)在一般認(rèn)為(rènwéi)體外培養(yǎng)技術(shù)是從Harrison和Carrel真正開始的。

第十六頁，共五十五頁。精選ppt●1925年，Maximov對懸滴培養(yǎng)法作了改進(jìn)，創(chuàng)造了“雙蓋玻片法”，可以更好地防止污染，也更適用于神經(jīng)組織的培養(yǎng)?！駜晌幻绹茖W(xué)家W.H.Lewis和M.R.Lewis最先試用已知成分的合成培養(yǎng)基取代(qǔdài)不能準(zhǔn)確確定其成分的天然培養(yǎng)基，由于他們和其它許多科學(xué)家在此后30多年的努力，最終發(fā)展出許多合成培養(yǎng)基。●劍橋大學(xué)Strangeways實驗室的HonorFell完善了組織和器官，乃至整個胚胎的體外培養(yǎng)方法(表玻皿器官培養(yǎng)法)。借此保持它們正常的組織學(xué)結(jié)構(gòu)，并防止從外植物新長出的細(xì)胞生長紊亂。Fell及其同事使用此技術(shù)培養(yǎng)骨和關(guān)節(jié)組織，為我們提供了大量有關(guān)這些組織發(fā)育的知識。第十七頁，共五十五頁。精選ppt（二）體外培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展發(fā)展主要包括：探討體外培養(yǎng)的營養(yǎng)條件試圖(shìtú)建立化學(xué)成分明確的人工合成培養(yǎng)基配方以代替成分不明確的天然物質(zhì)。最終導(dǎo)致人工合成培養(yǎng)基的誕生。試圖培養(yǎng)不同類別的生物體組織細(xì)胞1913年，Steinhard以血漿凝塊懸滴培養(yǎng)法分離培養(yǎng)痘苗病毒，為體外培養(yǎng)技術(shù)在病毒學(xué)上的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。1915年，Goldschmidt最早進(jìn)行無脊椎動物組織的體外培養(yǎng)，成功培養(yǎng)了鱗翅目昆蟲組織。建立不同的培養(yǎng)技術(shù)第十八頁，共五十五頁。精選ppt發(fā)展時期：以20世紀(jì)50年代為界分為三個時期50年代前是培養(yǎng)技術(shù)在多個(duōɡè)領(lǐng)域廣泛發(fā)展的時期1933年，GOGey創(chuàng)立了旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法，并以此建立了許多細(xì)胞系。如1951年Gey等以腫瘤組織為材料成功建立了Hela細(xì)胞系。1948年，KKSanford創(chuàng)立了分離細(xì)胞培養(yǎng)法，第一次成功地從單層細(xì)胞分離出單個細(xì)胞，使得建立遺傳性狀相同的細(xì)胞株成為可能。1949年，Polge等發(fā)現(xiàn)了甘油能夠用于保護(hù)低溫下貯存的細(xì)胞。第十九頁，共五十五頁。精選ppt50年代是培養(yǎng)技術(shù)迅猛發(fā)展時期，多種培養(yǎng)技術(shù)相繼被建立1950年，JFMorgan等提出199配方。1951年，JEShannon和Earle建立T瓶（Earle瓶）培養(yǎng)法。CMPomerat改良和設(shè)計了結(jié)構(gòu)簡單且易于消毒的灌流小室，使得體外培養(yǎng)的細(xì)胞能在不斷更新的培養(yǎng)液中生長。1954年，Earle等建立了懸浮培養(yǎng)法。1955年，HEagle等建立著名的Eagle培養(yǎng)基配方。1957年，Dulbecco等開始采用(cǎiyòng)胰蛋白酶消化處理來分離細(xì)胞的方法以及應(yīng)用液體培養(yǎng)基的方法，使得體外培養(yǎng)單層細(xì)胞成為可能。1959年，Lovelock等發(fā)現(xiàn)了一種新的化學(xué)冷凍保護(hù)劑----二甲基亞砜。1960年，GBarski等在兩種不同類型的細(xì)胞混合培養(yǎng)物中，發(fā)現(xiàn)不同細(xì)胞間存在自發(fā)融合現(xiàn)象。第二十頁，共五十五頁。精選ppt第二十一頁，共五十五頁。精選ppt50年代后是體外培養(yǎng)技術(shù)與生命科學(xué)其它技術(shù)結(jié)合發(fā)展的新時期，誕生(dànshēng)了多種培養(yǎng)的應(yīng)用技術(shù)

以體外培養(yǎng)技術(shù)為基礎(chǔ)的應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的技術(shù)、動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)、微生物制藥技術(shù)、基因轉(zhuǎn)染與細(xì)胞融合以及細(xì)胞轉(zhuǎn)化等細(xì)胞工程技術(shù)。1967年，ALVanWezel創(chuàng)立了微載體技術(shù)用于體外大規(guī)模培養(yǎng)。1972年，RAKnazek等創(chuàng)立了中空纖維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的三維狀態(tài)，利用人工的“毛細(xì)血管”—中空纖維給體外培養(yǎng)的細(xì)胞提供物質(zhì)代謝條件。標(biāo)志著體外培養(yǎng)技術(shù)從過去以二維生長條件跨越到以三維生長條件進(jìn)行體外培養(yǎng)的新階段。

第二十二頁，共五十五頁。精選ppt

現(xiàn)代組織培養(yǎng)的三個階段第一階段懸滴培養(yǎng)懸滴培養(yǎng)法具有簡便的特點，其次由于培養(yǎng)基中有纖維蛋白構(gòu)成的支架，可供細(xì)胞向四面八方生長，培養(yǎng)物是立體的。在此環(huán)境中，細(xì)胞不僅能增殖生長，也能發(fā)生分化，如心肌發(fā)生搏動等。缺陷：空間狹小、氣體不足、培養(yǎng)液少、難以大量繁殖細(xì)胞，觀察不方便等。第二階段單層培養(yǎng)單層細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)(tǐnèi)細(xì)胞比仍然有很大差距(缺少細(xì)胞基質(zhì)、血液供應(yīng)、調(diào)控因子)

。細(xì)胞只有長和寬二維結(jié)構(gòu)，大多細(xì)胞會失去原體內(nèi)時立體的形態(tài)，也是細(xì)胞生物學(xué)性狀發(fā)生改變的主要原因。細(xì)胞在形態(tài)、功能上與體內(nèi)時不同，多數(shù)不能充分表達(dá)原基因產(chǎn)物。第三階段三維培養(yǎng)(立體培養(yǎng))為培養(yǎng)細(xì)胞提供與體內(nèi)相似的支架系統(tǒng)，創(chuàng)建與原體內(nèi)類似的條件，不僅能促進(jìn)細(xì)胞增殖，也可使細(xì)胞發(fā)生分化和表達(dá)體內(nèi)時的某些產(chǎn)物。第二十三頁，共五十五頁。精選ppt

現(xiàn)代組織培養(yǎng)的重要標(biāo)志：

●

培養(yǎng)液的改變

●

培養(yǎng)容器的改變

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培養(yǎng)方法的改進(jìn)：

◆1948年Sanford創(chuàng)立了單細(xì)胞分離培養(yǎng)法

◆

1957年蛋白酶消化組織，分離細(xì)胞(xìbāo)

◆液體培養(yǎng)基的應(yīng)用

●

細(xì)胞培養(yǎng)用的多種材料都已商品化、規(guī)范化和系列化?！?/p>

低溫冷凍技術(shù)的應(yīng)用，可將已建立的多種細(xì)胞系和細(xì)胞株長期凍存。第二十四頁，共五十五頁。精選ppt

●

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)更加廣泛地用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究(如分子遺傳學(xué)、分子生物學(xué)和細(xì)胞工程等學(xué)科均與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)密切相關(guān))如：

◆應(yīng)用理化因素誘發(fā)出遺傳缺陷細(xì)胞株。

◆利用(lìyòng)細(xì)胞技術(shù)，用雜交瘤細(xì)胞制備McAb

◆用細(xì)胞培養(yǎng)檢測環(huán)境中可疑致癌物，癌基因轉(zhuǎn)染和細(xì)胞轉(zhuǎn)化等。

◆基因工程的生產(chǎn)手段，用于生產(chǎn)多種生物制品。第二十五頁，共五十五頁。精選ppt

（三）我國細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展20世紀(jì)30年代細(xì)胞培養(yǎng)傳入我國，50年代以后組織培養(yǎng)在我國逐漸開展起來(qǐlái)。李繼侗、沈同(銀杏胚胎的培養(yǎng))、羅宗洛和羅士偉(玉米根尖生長錐的培養(yǎng))是植物組織培養(yǎng)的先驅(qū)者。細(xì)胞學(xué)家張鈞、鮑鑒清和楊敷海等則最早將動物組織培養(yǎng)引入我國。病毒分離培養(yǎng)：湯飛凡、郭輝玉、顧方舟等昆蟲組織培養(yǎng)：高尚蔭、劉年翠等腫瘤培養(yǎng)：曾毅、鄂征、潘瓊婧、何申、姚開泰等神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)：鮑璇、邵文釗、郭畹華等干細(xì)胞培養(yǎng)：姚鑫、吳祖澤等第二十六頁，共五十五頁。精選ppt三、體外培養(yǎng)技術(shù)的主要類別按照體外培養(yǎng)的對象(duìxiàng)，可分為全部培養(yǎng)和部分培養(yǎng)兩大類：全部培養(yǎng)：指對生物個體進(jìn)行培養(yǎng)。對象一般是微小的生物個體，如微生物、寄生蟲等。部分培養(yǎng)：指對生物個體的一部分進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)。

組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)第二十七頁，共五十五頁。精選ppt四、體外培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用在組織學(xué)與胚胎學(xué)上的應(yīng)用：培養(yǎng)胚胎器官，研究其分化和發(fā)育過程。是研究胚胎發(fā)生、發(fā)育過程中誘導(dǎo)現(xiàn)象、發(fā)育潛能、胚胎致畸作用、環(huán)境誘變等衍生(yǎnshēnɡ)、演化生長行為及其機(jī)制的重要手段。在細(xì)胞生物學(xué)上的應(yīng)用：廣泛由于細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞生理、細(xì)胞遺傳學(xué)研究。腫瘤學(xué)方面的研究：腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性研究腫瘤發(fā)病機(jī)制研究異種移植研究第二十八頁，共五十五頁。精選ppt在微生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用：病毒學(xué)、細(xì)菌學(xué)在免疫學(xué)方面的應(yīng)用：抗體的產(chǎn)生、單克隆抗體的制備在藥理學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用：藥物篩選、細(xì)胞毒性和活性檢測動物細(xì)胞與微生物大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)在生產(chǎn)實踐上的應(yīng)用：疫苗、單克隆抗體、干擾素、激素、生長因子、酶制劑等在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用：以培養(yǎng)細(xì)胞移植修復(fù)骨和軟骨缺損、體外受精(tǐwàishòujīnɡ)產(chǎn)生試管嬰兒、轉(zhuǎn)基因動物、干細(xì)胞移植、器官移植等。第二十九頁，共五十五頁。精選ppt五、對體外培養(yǎng)技術(shù)的評價

●能長時間直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動，是多學(xué)科進(jìn)行科學(xué)研究的對象和工具，如細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)和腫瘤學(xué)等。

●供研究的細(xì)胞種類極為廣泛，從低等生物到人，或正常組織或腫瘤組織細(xì)胞，而且便于記錄(通過攝影、閉路電視和攝電影等方式)

●易施加(shījiā)理化因素和生物因素進(jìn)行實驗研究。如研究某種實驗因素對細(xì)胞的生物學(xué)作用，只需在培養(yǎng)液中有針對性地加入或刪除該成分即可。

第三十頁，共五十五頁。精選ppt

●可同時方便獲得大量細(xì)胞類型單一、細(xì)胞周期同步、生物學(xué)性狀基本相同并對實驗因素反應(yīng)一致的細(xì)胞群。

●

能夠進(jìn)行(jìnxíng)大規(guī)模生物制品的生產(chǎn)。利用體外培養(yǎng)技術(shù)可以大量繁殖動物細(xì)胞或微生物以生產(chǎn)生物制品。

●

與體內(nèi)環(huán)境相比，體外培養(yǎng)細(xì)胞在一定程度上失去了組織聯(lián)系及相互作用，缺乏在體內(nèi)時的血運和神經(jīng)體液調(diào)節(jié)作用，因此不能將體外實驗結(jié)果一并推至體內(nèi)，即不能輕易下結(jié)論。第三十一頁，共五十五頁。精選ppt1.Anchorage-dependentcellsorcultures(貼壁依賴性細(xì)胞或培養(yǎng)物)：體外培養(yǎng)的細(xì)胞只有貼附在不起化學(xué)作用的物體的表面時才能生長、生存或維持功能。2.Apoptosis(細(xì)胞凋亡)：是指細(xì)胞內(nèi)死亡程序的啟動而導(dǎo)致細(xì)胞自殺的過程，因此也常稱為程序性細(xì)胞死亡(programmedcelldeath)。細(xì)胞凋亡與機(jī)體正常發(fā)育、形態(tài)形成以及多余細(xì)胞的清除等生理(shēnglǐ)過程密切相關(guān)，所以被認(rèn)為是一種積極的生理(shēnglǐ)性死亡。六、組織培養(yǎng)常用(chánɡyònɡ)術(shù)語第三十二頁，共五十五頁。精選ppt

3.Cellculture(細(xì)胞培養(yǎng))：細(xì)胞在體外條件下的生長。4.Cellfusion(細(xì)胞融合)：體外培養(yǎng)條件下，經(jīng)化學(xué)試劑、病毒或物理方法誘發(fā)，使同種或不同種的2個或2個以上體細(xì)胞融合產(chǎn)生雜交細(xì)胞的過程。5.cellgenerationtime(細(xì)胞一代時間)：是指單個細(xì)胞兩次連續(xù)分裂的時間間隔(jiàngé)。可借助顯微鏡電影照相術(shù)來精確確定。6.Primaryculture（原代培養(yǎng)）：是指直接取自生物體細(xì)胞、組織或器官開始的培養(yǎng)。第三十三頁，共五十五頁。精選ppt

7.cellline(細(xì)胞系)：原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即成為細(xì)胞系。8.Clone(克隆)：單個細(xì)胞通過有絲分裂形成的細(xì)胞群體(qúntǐ)，他們的遺傳特性相同。9.Confluence(匯合)：指在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的細(xì)胞彼此匯合形成單層，注意與細(xì)胞融合的區(qū)別。

第三十四頁，共五十五頁。精選ppt

10.Contactinhibition(接觸抑制)：當(dāng)一個貼壁生長(shēngzhǎng)的體外正常細(xì)胞生長(shēngzhǎng)至與另一個細(xì)胞相互接觸時，便停止了分裂增殖，相互雖然緊密接觸，但不形成交叉重疊生長(shēngzhǎng)，也不再進(jìn)入S期。11.Invitromalignanttransformation(體外惡性轉(zhuǎn)化)：細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中獲得了致瘤性，當(dāng)把這種細(xì)胞接種于適當(dāng)?shù)膭游铮梢援a(chǎn)生腫瘤，即異種動物接種致瘤實驗。12.Invitrotransformation(體外轉(zhuǎn)化)：細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中發(fā)生與原代細(xì)胞形態(tài)、抗原、增殖或其他特性的可遺傳的變化，但不一定具有致瘤性。第三十五頁，共五十五頁。精選ppt

13.Minimalmedium(最低限度培養(yǎng)基)：能滿足大多數(shù)細(xì)胞生長增殖需要的最簡單的培養(yǎng)基。14.Organculture(器官培養(yǎng))：是指維持整個器官或器官的一部分在體外生存和生長，并一定(yīdìng)程度上保持原來的結(jié)構(gòu)和功能的方法。15.Passage(Subculture，傳代或傳代培養(yǎng))：將細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到更多培養(yǎng)瓶的過程。第三十六頁，共五十五頁。精選ppt16.Saturationdensity(飽和密度)：在特定條件下，培養(yǎng)容器能達(dá)到的最高細(xì)胞數(shù)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到飽和密度后細(xì)胞群體停止(tíngzhǐ)增殖。在貼壁培養(yǎng)中以每平方厘米的細(xì)胞數(shù)表示，而懸浮生長的細(xì)胞則以每立方厘米的細(xì)胞數(shù)表示。17.HeLacell來源于子宮頸癌組織(美國黑人婦女HenriettaLacks)的上皮細(xì)胞系，為體外最早建立的人類癌細(xì)胞系。第三十七頁，共五十五頁。精選ppt

1951年，美國非裔煙農(nóng)HenriettaLacks因?qū)m頸癌病逝于巴爾的摩一家醫(yī)院，當(dāng)時她只有31歲。在未告知的情況下，科學(xué)家以她的子宮頸癌切除組織，成功培育出第1種體外可無限增殖的人類細(xì)胞系。很快“海拉細(xì)胞”(HeLacells)細(xì)胞就開始從巴爾的摩運往世界各地。62年過去了---這是拉克斯女士壽命的兩倍---她的細(xì)胞承擔(dān)了超過74,000項研究課題，其中很多已在細(xì)胞生物學(xué)、疫苗(yìmiáo)、試管嬰兒、癌癥研究和許多藥物等方面結(jié)出了碩果，造就了產(chǎn)值龐大的相關(guān)產(chǎn)業(yè)。HeLa細(xì)胞是科學(xué)史上最著名且最有價值的人類細(xì)胞，不過未來取得“海拉細(xì)胞”的難度會提高。第三十八頁，共五十五頁。精選ppt第三十九頁，共五十五頁。精選ppt第四十頁，共五十五頁。精選ppt拉克斯女士身后留下的孩子，現(xiàn)在已有孫輩和曾孫輩，他們中很多人還生活在巴爾的摩或附近地區(qū)。設(shè)在德國的歐洲分子生物學(xué)實驗室(EuropeanMolecularBiologyLaboratory)的科學(xué)家今年3月發(fā)布(fābù)了HeLa細(xì)胞系一個支系的全基因組序列，可供公開下載。包括會暴露出拉克斯后代的某些特征。這類信息可能會透露疾病傾向，像是酗酒、阿茲海默癥或是躁郁癥，并可能會使個人遭到保險公司拒保壽險或失能保險。在拉克斯家屬提出抗議后，這些資料已不再“公諸于世”。第四十一頁，共五十五頁。精選ppt

另一項由美國國家衛(wèi)生研究院(NIH)資助、華盛頓大學(xué)(UniversityofWashington)進(jìn)行的研究即將在nature上發(fā)表。這兩項研究都未曾讓拉克斯家庭知悉。美國國家衛(wèi)生研究院的官員現(xiàn)在承認(rèn)，研究院在最初申請資金對海拉細(xì)胞(xìbāo)基因組測序時，就應(yīng)該聯(lián)系拉克斯家族。而在拉克斯家族提出反對后，他們也沒有及時處理該問題。歐洲研究者們撤下此前發(fā)布的公共數(shù)據(jù)，華盛頓大學(xué)的論文發(fā)表也被叫停?？铝炙挂约懊绹鴩倚l(wèi)生研究院負(fù)責(zé)科學(xué)、普及和政策副主任凱茜·L·哈德遜(KathyL.Hudson)三次前往巴爾的摩與拉克斯的家人見面，并就研究和接下來應(yīng)該怎么辦進(jìn)行了討論。第四十二頁，共五十五頁。精選ppt這起事件引發(fā)拉克斯家族與NIH對話，8月8日NIH宣布，已和HenriettaLacks的后代達(dá)成協(xié)議：兩項研究所得出的數(shù)據(jù)應(yīng)該被儲存在該研究院的基因型和表型數(shù)據(jù)庫，想要使用數(shù)據(jù)的研究者可以進(jìn)行申請，獲得權(quán)限，而且必須每年提交研究報告。NIH一個被稱為“海拉基因組數(shù)據(jù)權(quán)限獲取工作小組”的組織會對這些申請進(jìn)行審查，小組中將有拉克斯的兩名家族成員。根據(jù)協(xié)議，拉克斯家族不會獲得海拉基因組研究所產(chǎn)生的任何可能(kěnéng)商業(yè)產(chǎn)品帶來的利益。簽訂上述協(xié)議后，華盛頓大學(xué)的研究人員便可以發(fā)表其研究結(jié)果了。他們的分析在幾個方面超過了歐洲的研究。最重要的是，他們精確地說明了海拉細(xì)胞DNA中每一個基因的具體位置。

第四十三頁，共五十五頁。精選ppt即研究人員要使用HeLa細(xì)胞做研究，必須(bìxū)向NIH申請，并且遵守兩名拉克斯家屬參與的小組規(guī)范條款，并將研究成果貢獻(xiàn)到資料庫。NIH院長柯林斯(FrancisCollins)告訴記者：“這是具歷史性的新協(xié)議?！边@項協(xié)議將“保護(hù)家屬權(quán)益，同時也加深他們對生物醫(yī)學(xué)研究的投入”。第四十四頁，共五十五頁。精選ppt

18.Suspensionculture(懸浮培養(yǎng))：細(xì)胞或細(xì)胞聚集體懸浮于液體培養(yǎng)基中增殖的一種培養(yǎng)方法。19.Tissueculture(組織培養(yǎng))：組織在體外條件(tiáojiàn)下保存或生長。借此組織結(jié)構(gòu)或功能得以在體外保持，亦可能在體外維持其分化。20.Transfection(轉(zhuǎn)染)：用生物學(xué)的、物理的或化學(xué)的方法將目的基因轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的實驗方法。21.Lipofectin：一種常用的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，用該試劑包裹DNA可形成脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物，再通過細(xì)胞膜融合可將DNA轉(zhuǎn)染入哺乳動物細(xì)胞。第四十五頁，共五十五頁。精選ppt22.Cellcycle：指細(xì)胞從前一次分裂結(jié)束開始至本次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的時相過程。分4個時期，即DNA合成期(S期)、有絲分裂期(M期)、有絲分裂完成至DNA合成開始的間隙期(G1期)以及(yǐjí)DNA復(fù)制結(jié)束至有絲分裂開始的間隙期(G2)。若某種原因細(xì)胞不再沿細(xì)胞周期運行，而進(jìn)入休眠狀態(tài)稱為G0期。第四十六頁，共五十五頁。精選ppt23.細(xì)胞株(cellstrain)：是由具有某些特性與標(biāo)志的細(xì)胞選擇或克隆化而派生的亞系，這些(zhèxiē)特性或標(biāo)志在隨后的培養(yǎng)中必須保持下去。第四十七頁，共五十五頁。精選ppt

24.Stemcell(干細(xì)胞)：具有繼續(xù)增殖(zēngzhí)與分化潛能的細(xì)胞，其中胚胎干細(xì)胞(Embryonicstemcell，ESC)可形成機(jī)體所有各種類型的組織和細(xì)胞，甚至發(fā)育成一個完整的胚胎，故又稱全能性(totipotency)干細(xì)胞。隨著細(xì)胞分化，這種分化潛能逐漸受到局限，只能分化形成有限細(xì)胞類型的細(xì)胞稱為多能性(multipotency)干細(xì)胞，最終成為單能干細(xì)胞(Monopotencystemcell)或定向干細(xì)胞(directional).第四十八頁，共五十五頁。精選ppt

克隆羊多利(Dolly)的誕生(dànshēng)

1997年2月，英國Roslin研究所克隆羊多利(Dolly)的誕生揭示一個全新概念：由成年機(jī)體的一個體細(xì)胞核，可以復(fù)制一個基因完全相同的新生命個體?？寺⊙虻恼Q生，預(yù)示著動物將成為人類的藥物制造廠。第四十九頁，共五十五頁。精選ppt

在培育多利的過程中，科學(xué)家采用體細(xì)胞克隆技術(shù)，主要分四個步驟進(jìn)行：①從一只六歲雌性的芬蘭多塞特(FinnDorset)白面綿羊(稱之為A)的乳腺中取出乳腺細(xì)胞，將其放入低濃度的培養(yǎng)液中，細(xì)胞逐漸停止分裂，此細(xì)胞稱之為供體細(xì)胞。②從一頭蘇格蘭黑面母綿羊(稱之為B)的卵