抗核抗體檢測及臨床意義張瑾

抗核抗體檢測及臨床意義張瑾第1頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月

風濕免疫性疾病診斷方法癥狀、體征自身抗體影像學檢查病理

第2頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月風濕免疫性疾病相關(guān)自身抗體抗核抗體譜（ANAs）類風濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)抗體(RF,抗CCP等)抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）抗自身免疫性肌炎譜自身免疫性肝病相關(guān)抗體譜抗磷脂抗體譜第3頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗核抗體譜檢測的意義有助于彌漫性結(jié)締組織病的分類和診斷抗Sm抗體是SLE的標記抗體；

抗Scl-70抗體是SSc的標記抗體；抗Jo-1抗體是PM/DM的標記抗體；觀察疾病活動度和治療反應(yīng)抗dsDNA抗體研究發(fā)病機理抗核小體抗體、抗dsDNA抗體第4頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月基本概念ANA熒光核型ANAs中的常見抗體第5頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗核抗體自身抗體：指抗自身組織、器官、細胞及其成分的抗體ANA：指抗細胞核成分（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）的抗體。ANA存在一個譜。ANA新概念：抗核酸(Nucleicacid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗體總稱某些核抗原成分在核仁和胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更豐富

(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)第6頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA檢測方法-IIF法ANA滴度ANA核型第7頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA滴度的意義結(jié)締組織病的粗篩（>1:160）陽性標本還需進一步識別感染、腫瘤及5%正常人可出現(xiàn)低滴度陽性ANA陰性基本可以除外SLEANA滴度與疾病活動性無明確相關(guān)性第8頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光顯微鏡下ANA的染色型別均質(zhì)型（H）核膜型（M)斑點型（S）核仁型（N）著絲點型（ACA）胞漿型（C）混合型第9頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月

均質(zhì)型(H)抗組蛋白抗ds/ssDNA抗核小體主要出現(xiàn)在SLE中第10頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月均質(zhì)型

(H)第11頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月核膜型

(M)主要與抗dsDNA有關(guān)

與抗原底物片固定方法和備制過程有關(guān)出現(xiàn)在SLE中部分與抗核包膜蛋白有關(guān)

抗板層素抗gp210

出現(xiàn)在PBC中

第12頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月核膜型

(M)第13頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月與抗ENA成分有關(guān)

抗Sm

抗RNP

抗SS-A

抗SS-B出現(xiàn)在SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM等

斑點型(S)第14頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月斑點型(S)第15頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月與抗核仁蛋白有關(guān)抗Scl-70

抗RNA多聚酶I

抗PM-Scl出現(xiàn)在SSc中核仁

型(N)第16頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月核仁

型(N)第17頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月與抗著絲點染色質(zhì)有關(guān)存在于有絲分裂期出現(xiàn)在SSc、CREST綜合征等中著絲點

型(ACA)第18頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月著絲點

型(ACA)第19頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月與抗胞漿成分有關(guān)抗核糖體P蛋白（rRNP）：出現(xiàn)在SLE中抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ抗信號識別顆粒（SRP)抗線粒體：出現(xiàn)在PBC中抗高爾基體抗溶酶體等等

胞漿型

(C)見于PM/DM第20頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月

胞漿型(C)第21頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA熒光核型小結(jié)均質(zhì)型（H）：像大餅，SLE相關(guān)核膜型（M)：像圈圈，SLE相關(guān)斑點型（S）：像藕片，抗ENA核仁型（N）：像紐扣，SD相關(guān)著絲點型（ACA）：像滿天星，抗ACA胞漿型（C）：像空心大餅,SLEPM/DMPBC相關(guān)混合型：稀釋后檢測有助于區(qū)分第22頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗核抗體譜（ANAs）ANAs抗核不溶成分抗核可溶成分（抗ENA）抗染色體DNA蛋白抗核仁抗體

抗DNA抗體

抗核小體抗體

抗組蛋白

H1,H2A,H2B,H3,H4

抗Sm,U1RNP,SSA,SSB抗Scl-70,Jo-1,PM-1抗rRNP,PCNA…….dsDNAssDNA抗著絲點抗體（ACA)抗5sRNA第23頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗dsDNA檢測方法以短膜蟲或馬疫錐蟲為底物的間接免疫熒光法(IIF)：≥1:5短膜蟲或馬疫錐蟲的動基體內(nèi)含有天然純dsDNA，未經(jīng)人工處理，不含組蛋白與

ssDNA，抗原性純一特異。優(yōu)點：特異性好

第24頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗dsDNA檢測方法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）:≥100IU/ml

優(yōu)點：敏感性最高

缺點：過于敏感，同時可能檢測到ssDNA抗體和低親和力dsDNA抗體,而這兩種致病力均不強

放射免疫法(Farr):≥20%

優(yōu)點：對高親和度DNA抗體的檢測優(yōu)于CL-IIF

缺點：具有放射性，對技術(shù)人員身體造成一定影響蛋白印跡法（WB）

缺點：dsDNA抗原在純化包備過程中可變性解鏈，變成ssDNA,導致假陽性結(jié)果不同方法檢測SLE患者抗dsDNA抗體的結(jié)果：everythingispossible至少用兩種方法做（報告結(jié)果時注明方法學）,互為補充。如：IIF法+ELISA法

第25頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月第27頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗dsDNA抗體臨床意義SLE的血清特異性抗體多有致病性（IgG型），與親和力（高）有關(guān)與LN與SLE疾病活動性相關(guān)，活動期達90％可用于SLE疾病活動期判斷＆藥物療效觀察與SLE急性皮疹、血管炎、漿膜腔炎、白細胞減少等有關(guān)第28頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月第29頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗組蛋白抗體（AHA）

（酶聯(lián)免疫吸附法X2SD)可出現(xiàn)于多種結(jié)締組織病，不具有診斷特異性SLE：50%

活動期SLE可達90.2%

與LN相關(guān)，與SLE疾病活動性存在一定意義的相關(guān)性藥物性狼瘡（DIL）：>90%

如：異煙肼、苯妥因鈉、青霉胺、雌激素等

僅有AHA而無其他ANA，強烈支持DIL其他結(jié)締組織?。?3-30%

如：RA、PBC、SSc等

第30頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月核小體是真核細胞染色質(zhì)的基本復制單位，由組蛋白與DNA組成。參與SLE發(fā)病機制：多克隆B細胞活化劑產(chǎn)生ANuA，先于其他ANA促進抗dsDNA與AHA形成參與LN的發(fā)生

抗核小體抗體（ANuA）第31頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗核小體抗體臨床意義SLE標記性/高特異性自身抗體敏感性：58%-66%（優(yōu)于抗dsDNA及抗Sm）特異性：98%-100%（與抗dsDNA相當）用于SLE的早期診斷

ANuA的產(chǎn)生早于抗dsDNA、AHA

抗dsDNA陰性者有1/4～1/2ANuA陽性與LN相關(guān)，用于SLE疾病活動性監(jiān)測第32頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月ANuA、抗dsDNA、AHA聯(lián)合檢測意義第33頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ENA抗體

extractablenuclearantigen可提取性核抗原成分：核酸與核蛋白，不含染色質(zhì)成分功能：參與細胞內(nèi)DNA復制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯合成來源：無種屬差異，有組織不均一性理化特性：對溫度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A）意義：抗ENA抗體是ANAs中范圍最廣、最為重要的一簇抗體，與疾病活動性大多無相關(guān)第34頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月

抗ENA抗體檢測方法免疫雙擴散法(ID)對流免疫電泳法(CIE)免疫印跡法(IBT)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Proteinchip）第35頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月

抗Sm抗體與抗U1RNP抗體靶抗原：位于細胞核內(nèi)的一組含尿嘧啶豐富的核糖核蛋白，Sm和U1RNP是同一分子復合物中的不同位點第36頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗Sm抗體與抗U1RNP抗體抗Sm：SLE的標記性抗體，是前瞻性及回顧性診斷的指標。陽性率低：SLE（30%）抗U1RNP：多種CTD均可出現(xiàn)，與手指腫脹、雷諾現(xiàn)象、肌炎、指端硬化等相關(guān)，但腎炎發(fā)生率低。

陽性率：40-60%，其中SLE(30-40%),SSc(14%),pSS(12%),PM/DM(15%)高滴度抗U1RNP+抗Sm-MCTD抗U1RNP+抗Sm+SLE抗U1RNP-抗Sm+實驗室誤差?U1RNP丟失?第37頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗rRNP抗體靶抗原：胞漿中60S核糖體大亞基上的磷酸化蛋白

第38頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗rRNP抗體SLE的高度特異性抗體，與SLE腦病相關(guān)常在SLE活動期存在,但不會隨病情的緩解立即消失,可持續(xù)1-2年后才轉(zhuǎn)陰。陽性率：24%可出現(xiàn)在SLE早期（ANA及抗dsDNA陰性）

第39頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗SSA與抗SSB抗體靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相鄰結(jié)構(gòu)在不同的細胞周期，在細胞內(nèi)的定位不同（細胞核內(nèi)和胞漿中均可存在）pSS的SS-A存在于細胞核內(nèi)

SLE的SS-A存在于胞漿中

SS-B主要位于細胞核內(nèi)45KD47KD48KD第40頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗SSA與抗SSB抗體抗SS-A：結(jié)締組織病中出現(xiàn)頻率最高的抗體（60-75%），見于pSS（75%）SLE（25%）

RA（10%）SSc（24%）PBC（20%）等抗SSB：常與抗SSA相伴出現(xiàn)，診斷pSS更特異，見于

pSS（40%）、SLE（10%）臨床意義：與新生兒狼瘡和先天性心臟傳導阻滯、平滑肌受累、光過敏、血管炎、皮損、紫癜、淋巴結(jié)腫大、WBC減少有關(guān)ANA陰性的SCLE：常為抗SSA抗體陽性。第41頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月第42頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月第43頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗Jo-1抗體(抗PL-1抗體)靶抗原：組氨酸t(yī)RNA合成酶胞漿中的磷酸蛋白第44頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗Jo-1抗體(抗PL-1抗體)PM/DM的標記抗體，陽性率20-30%抗體效價與疾病活動性相關(guān)抗Jo-1抗體綜合征：急性發(fā)熱,對稱性關(guān)節(jié)炎,技工手,雷諾現(xiàn)象,肌炎（相對輕）,肺間質(zhì)病變其他抗合成酶抗體：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ第45頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ScL-70抗體靶抗原：DNA拓樸異構(gòu)酶I的降解產(chǎn)物主要存在核仁中SSc的標記抗體，陽性率20-30%多見于dSSc，病情進展快，提示預后不良與ILD、彌漫性皮膚硬化有關(guān)，而PAH少見第46頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月主要靶抗原：著絲點蛋白-B多見于ISSc，病程緩慢，提示預后較好CREST綜合征：軟組織鈣化（C）,雷諾現(xiàn)象（R）,食道功能障礙（E）,指端硬化（S）,毛細血管擴張（T），但并非標記抗體，也見于孤立性雷諾現(xiàn)象、SS、PBC、AIH等國外文獻：與PAH相關(guān)，而ILD少見中國人群：未發(fā)現(xiàn)與PAH相關(guān)，但ILD少見白伊娜，王遷等.中國系統(tǒng)性硬化癥患者硬皮病相關(guān)自身抗體的檢測及其臨床意義.中華微生物學和免疫學雜志.2011（5）:452-455.抗著絲點抗體(ACA)第47頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月TakeHomeMassageANA熒光核型對抗體性質(zhì)范圍有一定提示作用，尤其在靶抗原陰性時。ANA陰性而靶抗原陽性主要見于抗胞漿成分抗體，如：SS-A、Jo-1、rRNP、線粒體等?？购巳市涂贵w常與SSc有關(guān)?？咕|(zhì)型或核膜型抗體常與SLE有關(guān)。第48頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月TakeHomeMassage抗dsDNA：SLE特異性抗體，與LN及疾病活動度有關(guān)，至少兩種方法聯(lián)合檢測（如：

IIF法+ELISA法）?？购诵◇w、抗組蛋白、抗dsDNA三抗體陽性者強烈提示增殖性LN。與疾病活動性相關(guān)的抗體：抗dsDNA、抗核小體、抗組蛋白、抗Jo-1、抗rRNP與預后相關(guān)的抗體：抗Scl-70（差）、ACA（好）第49頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月案例1女性，34歲游走性多關(guān)節(jié)痛，雷諾現(xiàn)象半年RF56U/L；抗CCP抗體陰性；ANA1：320胸部CT：輕度肺間質(zhì)病變診斷？治療？（核仁型）UCTDILD發(fā)展為

SSc可能性大Pred+CTX第50頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月案例2男性，50歲雙腕關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象半年ANA全套：陰性；抗CCP、RF：陰性胸部CT：輕度肺間質(zhì)病變右腕關(guān)節(jié)MRI：骨髓水腫和滑膜炎診斷？

復查：ANA陰性，抗Jo-1弱陽性診斷：抗Jo-1抗體綜合征Pred+TⅡ第51頁，課件共56頁，創(chuàng)作于2023年2月案例3女性32歲手指關(guān)節(jié)痛2月

ANA（+）S1:80

抗SSA（+++）135抗Ro52（+++）11