第三章實驗室生物安全

第三章實驗室生物安全第1頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第2頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三章

實驗室生物安全第3頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月本章內(nèi)容第一節(jié)實驗室生物安全概述

1第二節(jié)生物安全實驗室與設(shè)備要求2第三節(jié)生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范3第4頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo)：

1.掌握：實驗室生物安全和實驗室生物安全保障的概念；BSL-2實驗室安全操作技術(shù)規(guī)范；BSL-1、BSL-2在安全設(shè)備、個體防護(hù)方面的不同。2.熟悉：病原微生物危害程度分類等級和實驗室生物安全防護(hù)水平分級；感染性物質(zhì)的操作與處理。

3.了解：臨床微生物實驗室布局及設(shè)計和建造要求。

本章重點(diǎn)：★實驗室生物安全的概念，BSL-2實驗室生物安全設(shè)備要求、實驗室分布及安全防護(hù)措施。

★實驗室生物安全防護(hù)水平分級。感染性物質(zhì)的操作與處理。第5頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)

實驗室生物安全概述

一、實驗室生物安全與保障

（一）實驗室生物安全的概念和防護(hù)措施1．實驗室生物安全的概念

：實驗室生物安全是指用以防止實驗室發(fā)生病原體或毒素意外暴露及釋放的防護(hù)原則、技術(shù)及實踐。第6頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)

實驗室生物安全概述

?安全設(shè)備和個人防護(hù)（一）實驗室生物安全的概念和防護(hù)措施2．實驗室生物安全防護(hù)措施?實驗室設(shè)計與建造?實驗室生物安全管理規(guī)章制度?安全操作規(guī)程生物安全柜第7頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)

實驗室生物安全概述

1.概念：即單位和個人為防止病原體或毒素丟失、被竊、濫用、轉(zhuǎn)移或有意釋放而采取的安全措施。2.措施：

?

病原體和毒素的貯存位置、接觸人員資料、使用記錄、運(yùn)送記錄、對材料進(jìn)行滅活和（或）丟棄等情況的最新調(diào)查結(jié)果；

?相關(guān)人員的作用和責(zé)任；

?必要時公共衛(wèi)生和安全保障管理部門在發(fā)生違反安全保障事件時的介入程度、作用和責(zé)任等；

?調(diào)查并糾正違規(guī)行為。（二）實驗室生物安全保障的概念和措施第8頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月二、微生物危害評估進(jìn)行微生物危害度評估最有用的工具之一就是列出微生物的危險度等級。適當(dāng)時還應(yīng)考慮以下因素：

?病原微生物的致病性和感染量；?暴露的潛在后果；?自然傳播途徑；?實驗室操作所致的其他感染途徑；?病原微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性；第一節(jié)

實驗室生物安全概述

第9頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月?所操作病原微生物的濃度；?病原微生物的宿主；?從動物研究和實驗室感染報告或臨床報告中得到的信息；?擬進(jìn)行的實驗操作（如超聲處理、離心等）；?可能會擴(kuò)大微生物的宿主范圍或改變病原微生物對于已知有效治療方案敏感性的所有基因技術(shù)；?當(dāng)?shù)厥欠衲苓M(jìn)行有效的預(yù)防或治療。第一節(jié)

實驗室生物安全概述

第10頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月三、病原微生物的分類管理第一節(jié)

實驗室生物安全概述

國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《實驗室生物安全通用要求》(GB19489-2004)WHO《生物安全手冊》(第三版，2004)四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

Ⅰ級（低個體危害，低群體危害）不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。Ⅰ級（無或極低的個體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。

第11頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。

Ⅱ級(中等個體危害，有限群體危害)能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原微生物。實驗室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險有限。

Ⅱ級（個體危險中等，群體危險低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽游镏虏?，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。實驗室暴露也許會引起嚴(yán)重感染，但對感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。管理條例 通用要求 WHO安全手冊第一節(jié)

實驗室生物安全概述

第12頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月二類能夠引起人類或者動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。Ⅲ級（高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原微生物。Ⅲ級（個體危險高，群體危險低）病原微生物通常能引起人或動物的嚴(yán)重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預(yù)防和治療措施。管理條例 通用要求 WHO安全手冊第一節(jié)

實驗室生物安全概述

第13頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月一類能夠引起人類或動物嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

Ⅳ級(高個體危害，高群體危害)能引起人類或動物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，人與動物，動物與動物間傳播的病原微生物。Ⅳ級（個體和群體的危險均高）病原微生物通常能引起人或動物的嚴(yán)重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。管理條例 通用要求 WHO安全手冊第一節(jié)

實驗室生物安全概述

第14頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月四、實驗室生物安全的重要意義第一節(jié)

實驗室生物安全概述

是建立病原微生物研究安全平臺的需要是生物防護(hù)（國防）的需要是出入境檢驗檢疫的需要是動物防疫的需要是傳染病的預(yù)防與控制的需要是醫(yī)院感染控制的需要GOARN監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)離不開生物安全實驗室第15頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)

生物安全實驗室與設(shè)備要求

一、實驗室生物安全防護(hù)水平分級

《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）根據(jù)生物安全實驗室所操作的生物因子的危害程度及采取的防護(hù)措施，將生物安全實驗室的生物安全防護(hù)水平分為4級。分級處理對象BSL-1對個體和群體低危害，不具有對健康成人、動物致病的致病因子。BSL-2對個體中等危害，對群體危害較低，對人和動物有致病性，但對健康成人、動物和環(huán)境不會造成嚴(yán)重危害。具有有效的預(yù)防和治療措施。BSL-3對個體高度危害，對群體危害程度較高。通過直接接觸或氣溶膠使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致命疾病的致病因子，通常有預(yù)防和治療措施。BSL-4對個體和群體具有高度危害性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，或未知的、高度危險的致病因子。沒有預(yù)防和治療措施。第16頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)

生物安全實驗室與設(shè)備要求

一、實驗室生物安全防護(hù)水平分級

危害等級生物安全水平實驗室類型實驗室操作安全設(shè)備Ⅰ級BSL-1（基礎(chǔ)實驗室）基礎(chǔ)的教學(xué)、研究GMT不需要；開放實驗臺Ⅱ級BSL-2（基礎(chǔ)實驗室）初級衛(wèi)生服務(wù)；診斷、研究GMT加防護(hù)服、生物危害標(biāo)志開放實驗臺，此外需BSC用于防護(hù)可能生成的氣溶膠Ⅲ級BSL-3（屏障實驗室）特殊的診斷、研究在二級生物安全防護(hù)水平上增加特殊防護(hù)服、準(zhǔn)入制度、定向氣流BSC和／或其他所有實驗室工作所需要的基本設(shè)備Ⅳ級BSL-4（高度屏障實驗室）危險生物因子研究在三級生物安全防護(hù)水平上增加氣鎖入口、出口淋浴、污染物品的特殊處理Ⅲ級BSC或Ⅱ級BSC加正壓服、雙開門高壓滅菌器（穿過墻體）、經(jīng)過濾的空氣與病原微生物危害等級相對應(yīng)的生物安全水平、實驗室類型、實驗室操作以及主要安全設(shè)備的要求。第17頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)

生物安全實驗室與設(shè)備要求

1.清潔區(qū)：為未被病原微生物污染的區(qū)域，包括辦公室、休息室、培養(yǎng)基配制室與試劑儲藏室等，此區(qū)域禁止帶入細(xì)菌檢驗標(biāo)本。

2.半污染區(qū)：為可能被病原微生物污染的區(qū)域如緩沖間、工作服放置室、走廊等。

3.污染區(qū)（操作區(qū)）：為已被病原微生物污染的區(qū)域，用于接收臨床標(biāo)本，進(jìn)一步接種、分離培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗及結(jié)果報告等工作。

（一）臨床微生物實驗室布局二、臨床微生物實驗室布局與基本要求第18頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)

生物安全實驗室與設(shè)備要求

1．BSL-1和BSL-2實驗室設(shè)計的安全原則

在設(shè)計實驗室時應(yīng)考慮可能造成實驗室安全問題的情況，主要包括：氣溶膠形成處理高濃度微生物節(jié)肢動物和嚙齒動物的侵?jǐn)_

儀器設(shè)備過多和過度擁擠無關(guān)人員未經(jīng)允許進(jìn)入實驗室一些特殊樣品和試劑使用的工作流程（二）實驗室設(shè)計和建造的特殊要求第19頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)

生物安全實驗室與設(shè)備要求

2．BSL-1設(shè)計和建造要求無需特殊選址每個實驗室應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近出口處實驗室的墻壁、天花板和地面應(yīng)平整實驗臺面應(yīng)防水，耐腐蝕、耐熱實驗室中的櫥柜和實驗臺應(yīng)牢固實驗室如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗在實驗室工作區(qū)外應(yīng)有存放外衣和私人物品的設(shè)施實驗室門應(yīng)設(shè)有門禁系統(tǒng)，能控制進(jìn)入實驗室內(nèi)應(yīng)保證工作照明，避免不必要的反光和強(qiáng)光應(yīng)有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備（二）實驗室設(shè)計和建造的特殊要求第20頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)

生物安全實驗室與設(shè)備要求

3．BSL-2設(shè)計和建造要求

除了具備BSL-1實驗室的設(shè)計和建造要求之外，還有如下要求：應(yīng)設(shè)置實施各種消毒方法的設(shè)施，如高壓滅菌器安全系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)包括消防、應(yīng)急供電、洗眼器以及應(yīng)急噴淋裝置實驗室門宜帶鎖、可自動關(guān)閉。實驗室的門應(yīng)有可視窗實驗室出口應(yīng)有發(fā)光指示標(biāo)志不需特殊的通風(fēng)設(shè)備，可采取窗戶自然通風(fēng)，同時安裝紗窗應(yīng)有足夠的儲存空間擺放物品以方便使用有可靠和充足的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明（二）實驗室設(shè)計和建造的特殊要求第21頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)

生物安全實驗室與設(shè)備要求

一級生物安全水平實驗室示意圖二級生物安全水平實驗室示意圖第22頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月BSL-1實驗室與BSL-2實驗室安全設(shè)備和個體防護(hù)的要求區(qū)別：三、安全設(shè)備和個體防護(hù)第二節(jié)

生物安全實驗室與設(shè)備要求

BSL-1實驗室BSL-2實驗室安全設(shè)備對高壓滅菌、離心機(jī)安全罩沒有要求，必要時可配生物安全柜應(yīng)配備Ⅱ級生物安全柜、高壓蒸汽滅菌器，根據(jù)實驗內(nèi)容，確定是否需要安裝洗眼器個體防護(hù)工作服、手套防護(hù)服、手套、帽子、口罩、護(hù)目鏡第23頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

一、實驗室準(zhǔn)入要求

1.禁止非工作人員進(jìn)入實驗室。參觀實驗室等特殊情況須經(jīng)實驗室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后方可進(jìn)入。2.實驗室的門應(yīng)保持關(guān)閉。3.BSL-2實驗室入口處應(yīng)貼有國際通用的生物危害警告標(biāo)志，其下部應(yīng)注明實驗室的生物安全等級、實驗室名稱、負(fù)責(zé)人姓名和聯(lián)系電話等有關(guān)信息

4.進(jìn)入動物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過特殊批準(zhǔn)，禁止將無關(guān)動物帶入實驗室。第24頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

二、實驗室操作要求

1.所有實驗操作要按盡量減少微小液滴和氣溶膠產(chǎn)生的方式來進(jìn)行。2.以移液器吸取液體，禁止舔標(biāo)簽。3.應(yīng)限制使用皮下注射針頭和注射器。

4.盡可能應(yīng)用一次性注射器，用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手從注射器上取下針頭。用過的針頭必須放入防穿透的銳器盒中。非一次性利器必須放入銳器盒中并運(yùn)送到特定區(qū)域進(jìn)行高壓滅菌。

5.禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須高壓滅菌。第25頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

二、實驗室操作要求

6.實驗室必須制定并嚴(yán)格執(zhí)行處理溢出物的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

7.在處理完感染性實驗材料和動物以及其他有害物質(zhì)后，脫掉手套后及離開實驗室前，都必須洗手。8.禁止在實驗室工作區(qū)進(jìn)食、飲水、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物。9.每天工作結(jié)束后應(yīng)消毒工作臺面，具有潛在危害性的材料濺出后要隨時消毒。第26頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

二、實驗室操作要求

10.所有培養(yǎng)物、廢棄物在運(yùn)出實驗室之前必須進(jìn)行高壓滅菌。需運(yùn)出實驗室滅菌的物品必須放在專用密閉防漏的容器內(nèi)儲存、運(yùn)輸。

11.實驗室的文件紙張只有保證未受到污染才可帶出。12.將生物安全程序納入標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范或生物安全手冊，由實驗室負(fù)責(zé)人專門保管，工作人員在進(jìn)入實驗室之前要閱讀規(guī)范并按照規(guī)范要求操作。13.工作人員要接受有關(guān)的潛在危險知識的培訓(xùn)，掌握預(yù)防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓(xùn)。第27頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

三、感染性物質(zhì)的操作與處理

（一）感染性物質(zhì)的操作

1.標(biāo)本采集：必須有掌握相關(guān)職業(yè)知識和操作技能的工作人員進(jìn)行采集，并根據(jù)采集的標(biāo)本中可能含有病原微生物的危害程度而采取相應(yīng)的個人防護(hù)。

2.標(biāo)本運(yùn)送：采集的標(biāo)本應(yīng)采取防止污染工作人員、患者及環(huán)境的方式在醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)運(yùn)送。第28頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

（一）感染性物質(zhì)的操作

3.標(biāo)本接收和打開：需要接收大量標(biāo)本的實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)專門的房間或空間。標(biāo)本的內(nèi)層容器應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開，并備好消毒劑。

第29頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

（一）感染性物質(zhì)的操作

4.血清分離：操作時應(yīng)戴手套并注意眼睛和黏膜的防護(hù)。

5.感染性物質(zhì)凍干管的開啟和儲存：凍干管的開啟應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。首先清潔外表面，在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡，用一團(tuán)酒精浸泡的棉花將管包起來以保護(hù)雙手，然后從銼痕處打開。將頂部小心移去并按污染材料處理。緩慢向管中加入液體重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。第30頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

（二）暴露的處理

1．銳器傷及其他損傷：受傷人員應(yīng)立即停止工作，脫防護(hù)服；清洗雙手和受傷部位，如有傷口，應(yīng)當(dāng)在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，再用洗手液和流動水沖洗，禁止進(jìn)行傷口的局部擠壓；受傷部位的傷口沖洗后，使用皮膚消毒劑，如75%乙醇或者0.5%碘伏進(jìn)行消毒，必要時進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理；應(yīng)記錄受傷原因及相關(guān)微生物，并保留完整的醫(yī)療記錄。第31頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)

生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范

（二）暴露的處理

2．潛在感染性物質(zhì)的食入

：應(yīng)立即脫防護(hù)服并進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理，要報告食入材料的特性和暴露細(xì)節(jié)，并保留完整的醫(yī)療記錄。

3．潛在危險性氣溶膠釋放：所有人員必須立即撤離現(xiàn)場，并及時通知實驗室負(fù)責(zé)人和生物安全負(fù)責(zé)人，暴露者接受醫(yī)學(xué)咨詢。應(yīng)張貼“禁止進(jìn)入”的標(biāo)志，待氣溶膠