動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)課件

動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程

其中，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動(dòng)物細(xì)胞工程

常用的技術(shù)手段動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植。但對(duì)于大面積燒傷病人來(lái)講，健康皮膚很有限，請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來(lái)治療該病人？思考？取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得人造皮膚后再移植。（一）、概念

是指從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。（二）、原理細(xì)胞分裂增殖一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(三)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程

取動(dòng)物組織塊剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)剪碎組織及胰蛋白酶處理的目的？剪碎組織及胰蛋白酶處理的目的：將組織分散成單個(gè)細(xì)胞，有利于細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)。制成細(xì)胞懸液動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物器官因?yàn)檫@些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。（四）動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性1.細(xì)胞貼壁：細(xì)胞懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。

要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑無(wú)毒、易于貼附。2.接觸抑制接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。50代以后失去接觸抑制接觸抑制（細(xì)胞為單層）50代以后細(xì)胞失去接觸抑制原代培養(yǎng)：

人們通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：

貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)過(guò)程通常被稱為傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)過(guò)程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的細(xì)胞、組織或器官細(xì)胞懸浮液→原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)10代細(xì)胞50代細(xì)胞無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞胰蛋白酶加培養(yǎng)液剪碎細(xì)胞貼壁剝離分瓶部分細(xì)胞的細(xì)胞核型發(fā)生變化動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)最終不能培養(yǎng)成動(dòng)物體接觸抑制培養(yǎng)器皿

超凈工作臺(tái)實(shí)驗(yàn)設(shè)備細(xì)胞培養(yǎng)箱倒置顯微鏡（五）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境

（①添加一定量的抗生素；②定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)

（葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）（使用合成培養(yǎng)基時(shí)，需加入血清、血漿等）補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，如血清激素、氨基酸等。CO2有調(diào)節(jié)PH的作用。思考與討論1、進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？2、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？主要是蛋白質(zhì)。不行，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜PH為7.2—7.4，而胃蛋白酶適宜PH為2.0，胃蛋白酶會(huì)失去活性。長(zhǎng)時(shí)間會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用。所以應(yīng)控制好胰蛋白酶的消化時(shí)間。P443、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)基相比，有何獨(dú)特之處？4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基性質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細(xì)胞數(shù)目增多培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等健康細(xì)胞培養(yǎng)：如獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。用于檢測(cè)有毒物質(zhì)用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)P50

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)脫分化過(guò)程嗎？為什么？

不經(jīng)過(guò)。因?yàn)楦叨确只膭?dòng)物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個(gè)體的能力。二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物

1.概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。核移植受體細(xì)胞：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易

用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物。2.原理：動(dòng)物體細(xì)胞核的全能性。（難度高）MⅡ期的卵母細(xì)胞選用去核卵母細(xì)胞的原因：①卵母細(xì)胞比較大，容易操作；②細(xì)胞質(zhì)多，營(yíng)養(yǎng)豐富，含有促進(jìn)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)。②胚胎移植

①動(dòng)物細(xì)胞核移植原理：動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性和細(xì)胞膜的流動(dòng)性討論：1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？

為使遺傳物質(zhì)全部來(lái)自有重要利用價(jià)值的動(dòng)物。P492.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？

培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10～50代左右時(shí)，部分細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會(huì)發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。3.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？

不是。

①克隆動(dòng)物絕大部分DNA來(lái)自于供體細(xì)胞核，

少部分DNA來(lái)自于受體卵母細(xì)胞的線粒體。②還受動(dòng)物生活環(huán)境的影響。1）.加速家畜遺傳改良進(jìn)程2）.保護(hù)瀕危動(dòng)物3）