任務(wù)二人工授精講課件

任務(wù)二、人工授精第一節(jié)概述概念人工授精是利用器械采集雄性動物的精液。經(jīng)檢查和處理后，再用器械將精液輸入到發(fā)情雌性動物的生殖道內(nèi)，以代替自然交配而繁殖后代的一種技術(shù)。

一、人工授精的發(fā)展概況人工授精的發(fā)展經(jīng)歷下列三個階段：1.試驗階段：1780年，意大利生理學家Spallanzani，第一次成功地用狗進行了人工授精試驗。

2.實用階段：上世紀40-60年代，人工授精的應(yīng)用蓬勃發(fā)展成為繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，發(fā)展最快，技術(shù)水平較高。

3．冷凍精液階段：50年代英國的Smith和Polge研究牛精液的冷凍保存方法，人工授精技術(shù)進入了一個新的發(fā)展階段。

二、人工授精的優(yōu)越性1.最大限度地提高優(yōu)秀種公畜的利用率2.大幅度減少種公畜的頭數(shù)，降低了飼養(yǎng)管理費用

3.控制疾病傳播

4.有利于提高母畜的受胎率

5.能夠使配種不受地域和時間的限制。

6.克服公、母畜體型懸殊而出現(xiàn)的交配困難7.加速家畜品種改良，促進育種工作

三、人工授精的限制1、通過人工授精可能使不良的公畜影響范圍更大2、必須投入一定資金，進行房舍建設(shè)和設(shè)備購置3、必須進行人員的技術(shù)培訓，不良的操作會造成更嚴重的問題第二節(jié)采精采精的基本要求安全：對種公畜、對人員必須確保安全潔凈：采集的精液不能受到任何生物和化學污染全部：能夠采集到種公畜全部的精液簡單:設(shè)備\用品要簡單,拆卸方便,操作方便目錄一、采精前的準備目錄（一）采精場地

采精要有一定的采精環(huán)境，以便雄性動物建立起鞏固的條件反射，同時防止精液污染。采精場地應(yīng)該寬敞、平坦、安靜、清潔，場內(nèi)設(shè)有采精架以保定臺畜，或設(shè)立假臺畜，供公畜爬跨進行采精，采精場應(yīng)與人工授精操作室和公畜舍相連。室內(nèi)采精場的面積一般為10×10平方米，并附設(shè)噴灑消毒和紫外線照射殺菌設(shè)備。

目錄（二）臺畜的準備

臺畜有真假臺畜之分真臺畜是指使用與公畜同種的母畜、閹畜或另一頭種公畜作臺畜。真臺畜應(yīng)健康、體壯、大小適中、性情溫順。選發(fā)情的母畜比較理想，經(jīng)過訓練的公、母畜也可作臺畜。假臺畜即采精臺，是模仿母畜體型高低大小，選用金屬材料或木料做成的一個具有一定支撐力的支架。目錄（三）調(diào)教種公畜爬跨假臺畜利用假臺畜采精，要事先對種公畜進行調(diào)教，使其建立條件反射。調(diào)教的方法有如下幾種：

1.在假臺畜的后軀涂抹發(fā)情母畜的陰道粘液或尿液，公畜則會受到剌激而引起性興奮并爬跨假臺畜，經(jīng)過幾次采精后即可調(diào)教成功；

2.在假臺畜旁邊牽一發(fā)情母畜，誘使公畜進行爬跨，但不讓交配而把其拉下，反復(fù)多次，待公畜性沖動達到高峰時，迅速牽走母畜，令其爬跨假臺畜采精；

3.將待調(diào)教的公畜拴系在假臺畜附近，讓其目睹另一頭已調(diào)教好的公畜爬跨假臺畜，然后再誘其爬跨；

目錄公畜調(diào)教時應(yīng)注意的事項

1.調(diào)教過程中，要反復(fù)進行訓練，耐心誘導(dǎo)，切勿施用強迫、恐嚇、抽打

等不良剌激，以防止性抑制而給調(diào)教造成困難；

2.調(diào)教時應(yīng)注意公畜外生殖器的清潔衛(wèi)生；

3.最好選擇在早上調(diào)教，早上精力充沛，性欲盛；

4.調(diào)教時間、地點要固定，每次調(diào)教時間不宜長；

目錄(三)器械準備

采精所需要的器械要事先準備好，力求清潔無菌，在使用之前要嚴格消毒，每次使用后必須洗刷干凈。

目錄(四)種公畜的準備

種公畜采精前的準備，包括體表的清潔消毒和誘情（性準備）兩個方面。這和精液的質(zhì)量和數(shù)量都有密切的關(guān)系。采精前應(yīng)擦拭公畜下腹部，用0.1%高錳酸鉀溶液等洗凈其包皮外并抹干，擠出包皮腔內(nèi)積尿和其他殘留物并抹干。在采精前，需以不同誘情方法使公畜有充分的性興奮和性欲，一般采取讓公畜在臺畜附近停留片刻，進行幾次假爬跨。

目錄二、采精技術(shù)

目錄采精方法目錄雄性動物的采精方法很多，主要有假陰道法、手握法、按摩法、電剌激法等。

假陰道法適用于各種家畜和部分小動物手握法是當前公豬采精普遍應(yīng)用的方法按摩法主要用于禽類和犬類電剌激法主要用于野生動物的采精。

（一）假陰道法原理：它是模擬發(fā)情母畜陰道環(huán)境條件的人工陰道，誘導(dǎo)公畜射精而采集精液的方法。1.假陰道的結(jié)構(gòu)

假陰道是一筒狀結(jié)構(gòu)，主要由外殼、內(nèi)胎、集精杯及附件組成。外殼為一圓筒，由輕質(zhì)鐵皮或硬塑料制成，內(nèi)胎為彈性強、薄而柔軟無毒的橡膠筒，裝在外殼內(nèi)，構(gòu)成假陰道內(nèi)壁；集精杯由暗色玻璃或塑料制成，裝在假陰道的一端。此外，還有固定內(nèi)胎的膠圈，保定集精杯用的三角保定帶，充氣用的活塞和雙聯(lián)球等一些附件。各種家畜的假陰道結(jié)構(gòu)基本相同，但形狀和大小不一。目錄2.假陰道的準備

假陰道應(yīng)具備五個條件：

1)適宜溫度：采精時假陰道內(nèi)腔溫度應(yīng)保持在38-40℃，集精杯也應(yīng)保持34-35℃。

2)適當壓力：借助注入水和空氣來調(diào)節(jié)假陰道的壓力。

3)適當潤滑度：涂抹潤滑劑的部位是假陰道前段1/3-1/2處到外口周圍，但涂布不可過長過多。。

4)無菌：凡接觸精液的部分均須經(jīng)消毒。

5)無破損漏洞：假陰道不得漏水或漏氣。目錄牛羊假陰道安裝充氣后理想的狀態(tài)不太理想的狀態(tài)（但可以用）牛的假陰道法采精(二)手握法適用于豬的采精。是目前廣泛使用的采集的一種方法。操作時，采精員要戴上滅菌膠手套，蹲在假臺畜左側(cè)，待公豬爬跨臺畜后，當陰莖從包皮內(nèi)開始伸出時，立即緊握龜頭，待其抽送片刻后，鎖定公豬的龜頭。待陰莖充分勃起時，順勢牽引向前，就能導(dǎo)致公豬射精。另一只手持帶有一次過濾網(wǎng)的的集精杯收集精子濃厚部分的精液，其它稀薄精液及顆粒狀膠凍分泌物排出時可隨時棄掉。分段采精：棄掉含副性腺分泌物多、精子較少、精液清亮白色的第一段和精液較稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液濃、精子多、呈乳白色的第二段。

目錄例：犬的采精：第1階段：左膝單跪于公犬左側(cè)，右手隔公犬包皮套弄其陰莖，使球狀海綿體暴露于包皮外。一般公犬在球狀海綿體完全勃起的情況下即射出第1階段的精液。（尿道球腺分泌的水樣粘液，無精子）第2階段：繼續(xù)刺激暴露于包皮外的球狀海綿體。反復(fù)的握緊公犬球狀海綿體。持續(xù)2～5min，公犬會射出第2階段的精液。（來自睪丸，富含有精子，呈白色粘滑液體）在第二段射精后，公犬表現(xiàn)為抬起一只后腿企圖越過采精者的手臂。第3階段：采取與第2階段相同的刺激手法。大約持續(xù)3~5min，公犬會射出第3階段的精液。（前列腺分泌物，容量較多，含有少量精子）豬的拳握法采精(三)電剌激法本法是通過電流剌激公畜引起射精而采集精液的一種方法。適用于各種動物。電剌激采精器由電子控制器和電極探棒兩部分組成。電剌激采精應(yīng)將公畜以站立或側(cè)臥姿勢保定。保定后，剪去包皮及其周圍的被毛，并用生理鹽水沖洗拭干，然后將電極探棒經(jīng)肛門緩慢插入直腸，達到靠近輸精管壺腹部的直腸底壁，大家畜插入深度約20-25厘米，羊10厘米，犬10-15厘米，兔5厘米。然后調(diào)節(jié)控制器，選擇好頻率，開通電源。調(diào)節(jié)電壓時，由低開始，按一定時間通電及間歇，逐步增高剌激強度和電壓，直至公畜伸出陰莖，勃起射精，將精液收集于附有保溫裝置的集精瓶內(nèi)。

目錄三、采精頻率采精頻率是指每周對雄性動物的采精次數(shù)。為了既能最大限度地采集精液，又能維持其健康體況和正常生殖機能，必須合理安排采精頻率。為保證精液品質(zhì)，每周不超過兩次為宜目錄第三節(jié)精液品質(zhì)檢查目錄一、目的二、項目三、方法一、檢查的目的

1.檢查種公畜的配種能力

2.公畜的繁殖問題

3.確定精液可稀釋的倍數(shù)

4.檢查精液的處理方法是否正確

5.檢查精液產(chǎn)品的質(zhì)量返回目錄二、檢查的項目（一）直觀項目

（二）微觀項目返回目錄(一)直觀檢查項目射精量色澤氣味云霧狀pH值液態(tài)雜質(zhì)美蘭退色試驗(二)微觀檢查項目精子活力估測精子活力計數(shù)密度測定:計數(shù)板計數(shù)、比色計測定畸形率：形態(tài)畸形率、頂體畸形率返回目錄三、主要項目檢查方法（一）直觀項目檢查（二）微觀項目檢查（一）直觀項目檢查1.射精量2.色澤3.氣味4.云霧狀5.雜質(zhì)6.液化7.pH(1)射精量的測定方法(2)公畜的正常射精量(3)采精量不正常的原因1.射精量返回（一）(1)射精量的測定方法概念:射精量是指每次射精的體積測定:以連續(xù)3次以上正常采集到的精液的平均值代表測定方法:可用體積測量容器如刻度試管或量筒,也可用電子秤稱重近似代表體積返回1.(2)公畜的正常射精量影響射精量的因素:種類、睪丸大小質(zhì)地、季節(jié)、健康狀況不同畜種的正常射精量：畜種奶牛水牛馬豬綿羊山羊射精量ml5-103-630-100200-3000.8-1.20.5-1.5柱形圖犬2-15不同畜種的射精量比較原因（3）射精量不正常的原因現(xiàn)象原因過少采精過頻、性機能衰退、睪丸炎、發(fā)育不良過多副性腺發(fā)炎、假陰道漏水、尿潴留、采精操作不熟練返回1.2.色澤色澤：是指精液的顏色及其濃厚程度，它某種程度反應(yīng)精液是否正常，精子的濃度高低。正常的精液：豬：淺灰白至白色牛羊：乳白色或乳黃色

不正常精液原因分析正常精液特征依從濃到?。喝辄S-乳白-白色-灰白淡紅（鮮紅）生殖道下段出血或龜頭出血淡紅（暗紅）副性腺或生殖道出血綠副性腺或尿生殖道化膿褐、黃混有尿液3.氣味正常的精液：應(yīng)沒有很濃的氣味，或略帶動物特有的腥膻味腥味：有膿液臊味：有尿液或包皮液4.云霧狀是指新鮮精液在33-35℃溫度下，精子成群運動所產(chǎn)生的上下翻卷的現(xiàn)象。云霧狀的明顯程度代表高濃度的精液中精子活力的高低。云霧狀分級標準+++翻卷明顯而且較快++翻卷明顯但較慢+仔細看才能看到精液的移動-無精液移動（二）微觀項目檢查1.活力估測2.密度測定3.畸形率測定1.活力的估測(1)概念:37℃下,精液中前進運動精子占總精子數(shù)的百分率(2)主要測定方法:估測法活力測定時精液的稀釋用品例：牛精子活力檢查的程序載玻片預(yù)溫精液稀釋取樣檢查鏡檢活力估測活力記錄將恒溫加熱板放在載物臺上，打開電源并調(diào)整控制溫度至37℃，然后放在載玻片

將生理鹽水與精液等溫后，按1:10稀釋取10ul放在預(yù)溫后載玻片中間，蓋上蓋玻片用100倍和400倍觀察判斷視野中前進運動精子占的百分率按10級制評分和記錄評定精子活力多采用“十級一分制”，如果精液中有80％的精子作直線運動，精子活力計為0.8；如有50％的精子作直線運動，活力計為0.5，以此類推。評定精子活力的準確度與經(jīng)驗有關(guān)，具有主觀性，檢查時要多看幾個視野，取平均值。2）其他檢測精子活力方法存活時間及存活指數(shù)檢查

存活時間：指精子在體外的總生存時間。將稀釋液置于一定的溫度下（0℃或37℃），間隔一定時間檢查活率，直至無活動精子為止，所需的總小時數(shù)為存活時間。存活指數(shù)：指平均存活時間，表示精子的活率下降速度。

生存指數(shù)：指相鄰兩次檢查的平均活率與間隔時間乘積的總和。精子存活時間越長，生存指數(shù)越大，說明精子生活力越強，品質(zhì)越好。

2.精子的密度檢查(1)密度的概念及表示方法單位體積精液中所含的精子數(shù)表示方法:個/ml或億/ml(2)各種家畜精液的精子密度畜種牛羊豬馬雞密度億/ml8-1220-302-31.5-330-50(3)各種家畜精子密度比較（3）密度測定方法：①估測法②使用血球計數(shù)板測定法精子密度檢查（①估測法）取一小滴精液滴在清潔載玻片上，用另一載玻片輕推，使精液成一薄層，400×鏡下觀察密：視野中精子密度很大，彼此間隙很小，看不清楚各精子運動狀況（約≥10億/ml)中：精子間空隙明顯，彼此間約有一個精子長度的空隙（約2億～10億/ml)稀：精子間空隙超過1個精子長度（約≤2億/ml）②使用血球計數(shù)板測定法精子密度計數(shù)板(器)簡介精液的稀釋精液注入計數(shù)室精子計數(shù)精子密度計算精子密度計數(shù)板(器)簡介精子計數(shù)室長寬各1mm,面積1mm2高度0.1mm,體積0.1mm3由雙線或三線組成25個(5X5)中方格每個中方格內(nèi)有16個小方格(4X4)共計400個小方格精子計數(shù)室及一個中方格返回密度測定之精液稀釋將精液注入計數(shù)室前必須對精液進行稀釋,以便于計數(shù)稀釋的比例根據(jù)動物精液的密度范圍確定稀釋方法:用5-25ul移液器和100-1000移液器,在小試管中進行組合不同的稀釋.如牛精液稀釋100倍,為5ul原精+495ul稀釋液稀釋液:3%氯化鈉溶液,用以殺死精子,便于計數(shù)注入計數(shù)室前

各種家畜精液建議稀釋比例畜種牛羊豬馬雞稀釋倍數(shù)10020040404003%氯化鈉ul原精液ul49559955975-25195-519955返回精液注入計數(shù)室將潔凈的計數(shù)板放在載物臺上固定好,蓋上干凈的蓋玻片取25ul稀釋后的精液,將吸咀放于蓋玻片與計數(shù)板的接縫處緩慢注入精液,使精液依靠毛細作用吸入計數(shù)室注意：讓稀釋后的精液通過毛細作用自行吸入！用吸管稀釋后精液注入計數(shù)室共有兩個對稱的計數(shù)室用移液器注入精液返回精子計數(shù)將計數(shù)板固定在顯微鏡的推進器內(nèi)，用100倍放大找到計數(shù)室，再用400倍找到計數(shù)室的第一個中方格。計數(shù)左上角至右下角五個中方格的總精子數(shù)，以精子的頭部為準，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進行計數(shù)格線上的精子。進行精子計數(shù)的中方格數(shù)可以是四角一中心共5個中方格也可以是從左角到右下角五個中方格以圖示次序計數(shù)，精子的頭部為準，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進行計數(shù)格線上的精子。白色精子不計數(shù)返回計算精子密度精子密度=5個中方格總精子數(shù)×5×10×1000×稀釋倍數(shù)1ml原精液中的精子總數(shù)＝5個中方格內(nèi)精子數(shù)×5（25個中方格）×10（1mm3內(nèi)精子數(shù)）×1000（1ml=1000mm3）×稀釋倍數(shù)稀釋的比例羊1:200，5個中方格的總精子數(shù)是95，則精子密度=95×5×10×1000×200=9.5億/ml例：牛精子密度測定程序放計數(shù)板于載物臺上取樣稀釋精液精液注入計數(shù)室鏡檢精子計數(shù)密度計算計數(shù)板和蓋玻片一定要清潔取500ul3%氯化鈉于小試管中,加入5ul原精液,混合均勻取25ul小心地從計數(shù)板與蓋玻片的接縫中加入,使其自行吸入計數(shù)室中用100倍和400倍觀察計數(shù)五個中方格的總精子數(shù),計數(shù)以頭部為準,在格線上的數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右精子密度=5個中方格總精子數(shù)5×10×1000×100結(jié)束3、畸形率檢查1）染色劑0.5克龍膽紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，過濾至試劑瓶中備用。美蘭、純蘭或紅墨水2）稀釋稀釋液0.9%NaCl牛：1:10羊:1:20豬:1:23）抹片左手食指和拇指向上捏住載玻片兩端，使載玻片處于水平狀態(tài)，取10ul稀釋后的精液滴至載玻片右側(cè)。右手拿一載玻片或蓋玻片，使其與左手拿的載玻片呈向右的45度角，并使其接觸面在精液滴的左側(cè)。將載玻片向右拉至精液剛好進入兩載（蓋）玻片形成的角縫中，然后平穩(wěn)地向左推至左邊。抹片后，使其自然風干。4）固定在抹片上滴95%的酒精數(shù)滴，固定4分鐘，甩去多余的酒精5）染色將載玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龍膽紫或其它染色劑5-10滴，5分鐘后，用洗瓶或自來水輕輕沖去染色劑，甩去水分涼干。6）檢查畸形率將載玻片放在400或640倍的顯微鏡下進行觀察，共記錄若干個視野100-200個左右的精子。7）畸形率種類精子畸形率：是指畸形精子占視野中總精子數(shù)的百分率。精子畸形分為四類：頭部畸形：頭部巨大、瘦小、細長、缺損、雙頭、皺縮等。頸部畸形：頸部膨脹大、纖細、曲折、雙頸等。中段畸形：膨大、纖細、帶有原生質(zhì)滴等。主段畸形：彎曲、曲折、回旋、雙尾等。精子畸形率豬不超過18%，羊不超過14%，馬不超過12%。如果畸形率超過20%，則視為精液品質(zhì)不良，不能用做輸精?；尉右曇爸械幕尉与p頭和雙尾精子精子代謝能力測定（一）精液果糖分解測定（二）美藍褪色試驗（三）精子耗氧量測定（四）微生物檢查（一）精液果糖分解測定果糖分解測定通常用1億精子在37℃厭氧條件下每小時消耗果糖的毫克數(shù)表示。由于精子還可以利用果糖以外的其他簡單糖類，因此用含葡萄糖等稀釋液稀釋過的精液不能進行測定。

（二）美藍褪色試驗美藍是一種氧化還原劑，氧化時呈藍色，還原時無色。精子在美藍溶液中呼吸時氧化脫氫，美藍被還原而褪色。因此，根據(jù)美藍褪色時間的快慢即可估測出精子的密度和活力。

（三）精子耗氧量測定通常以1億個精子在37℃條件下每小時內(nèi)所消耗氧氣的微升（ul）數(shù)表示。一般家畜精液的耗氧量為5～22ul。（四）微生物檢查我國牛冷凍精液國家標準規(guī)定，解凍后的精液應(yīng)無病原微生物，每毫升中細菌菌落數(shù)不超過1000個。我國評定牛精液中細菌數(shù)通常采用平板培養(yǎng)法進行，求出每毫升原精液內(nèi)的細菌數(shù)。第四節(jié)精液的稀釋（一）營養(yǎng)物質(zhì)卵黃、蔗糖、葡萄糖等（二）保護性物質(zhì)緩沖物質(zhì)（檸檬酸鈉、磷酸鹽、Tris、EDTA）

抗凍物質(zhì)（甘油、乙二醇、二甲基亞砜（DMSO））

抗菌物質(zhì)（青霉素、鏈霉素）

（三）其他添加劑

酶類

激素類維生素類

二、稀釋液的種類和配制（一）稀釋液的種類1.現(xiàn)配現(xiàn)用稀釋液2.常溫保存稀釋液3.低溫保存稀釋液

4.冷凍保存稀釋液（二）稀釋液的配制

1.使用的一切用具，必須嚴格洗凈消毒

2.稀釋液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配

3.用蒸餾水或去離子水，要求新鮮

4.使用奶類要求新鮮，或脫脂奶粉為宜

5.抗生素、酶類、激素類、維生素等添加劑在使用前添加。

三、精液稀釋方法和稀釋倍數(shù)稀釋方法：原則：同溫，稀釋液加入精液，緩慢溫和稀釋倍數(shù)公牛：保證500萬有效精子數(shù)/ml公豬：0.5億/ml為原則，稀釋2～4倍馬、驢：稀釋倍數(shù)一般為2～3倍

第五節(jié)精液的保存精液的保存液態(tài)精液保存精液冷凍保存常溫保存15～25℃低溫保存0～5℃干冰（-79℃）和液氮（-196℃

）一、常溫保存1.保存溫度15～

25

℃2.原理主要利用一定范圍的酸性環(huán)境來阻止精子運動，或用凍膠環(huán)境來阻止精子運動以減少能量消耗，來保持其受精能力。3.方法：向稀釋液中充二氧化碳氣體精子在代謝過程中自己產(chǎn)生的CO2

稀釋液中加有機酸類物質(zhì)和充氮氣二、低溫保存1.保存溫度

0～

5℃比長溫保存時間長，但豬的不如常溫保存效果好。2.保存原理主要利用低溫抑制精子活動3.保存方法采用緩慢降溫，低溫保存三、冷凍保存1.冷源—干冰（-79℃）和液氮（-196℃

）2.原理：在0～

-60℃細胞內(nèi)水分子會形成冰晶。對細胞結(jié)構(gòu)產(chǎn)生損傷作用。在加入抗凍劑的情況下，快速降溫，越過上述有害溫區(qū)，在-60℃～-250℃溫區(qū)內(nèi)形成玻璃化。液氮的特性1）液氮是空氣中的氮氣經(jīng)壓縮、分離形成的一種無色、無味、無毒的液體，沸點溫度為-195.8℃。2）在常溫下，液氮沸騰，吸收空氣中的水氣形成白色煙霧。3）液氮具有很強的揮發(fā)性，當溫度升至18℃時，其體積可膨脹680倍。4）此外，液氮是一種不活潑的液體，滲透性差，無殺菌能力，但是-196℃的超低溫可使多數(shù)細菌、病毒停止繁殖。液氮罐精液冷凍操作規(guī)范（一）采精及精液品質(zhì)檢查精液冷凍效果與精液品質(zhì)密切相關(guān)。因此，用作冷凍的公畜精液，品質(zhì)應(yīng)比較優(yōu)良，活率高，密度大。一般原精活力在0.8級以上，密度中等以上效果最好。

（二）精液的稀釋

1.一次稀釋法：將含有甘油、卵黃等的稀釋液按一定比例加入精液中，適合于低倍稀釋。2.二次稀釋法：為避免甘油與精子接觸時間過長而造成的危害，采用兩次稀釋法較為合理。首先用不含甘油的稀釋液（第一液）對精子進行最后稀釋倍數(shù)的半倍稀釋，然后把該精液連同第二液一起降溫至0-5℃(全程1h左右)，并在此溫下作第二次稀釋。

（三）平衡采用一次稀釋法時，由于稀釋溫度為30℃，需經(jīng)1-2h緩慢降溫至0-5℃，以防冷休克的發(fā)生。平衡是降溫后，把稀釋后的精液放置在0-5℃的環(huán)境中停留2-4h，使甘油充分滲入精于內(nèi)部，起到膜內(nèi)保護劑作用的過程。4、精液的分裝

現(xiàn)行凍精常采用塑料細管、顆粒、玻璃安瓿、塑料薄膜(袋)、載片及膠囊等分裝方法。（1）塑料細管凍精

把平衡后的精液分裝到塑料細管中，細管的一端塞有細線或棉花，其間放置少量聚乙烯醇粉(吸水后形成活塞)，另一端封口，冷凍后保存。細管的長度約13cm，容量有0.25、0.5或1.0ml?，F(xiàn)生產(chǎn)中牛的凍精多用0.25ml劑型。細管凍精具有不受污染、容易標記、易貯存、適于機械化生產(chǎn)等特點，是最理想的劑型。4、精液的分裝

（2）顆粒凍精將精液滴凍在經(jīng)液氮致冷的金屬網(wǎng)或塑料