臨床實(shí)驗(yàn)室生物講課課件

臨床實(shí)驗(yàn)室生物

安全導(dǎo)則衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心申子瑜病原微生物實(shí)驗(yàn)室安全管理條例

（征求意見稿）第一章總則

為了加強(qiáng)病原微生物實(shí)驗(yàn)室(以下稱實(shí)驗(yàn)室)安全管理，保護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員和公眾的健康，制定本條例。本條例所稱病原微生物：是指能夠使人或者動物致病的微生物。

除特殊情況外，禁止在實(shí)驗(yàn)室使用針、注射器及其他利器。實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等。派到室內(nèi)或套管式的連接四級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室中的家具應(yīng)牢固。B型中又分為B1（70%接管道外排）、需運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室滅活的物品必須放在專用密閉防漏的容器內(nèi)儲存、運(yùn)輸及消毒滅菌；0100B3（30%接管道外排）。二、二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

安全設(shè)備和個體防護(hù)在實(shí)驗(yàn)室所在的建筑內(nèi)應(yīng)高壓蒸汽滅菌器，并按期檢查和驗(yàn)證，以保證符合要求。向室外排風(fēng)的Ⅱ級A2型應(yīng)有專門放置生物廢棄物容器的臺(架)?？赡墚a(chǎn)生致病微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作均應(yīng)在生物安全柜(Ⅱ級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。3、衛(wèi)生部負(fù)責(zé)制定并調(diào)整四類病原微生物

條例目標(biāo)及適用范圍保護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員、社會公眾和環(huán)境適應(yīng)于從事病原微生物研究、教學(xué)、生產(chǎn)、診斷檢測等所有實(shí)驗(yàn)室

國家對病原微生物按照其對人類和動物以及環(huán)境的危害程度實(shí)行分類管理，對實(shí)驗(yàn)室根據(jù)其對病原微生物的防護(hù)水平實(shí)行分級管理。國家實(shí)行統(tǒng)一的實(shí)驗(yàn)室生物安全標(biāo)準(zhǔn)。病原微生物的分類和管理l、國家將病原微生物分為四類2、第三類、第四類稱為高致病性病原微生物3、衛(wèi)生部負(fù)責(zé)制定并調(diào)整四類病原微生物的種類

第一類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人或者動物疾病的微生物。第二類病原微生物，是指能夠引起人或者動物疾病，發(fā)生實(shí)驗(yàn)室暴露可能引起感染，但不會引起嚴(yán)重危害，且能夠有效實(shí)施預(yù)防和治療的微生物。

第三類病原微生物，是指能夠引起人或者動物的嚴(yán)重疾病，但不易在人或者動物間傳播，且能夠有效實(shí)施預(yù)防和治療的微生物。第四類病原微生物，是指能夠引起人或者動物的嚴(yán)重疾病，容易在人或者動物間傳播，或者沒有有效的預(yù)防和治療措施的微生物。第三類、第四類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。國家根據(jù)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)水平，將實(shí)驗(yàn)室分為一級、二級、三級、四級。

本條例所稱病原微生物：是指能夠使人或者動物致病的微生物。美國國家衛(wèi)生研究院NIH標(biāo)準(zhǔn)與美國國家疾病控制中心CDC實(shí)驗(yàn)室生物安全級別標(biāo)準(zhǔn)中要求：工作完全結(jié)束后方可除去手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或?yàn)R出，宜戴兩副手套。三級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室非一次性利器必須放入厚壁容器中并運(yùn)送到特定區(qū)域消毒，最好進(jìn)行高壓消毒。禁止非工作人員進(jìn)人實(shí)驗(yàn)室。三、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計和建造的特殊要求四、為何需使用生物安全柜?實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。實(shí)驗(yàn)設(shè)備在運(yùn)出修理或維護(hù)前必須進(jìn)行消毒；外排的氣流經(jīng)過雙層HEPA過濾或經(jīng)B3（30%接管道外排）。（2）外排到室外的氣流（30%）經(jīng)過HEPA高效過濾；保護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員、社會公眾和環(huán)境

臨床診斷、檢測檢驗(yàn)工作可以在二級實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。但是，發(fā)現(xiàn)高致病性病原微生物的其病原學(xué)的分離鑒定工作應(yīng)當(dāng)轉(zhuǎn)移到三級以上的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB19489-2004

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

一、實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)分級一級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室，簡稱BSL1或P1二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室，簡稱BSL2或P2三級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室，簡稱BSL3或P3四級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室，簡稱BSL4或P4一級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等。

二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。

三級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有預(yù)防傳染的疫苗。艾滋病毒的研究（血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室除外）應(yīng)在三級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。

四級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。

二、二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

安全設(shè)備和個體防護(hù)

可能產(chǎn)生致病微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作均應(yīng)在生物安全柜(Ⅱ級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。處理高濃度或大容量感染性材料均必須在生物安全柜(Ⅱ級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。

上述材料的離心操作如果使用密封的離心機(jī)轉(zhuǎn)子或安全離心杯，且它們只在生物安全柜中開閉和裝載感染性材料，則可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。當(dāng)微生物的操作不可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行而必須采取外部操作時，為防止感染性材料濺出或霧化危害，必須使用面部保護(hù)裝置(護(hù)目鏡、面罩、個體呼吸保護(hù)用品或其他防濺出保護(hù)設(shè)備)。

第二十三條實(shí)驗(yàn)室設(shè)計與建造應(yīng)當(dāng)與其生物安全防護(hù)級別相適應(yīng)。第四章實(shí)驗(yàn)室安全管理可能產(chǎn)生致病微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作均應(yīng)在生物安全柜(Ⅱ級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。超凈臺保護(hù)樣品不受污染，適用于普通實(shí)驗(yàn)室或1級生物安全水平中對人員和環(huán)境無保護(hù)要求的實(shí)驗(yàn)。柜內(nèi)保持至少120Pa的負(fù)壓；以移液器吸取液體，禁止口吸；二、二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

安全設(shè)備和個體防護(hù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等。醫(yī)療廢物醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)在醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動中產(chǎn)生的具有直接或者間接感染性、毒性以及其他危害性的廢物。應(yīng)有專門放置生物廢棄物容器的臺(架)。派到室內(nèi)或套管式的連接除特殊情況外，禁止在實(shí)驗(yàn)室使用針、注射器及其他利器。（1）進(jìn)入的氣流最低流速為0.第二十六條實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)配備必要的安全設(shè)備（如生物安全柜）和個人防護(hù)用品。（2）70%氣流通過專用的管道經(jīng)HEPA過濾后接管道外排至室外；4.

在實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)穿著工作服或罩衫等防護(hù)服。離開實(shí)驗(yàn)室時，防護(hù)服必須脫下并留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。不得穿著外出，更不能攜帶回家。用過的工作服應(yīng)先在實(shí)驗(yàn)室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。5.當(dāng)手可能接觸感染材料、污染的表面或設(shè)備時應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或?yàn)R出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實(shí)驗(yàn)室。工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。

三、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計和建造的特殊要求每個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近出口處。實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)易于清潔。地面應(yīng)防滑、無縫隙。實(shí)驗(yàn)臺表面應(yīng)不透水，耐腐蝕、耐熱。實(shí)驗(yàn)室中的家具應(yīng)牢固。為易于清潔，各種家具和設(shè)備之間應(yīng)保持一定間隙。應(yīng)有專門放置生物廢棄物容器的臺(架)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗。在實(shí)驗(yàn)室所在的建筑內(nèi)應(yīng)高壓蒸汽滅菌器，并按期檢查和驗(yàn)證，以保證符合要求。應(yīng)設(shè)置洗眼設(shè)施，必要時應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置。實(shí)驗(yàn)室門宜帶鎖、可自動關(guān)閉，門有可視窗。實(shí)驗(yàn)室出口應(yīng)有在黑暗中可明確辨識的標(biāo)識。應(yīng)通風(fēng)，如使用窗戶自然通風(fēng)，應(yīng)有防蟲紗窗。

二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室操作要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室人口須貼上生物危險標(biāo)志，注明危險因子、生物安全級別、負(fù)責(zé)人姓名和電話、進(jìn)人實(shí)驗(yàn)室的特殊要求及離開實(shí)驗(yàn)室的程序；禁止非工作人員進(jìn)人實(shí)驗(yàn)室。參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須經(jīng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后方可進(jìn)入；禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物；接觸微生物或含有微生物的物品后，脫掉手套后和離開實(shí)驗(yàn)室前要洗手；以移液器吸取液體，禁止口吸；制定尖銳器具的安全操作規(guī)程；按照實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)程操作，降低濺出和氣溶膠的產(chǎn)生；每天至少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出后要隨時消毒；9.所有培養(yǎng)物、廢棄物在運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室之前必須進(jìn)行滅活，如高壓滅活。需運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室滅活的物品必須放在專用密閉防漏的容器內(nèi)儲存、運(yùn)輸及消毒滅菌；10.如有條件工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種(如卡介苗等)；11.必要時收集從事危險性工作人員的基本血清留底，并根據(jù)需要定期收集血清樣本，應(yīng)有檢測報告，如有問題及時處理；12.將生物安全程序納入標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范或生物安全手冊，由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人專門保管，工作人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前要閱讀規(guī)范并按照規(guī)范要求操作；13.工作人員要接受有關(guān)的潛在危險知識的培訓(xùn)，掌握預(yù)防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓(xùn)；14.實(shí)驗(yàn)設(shè)備在運(yùn)出修理或維護(hù)前必須進(jìn)行消毒；15.人員暴露于病毒時，及時向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人匯報并記錄。安全管理制度實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度尖銳器具安全使用制度實(shí)驗(yàn)室消毒防護(hù)制度標(biāo)本采集運(yùn)輸制度廢棄物處理制度工作人員防護(hù)制度差錯事故處理制度尖銳器具安全使用制度除特殊情況外，禁止在實(shí)驗(yàn)室使用針、注射器及其他利器。盡可能使用塑料器材代替玻璃器材。盡可能應(yīng)用一次性注射器，用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽、從注射器取下，禁止用手直接操作。用過的針頭必須直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必須放入厚壁容器中并運(yùn)送到特定區(qū)域消毒，最好進(jìn)行高壓消毒。盡可能使用無針注射器和其他安全裝置。禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須消毒。四、為何需使用生物安全柜?考慮對操作人員，操作樣品，操作環(huán)境的保護(hù)。美國國家衛(wèi)生研究院NIH標(biāo)準(zhǔn)與美國國家疾病控制中心CDC實(shí)驗(yàn)室生物安全級別標(biāo)準(zhǔn)中要求：應(yīng)用于臨床、診斷、教學(xué)、研究、或者生產(chǎn)設(shè)施，開展有關(guān)內(nèi)源性和外源性病源的工作，若因暴露而吸入該病源,會引發(fā)嚴(yán)重的、可能致死的疾病。需使用ClassII級生物安全柜實(shí)驗(yàn)人員受過專業(yè)訓(xùn)練應(yīng)有管道化的排氣系統(tǒng)，排出的空氣不再循環(huán)至建筑物內(nèi)的任何其他區(qū)域。建議生物安全柜每年經(jīng)過測試和確證

生物安全設(shè)備分類1.超凈臺2.抽風(fēng)櫥3.CLASSI一級生物安全柜4.CLASSII二級生物安全柜5.CALSSIII三級生物安全柜（又稱手套柜）1、超凈臺正壓柜氣流從頂部或底部經(jīng)過過濾器后從操作區(qū)正面流向工作臺面，被樣品污染的氣流排出柜外，沒有循環(huán)氣流。超凈臺保護(hù)樣品不受污染，適用于普通實(shí)驗(yàn)室或1級生物安全水平中對人員和環(huán)境無保護(hù)要求的實(shí)驗(yàn)。

2、CLASSI一級生物安全柜負(fù)壓柜氣流經(jīng)操作人員向內(nèi)進(jìn)入工作臺面，被污染的氣流通過HEPA過濾器外排出柜外，沒有循環(huán)氣流。CLASSI級BSC保護(hù)操作人員和環(huán)境不受污染，適用于生物安全水平中對實(shí)驗(yàn)樣品無保護(hù)要求的實(shí)驗(yàn)。3、CLASSII二級生物安全柜層流負(fù)壓柜它們可以安全的保護(hù)樣品、人員和環(huán)境。II級生物安全柜分為A型（30%排在室內(nèi)）和B型；B型中又分為B1（70%接管道外排）、B2（100%接管道外排）、B3（30%接管道外排）。

CLASSIIA生物安全柜（1）進(jìn)入氣流最低流速平均為0.38米/秒)；（2）30%氣流經(jīng)HEPA過濾后外排在室內(nèi)；（3）被污染的管道和氣流通道為正壓狀態(tài)生物安全柜空氣流向CLASSIIB1生物安全柜（1）進(jìn)入的氣流最低流速平均為0.5米/秒；（2）70%氣流通過專用的管道經(jīng)HEPA過濾后接管道外排至室外；（3）所有受生物污染的管道和氣流通道均在負(fù)壓狀態(tài)下或被負(fù)壓的管道或氣流通道包圍。CLASSIIB2生物安全柜（1）進(jìn)入氣流最低流速平均為0.5米/秒；（2）所有向內(nèi)進(jìn)入的氣流和向下的氣流均通過HEPA過濾后排到室外而不在柜內(nèi)循環(huán)，也不能排入實(shí)驗(yàn)室；100%接管道外排。（3）所有的被污染的管道和氣流通道都在負(fù)壓狀態(tài)下或被直接外排的負(fù)壓管道或氣流管道所包圍。CLASSIIB3生物安全柜（1）進(jìn)入的氣流最低流速為0.5米/秒；（2）外排到室外的氣流（30%）經(jīng)過HEPA高效過濾；（3）所有經(jīng)生物污染的管道和氣流通道均為負(fù)壓狀態(tài)；（4）與CLASSIIA型氣流方向相同，但與CLASSA型不同的是，它30%外排氣是接管道排到室外的。II級生物安全柜Airflow

4.CLASSIII生物安全柜

（手套柜）全封閉的、氣密結(jié)構(gòu)的通風(fēng)柜；通過橡膠手套進(jìn)行操作；柜內(nèi)保持至少120Pa的負(fù)壓；供氣通過HEPA抽入內(nèi)；外排的氣流經(jīng)過雙層HEPA過濾或經(jīng)

HEPA后再經(jīng)燃燒處理。

CLASSIII型BSC適用于BSL3、BSL4的生物實(shí)驗(yàn)。

高效空氣過濾工作人員安全無渦流單向流空氣實(shí)驗(yàn)對象不受污染手套箱式操作口抽風(fēng)櫥無是是否否I級有是否否否II級有是是是否III級有是是是是生物安全裝置異同Ⅰ級、Ⅱ級和Ⅲ級生物安全柜的區(qū)別BSC表面風(fēng)速（m/s）%氣流在循環(huán)排除排風(fēng)系統(tǒng)Ⅰ級0.360100硬管道Ⅱ級A1型0.38-0.517030派到室內(nèi)或套管式的連接向室外排風(fēng)的Ⅱ級A2型0.517030派到室外或套管式的連接Ⅱ級B1型0.513070硬管道Ⅱ級B2型0.510100硬管道Ⅲ級型NA0100硬管道根據(jù)保護(hù)類型的需要選擇適宜的生物安全柜保護(hù)類型BSC的選擇針對危險組1-3微生物的人員保護(hù)Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級針對危險組4微生物的人員保護(hù)，手套箱實(shí)驗(yàn)室Ⅲ級針對危險組1-3微生物的人員保護(hù),防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室Ⅰ級、Ⅱ級產(chǎn)品保護(hù)Ⅱ級,僅當(dāng)涉及層流時用Ⅲ級針對微量的不穩(wěn)定的放射性核/化學(xué)藥品的保護(hù)Ⅱ級B1,向室外排風(fēng)的Ⅱ級A2針對不穩(wěn)定的放射性核/化學(xué)藥品的保護(hù)Ⅰ級、Ⅱ級B2，Ⅲ級對各級生物安全水平實(shí)驗(yàn)室的要求生物安全柜生物安全級別一級二級三級四級Ⅰ級不需要隨意需要不需要Ⅱ級不需要最好有需要需要，在防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室中使用Ⅲ級不需要不需要最好有需要，在安全柜室使用四、為何需使用生物安全柜?實(shí)驗(yàn)室人口須貼上生物危險標(biāo)志，注明危險因子、生物安全級別、負(fù)責(zé)人姓名和電話、進(jìn)人實(shí)驗(yàn)室的特殊要求及離開實(shí)驗(yàn)室的程序；CLASSIIA生物安全柜實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)易于清潔。處理高濃度或大容量感染性材料均必須在生物安全柜(Ⅱ級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。派到室內(nèi)或套管式的連接必要時收集從事危險性工作人員的