普通植物病理學(xué)實驗

實驗二、真菌一般形態(tài)觀察和臨時玻片制備【字號：大中小】【打印此頁】【關(guān)閉窗口】一、 目的和要求熟悉不同臨時玻片制作方法；通過觀察，認(rèn)識病原真菌的營養(yǎng)體及其變態(tài)，認(rèn)識真菌的子實體、有性繁殖、無性繁殖產(chǎn)生的各種類型飽子。二、 實驗用具挑針、刀片、木板、酒精燈、火柴、載玻片、蓋玻片、紗布、(棉藍(lán))乳酚油、二甲苯、顯微鏡、擦鏡紙、吸水紙等。三、 內(nèi)容與方法臨時玻片的制作臨時玻片制作方法很多，如涂、撕、粘、挑和切片等，可以根據(jù)病原物的類型選擇使用。涂抹法：細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)物常用涂抹法制片。將細(xì)菌或酵母菌的懸浮液均勻地涂在潔凈的載玻片上，在酒精燈火焰上烘干、固定，再加蓋玻片封固。加蓋玻片前還可進(jìn)行染色處理，使菌體或鞭毛著色而易于觀察。撕取法：用小金屬鑷子仔細(xì)撕下病部表皮或表皮毛制成臨時玻片。粘貼法：將塑料膠帶紙剪成邊長5mm左右的小塊(注意膠帶上不要印有指印)，使膠面朝下貼在病部，輕按一下后揭下制成玻片。挑取法：用挑針從病組織或基物(如培養(yǎng)基)上挑取表面的霉?fàn)钗?、粉狀物或飽子團(tuán)制成玻片。組織透明法：將少量病組織材料切成細(xì)絲后放在載玻片上，滴加乳酚油后在酒精燈上徐徐加熱至蒸氣出現(xiàn)。如此處理數(shù)次使組織透明，冷卻后加蓋玻片進(jìn)行鏡檢。此法可以觀察到病原物在寄主內(nèi)的原有狀態(tài)。徒手切片：徒手切片時選取病狀典型、病征明顯的病組織材料，先在病征明顯處切取病組織小塊(邊長5—8mm)，放在小木塊上，用食指輕輕壓住，隨著手指慢慢地后退，用刀片的刀尖將壓住的病組織小塊切成很薄的絲或片，用沾有浮載劑的挑針或接種針挑取薄而合適的材料放在一干凈載玻片上的浮載劑液滴中央，蓋上蓋玻片，仔細(xì)擦去多余的浮載劑(注意浮載劑過多會使觀察物出現(xiàn)晃動不穩(wěn)定現(xiàn)象)，即制成一張臨時玻片。浮載劑：水：溢菌、線蟲活動、真菌飽子萌發(fā)、大小測量優(yōu)點：方便缺點：產(chǎn)生氣泡；易干燥乳酚油：除上述外均可用。優(yōu)點：殺菌固定、飽子膨脹復(fù)原、組織透明缺點：不易封固、有毒取小麥白粉病葉片，分別用上述6種方法制片，觀察白粉病菌的分生飽子梗、分生飽子、菌絲和吸器。并比較每種方法分別適于觀察白粉菌的什么形態(tài)特征。病原真菌的營養(yǎng)體用挑針挑取平板上培養(yǎng)好的瓜果腐霉病菌(Pythiumaphanidermatum)、立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)和鏈格飽菌(Alternariasp.)的菌絲體，用蒸餾水作浮載劑，制臨時玻片鏡檢，觀察菌絲有無隔膜？菌絲體直徑變化是否明顯？顏色有無差別？1真菌營養(yǎng)體的變態(tài)吸器：吸器的形態(tài)有圓球狀、棒狀、裂片狀、掌狀、根狀等。觀察用撕取法制片的小麥白粉病菌(B/umeriagraminis)吸器形態(tài)，注意吸器的形狀和在細(xì)胞內(nèi)的位置。為便于清楚觀察，也可以用棉藍(lán)乳酚油作為浮載劑。假根：是由菌絲分化的根狀分枝。挑取甘薯軟腐病菌(Rhizopusstolonifer)平板培養(yǎng)物制片鏡檢，觀察在飽囊?；康募俑男螒B(tài)和顏色。菌核：是菌絲體的菌絲糾結(jié)而成的堅固的顆粒狀休眠體。觀察油菜菌核病菌(Sclerotiumsclerotiorum)的菌核和小麥麥角病菌(Clavicepspurpurea)的菌核標(biāo)本。比較兩種菌核的大小、形狀和色澤有何不同？根狀菌索：許多菌絲體平行生長并糾結(jié)成繩索狀，稱為根狀菌索。在示范鏡下觀察蘋果或甘薯紫紋羽病菌(Helicobasidiumpurpureum)的根狀菌索。子座：由菌絲體或由菌絲體和寄主組織共同組成的著生子實體的墊狀物。在子座上形成無性或有性飽子。在顯微鏡下觀察麥角病菌(Clavicepspurpurea)頭狀子座的切片，注意其內(nèi)部結(jié)構(gòu)與菌核有何區(qū)別，或鏡檢大葉黃楊葉斑病菌或紫荊葉斑病菌(Cercosporasp.)的墊狀子座。病原真菌的繁殖體一一子實體3.1無性抱子游動飽子囊和游動飽子：鞭毛菌亞門真菌的無性繁殖器官是飽子囊。大多數(shù)鞭毛菌飽子囊可釋放出具鞭毛、在水中能游動的游動飽子，故其飽子囊又稱為游動飽子囊。鏡檢腐霉菌(Pythiumsp.)和疫霉菌(Phytophthorasp.)的游動飽子囊形態(tài),注意飽囊梗與菌絲有無區(qū)別。飽子囊和飽囊飽子：接合菌亞門真菌的無性繁殖器官是飽囊飽子。鏡檢根霉菌(Rhizopusspp.)、毛霉菌(Mucorspp.)、犁頭霉菌(Absidiaspp.)的飽子囊、飽囊飽子。分生飽子：半知菌亞門真菌和子囊菌的無性世代繁殖時都可產(chǎn)生分生飽子。分生飽子多著生在分生飽子梗上。分生飽子梗有色或無色、散生或聚生，或著生在分生飽子座、分生飽子盤或分生飽子器內(nèi)。采用挑、刮或切片的方法制作臨時玻片，觀察下列病原菌分生飽子的顏色、分隔；分生飽子梗的形態(tài)、顏色，是否分枝及分枝的類型、著生位置等。玉米小斑病菌(Bipolarismaydis)花生黑斑病菌(Cercosporaarachidicola)小麥白粉病菌(無性世代)(Oidiummonilioides)柑桔青霉病菌(Penicilliumitalicum)棉花黃萎病菌(Verticilliumdahliae)稻瘟病菌(Pyriculariaoryzae)馬鈴薯早疫病菌(Alternariasolani)厚壁飽子：又稱厚垣飽子。由菌絲中個別細(xì)胞膨大、細(xì)胞壁加厚而形成的一種厚壁飽子。對不良環(huán)境的抵抗能力較強。挑取棉花枯萎病菌(Fusariumoxysporum)或樟疫霉(Phytophthoracinnarnomi)的培養(yǎng)物制片鏡檢，觀察厚垣飽子的形狀、顏色和飽子壁的厚度。2有性抱子卵飽子：是鞭毛菌亞門真菌產(chǎn)生的有性飽子，常由形態(tài)、大小不同的雌、雄性器官交配形成。卵飽子通常形成于藏卵器內(nèi)，每個藏卵器內(nèi)可包含1至多個卵飽子，其數(shù)目因真菌種類不同而異。挑取疫霉(Phytophthorasp.)的培養(yǎng)物(連同培養(yǎng)基)制片、鏡檢觀察藏卵器的形態(tài)、色澤、壁有無飾紋或光滑；雄器形態(tài)及其位置；卵飽子形態(tài)、每個藏卵器內(nèi)卵飽子的數(shù)目、卵飽子是否充滿藏卵器。(2)接合飽子：是接合菌亞門真菌產(chǎn)生的有性飽子，由兩個形狀和大小相似的雌、雄配子囊結(jié)合而成。挑取根霉(Rhizopussp.)、毛霉(Mucorsp.)或犁頭霉(Absidiasp.)正、負(fù)菌株在PDA培養(yǎng)基上交配7-10天后的培養(yǎng)物制片、鏡檢，觀察接合飽子的形狀、表面的飾紋、色澤、配囊柄的形狀及有無絲狀附屬物。(3)子囊飽子：子囊菌亞門真菌的有性飽子，產(chǎn)生在子囊內(nèi)。子囊飽子有色或無色、單胞或多胞，具多種形狀。采用挑、刮或切片的方法制作臨時玻片或直接觀察永久玻片，鏡檢下列病原物。觀察子囊飽子的形態(tài)、顏色；子囊的形態(tài)；子囊果的類型。桃縮葉病菌(Taphrinadeformans)小麥白粉病菌(Erysiphegraminis)桑里白粉病菌(Phyllactiniacorylea)小麥赤霉病菌(Gibberellazeae)蘋果樹腐爛病菌(Valsamali)麥角病菌(Clavicepspurpurea)(4)擔(dān)飽子：擔(dān)子菌亞門真菌產(chǎn)生的有性飽子。擔(dān)飽子產(chǎn)生在擔(dān)子上。觀察膠銹菌(Gymnosporangiumsp.)冬飽子萌發(fā)形成的擔(dān)子及擔(dān)飽子的形態(tài)。四、作業(yè)與思考題(1)認(rèn)識病原真菌菌絲、無性飽子、有性飽子有何意義?說明針對不同的病征類型在顯微鏡觀察時應(yīng)采用何種制片方法?填圖，注明圖1中各部分的名稱。圖1病原真菌子實體形態(tài)圖(填注各部分名稱)1.鞭毛菌2.接合菌3.子囊菌4.擔(dān)子菌實驗六、半知菌亞門真菌及其所致病害【字號：大中小】【打印此頁】【關(guān)閉窗口】一、 目的和要求通過對半知菌中各類型代表菌的觀察，了解半知菌的分類依據(jù)，掌握半知菌主要屬的形態(tài)特征及其所致主要病害的癥狀特點，進(jìn)一步學(xué)習(xí)和訓(xùn)練徒手切片技能。實驗分兩次進(jìn)行。二、 材料和用具顯微鏡、擦鏡紙、裝有浮載劑的滴瓶、挑針、刀片、小墊板、載玻片、蓋玻片、小紗布。相關(guān)病害的標(biāo)本或病菌的培養(yǎng)物或永久玻片。三、 內(nèi)容與方法1絲飽綱(Hyphornycetes)梨飽屬(Pyricularia):取稻瘟病(P.oryzae)的發(fā)病小枝?；蚯o節(jié)保濕，挑取病部灰白色霉層制片鏡檢，觀察分生飽子梗和分生飽子的形態(tài)。認(rèn)真觀察稻瘟病標(biāo)本的癥狀，扼要描述稻瘟病的幾種癥狀特征和類型。粉飽屬(Oidium):引起植物白粉病。觀察小麥白粉病(Oidiummonilioides)標(biāo)本的癥狀。挑取少許粉狀物制片鏡檢觀察，注意分生飽子梗和分生飽子的形態(tài)及分生飽子的排列方式。青霉屬(Penicillium):柑桔青霉菌(P.italicum)是柑桔貯藏和運輸期中的重要病原菌。觀察由青霉菌引起的柑橘、蘋果、梨等果腐癥狀特點。挑取發(fā)生果腐病水果表面白色菌絲附近的青色霉層制片，觀察青霉菌分生飽子梗及飽子，注意觀察分生飽子梗的分枝和頂端產(chǎn)飽細(xì)胞的形態(tài)特征。尾飽屬(Cercospora):仔細(xì)觀察由尾飽屬真菌引起的花生黑斑病(C.personata)的癥狀特點。取花生黑斑病葉片做徒手切片，或取花生黑斑病菌永久玻片鏡檢觀察子座、分生飽子梗和分生飽子的形態(tài)特征。注意觀察分生飽子梗著生的方式及其頂端的形態(tài)、分生飽子梗和分生飽子的顏色及分生飽子的形狀及分隔情況。鐮飽屬(Fusarium):觀察由棉花枯萎病菌(F.oxysporumf.sp.vasinfectum)、小麥赤霉病菌(F.graminearum)和水稻惡菌病菌(F.moniliforme)引起的植物病害癥狀特點。觀察上述三種病原菌培養(yǎng)物的形態(tài)，注意培養(yǎng)物(基)的顏色變化。挑取培養(yǎng)物制片觀察大型分生飽子(鐮刀形，多細(xì)胞，基部有時有一顯著的突起，稱足胞)和小型分生飽子(單胞，無色，橢圓形)，觀察有無分生飽子座。有的鐮飽菌還產(chǎn)生一種厚壁飽子(厚垣飽子)，是病菌在不良條件下形成的休眠飽子，抵抗不良環(huán)境的能力強。觀察菌絲上或大型分生飽子上有無厚垣飽子。輪枝飽屬(Verticillium):大麗輪枝菌(V.dahliae)是引起棉花黃萎病的病原菌。觀察人工培養(yǎng)的大麗輪枝菌菌落和微菌核形態(tài)特征，用刀片將菌絲塊切成一薄片，側(cè)放在載玻片上，置于低倍鏡下鏡檢，調(diào)節(jié)微調(diào)可見到無色分生飽子梗，主軸分成幾節(jié)，節(jié)處有2至多個分枝，每個分枝和主軸的頂端著生有多個分生飽子，形成分生飽子球。分生飽子單細(xì)胞，無色，長橢圓形。觀察棉花黃萎病標(biāo)本癥狀，注意維管束變色，并與棉花枯萎病維管束變色對比觀察。鏈格飽屬(Alternaria):茄鏈格飽(A.solani)引起馬鈴薯和番茄早疫病，觀察早疫病病葉上的褐色同心輪紋病斑，病斑上有黑色霉?fàn)钗铩＿x擇有褐色同心輪紋病斑處，徒手切片制成臨時玻片鏡檢。觀察分生飽子梗和分生飽子的形態(tài)、顏色。注意分生飽子頂端有喙?fàn)罴?xì)胞。離蠕飽屬(Bipolaris):玉蜀黍離蠕孢(B.maydis)引起玉米小斑病。觀察玉米小斑病標(biāo)本的癥狀。取玉米小斑病葉制成臨時玻片，或用玉米小斑病菌的永久玻片鏡檢。觀察：分生飽子梗的著生情況，分生飽子梗的顏色、有無分枝和曲膝狀形態(tài)；分生飽子的顏色、多胞、紡錘形常向一方彎曲的形態(tài)特點；臍點稍微突出，平截狀。分生飽子萌發(fā)時，兩端細(xì)胞萌發(fā)。此外，稻離蠕飽菌(B.oryzae)引起水稻胡麻斑病，也可作為鏡檢材料。突臍蠕飽屬(Exserohium):大斑病突臍蠕飽(E.turcicum)引起玉米大斑病。觀察玉米大斑病標(biāo)本的癥狀特點，并在病斑大小和形狀上與玉米小斑病進(jìn)行比較。取玉米大斑病葉制成臨時玻片，或用玉米大斑病菌的永久玻片鏡檢。觀察分生飽子梗和分生飽子的顏色、分隔和形態(tài)特征。注意分生飽子的臍點明顯突出于基細(xì)胞外。分生飽子萌發(fā)時兩端細(xì)胞萌發(fā)。(10)凹臍蠕飽屬(德氏霉屬Drechslera):該菌寄主范圍窄，侵染禾本科植物和其他植物葉，引起葉斑病。觀察小麥葉枯病(D.tritici)標(biāo)本，注意癥狀特點；鏡檢小麥黃斑德氏霉病制備片，觀察分生飽子梗單生或簇生，褐色具隔，上部呈曲膝狀，飽痕明顯，分生飽子圓柱形，兩端鈍圓，淡褐色，多細(xì)胞，臍點腔孔狀，凹陷于基細(xì)胞內(nèi)。萌發(fā)時每個細(xì)胞均可伸出芽管。有性態(tài)為核腔菌屬(Pyrenophora)。注意其與平臍蠕飽屬和突臍蠕飽屬的區(qū)別.(11)絲核菌屬(Rhizoctonia):本屬真菌不產(chǎn)生任何無性飽子。茄絲核菌(R.solani)侵染多種植物幼苗或幼莖莖基部引起立枯病，侵染水稻、玉米和小麥等引起紋枯病。觀察水稻紋枯病標(biāo)本、棉花立枯病標(biāo)本癥狀特點。觀察絲核菌人工培養(yǎng)物形態(tài)，幼齡菌絲無色，后期呈褐色。挑取培養(yǎng)的水稻紋枯病菌菌絲體，制片觀察菌絲的顏色、分枝處的縊縮、分枝附近的隔膜和分枝間形成的角度。注意初生菌絲和次生菌絲分枝間的角度常有不同。2腔飽綱(Coelomycetes)炭疽菌屬(Colletotrichum):觀察棉花炭疽病(C.gossypii)、辣椒炭疽病(C.piperatum)、豆類炭疽病(C.truncatum)的病害標(biāo)本癥狀特征。比較癥狀類型、病斑特點及病征。選取任一炭疽病材料做徒手切片，鏡檢。注意有無剛毛？剛毛的顏色如何？剛毛有無分隔？如何將剛毛與植物的表皮毛區(qū)分開？分生飽子盤的形狀、分生飽子梗的形狀和分布？分生飽子的顏色和形狀？分生飽子有無分隔？擬盤多毛飽屬(Pestalotiopsis):以大葉黃楊葉斑病或枇杷灰斑病(P.funerea)為材料，選取粗大的小黑點，徒手切片，鏡檢。觀察分生飽子的分隔數(shù)、分生飽子各細(xì)胞的顏色變化、分生飽子頂端附屬絲根數(shù)和形狀。注意：分生飽子分隔的多少是區(qū)分?jǐn)M盤多毛飽屬和盤多毛飽屬(Pestalotia)的重要標(biāo)志，盤多毛飽屬分生飽子5個隔膜，6個細(xì)胞;擬盤多毛飽屬4個隔膜5個細(xì)胞。莖點霉屬(Phoma):取葡萄黑腐病(Phomaviticola)材料,徒手切片置于顯微鏡下檢查，分生飽子器球狀或扁球狀，內(nèi)壁有分生飽子梗。分生飽子單胞，無色。觀察葡萄黑腐病和水稻谷枯病癥狀。葉點霉屬(Phyllosticta):該屬和莖點霉屬在形態(tài)上相似，比較難以區(qū)分。傳統(tǒng)上把寄生植物莖上的，產(chǎn)生分生飽子器，具有小型、無色單細(xì)胞分生飽子的真菌鑒定為莖點霉屬，把寄生植物葉片的該類真菌鑒定為葉點霉屬。取梔子花葉斑病葉片，觀察癥狀特征，并做徒手切片，鏡檢，觀察病菌的分生飽子器、分生飽子的形態(tài)特征。大莖點菌屬(Macrophoma):觀察大葉黃楊病葉材料，作徒手切片，鏡檢。觀察分生飽子器、分生飽子梗和分