小麥Rubisco單克隆抗體的制備oweroin文檔

學(xué)生:袁秋華導(dǎo)師:顧蘊(yùn)潔教授王忠教授小麥Rubisco單克隆抗體的制備Rubisco首先由Wildman和Bonner于1947年從菠菜葉中作為一種可溶性大分子蛋白質(zhì)被發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)稱(chēng)為“分部I蛋白（fractionIprotein”）。后來(lái)碳同化研究發(fā)現(xiàn)分部I蛋白就是催化光合作用中co2固定的RuBp羧化酶。1971年發(fā)現(xiàn)RuBp羧化酶是一個(gè)雙功能酶，它還能催化RuBp的氧化作用。此后該酶就被稱(chēng)為核酮糖-1.5-二磷酸羧化酶/加氧酶，簡(jiǎn)稱(chēng)Rubisco。Rubisco的發(fā)現(xiàn)

Rubisco的結(jié)構(gòu)

所有真核和大多數(shù)原核的光合有機(jī)體中的Rubisco由8個(gè)大亞基和8個(gè)小亞基組成，大亞基一般由475個(gè)氨基酸殘基組成，不同來(lái)源的Rubisco大亞基序列有80%以上的同源性，而且特別是在169—220和321—340之間的氨基酸殘基序列，在不同有機(jī)體中幾乎完全一致，現(xiàn)在已知這些區(qū)域含有與催化及活化過(guò)程有關(guān)的氨基酸殘基。大多數(shù)Rubisco小亞基由123個(gè)氨基酸殘基組成，不同植物間小亞基氨基酸序列的同源性比大亞基低得多，一般在70%左右，然而，小亞基序列中有兩個(gè)區(qū)域非常保守，即殘基10—21和61—67，暗示這些部分可能有什么重要功能。R嗚u朗b軋i券s略c法o的觀(guān)結(jié)梢構(gòu)鄰圖核答酮升糖彼-元1趙，看5董-要二威磷旅酸蓬羧貸化蓬酶倚/經(jīng)加家氧獻(xiàn)酶翠（濫簡(jiǎn)洲稱(chēng)R驅(qū)u否b申i純s恢c旅o低）催婦化?？釥柪C文賓循問(wèn)環(huán)溉中安最絲式初狡的C魄O2固絨定誕，朽使盛核枯酮嚇糖靈-烈1撲，未5護(hù)-碗二芒磷昏酸疲（R顏u各B斯p嶄）與C毯O2形稿成寬兩友分舉子屑3輔-導(dǎo)磷援酸嘴甘羨油攏酸挪。礙該體酶嘉也銹同拼時(shí)話(huà)催聰化斃光鳥(niǎo)呼都吸放作筋用頂中忘的傳第衛(wèi)一訪(fǎng)個(gè)戴步心驟屬，扒使R奇u凱B騎p與O2反偏應(yīng)麥產(chǎn)倆生聾一語(yǔ)分變子妨磷寸酸鄰甘偵油爪酸另和嚷一送分裕子羅磷辯酸鼻乙年醇及酸饑。債因藥此R康u牲b趕i堅(jiān)s讓c驚o處膚于腦光乞合赴碳夕還豈原吸和俯光獄合盆碳細(xì)氧交化墊兩毀個(gè)負(fù)方訴向勇相僻反胳但掘又哨相見(jiàn)互研連沉鎖且的麗循映環(huán)攀的靈交靈叉飯點(diǎn)業(yè)上求，伶它烈對(duì)皺凈瘋光砌合盒速賣(mài)率屈起倘著較決足定準(zhǔn)性弟的步影涼響梯。R上u睬b捉i嫁s醉c世o的舊功邀能R佳u標(biāo)b察i骨s貞c阿o的寶純肺化R百u(mài)仿b衣i采s跪c愁o的脂純輪度犁鑒盞定利膛用N郊D態(tài)-吵P鋼A蛋G內(nèi)E和S診D桐S與-醬P升A則G省E鑒廚定R禮u貞b鉗i語(yǔ)s汪c止o純喪度肥。R部u免b曠i怕s丑c匆o的型純漸度翠鑒攻定雁結(jié)蠅果R兔u速b捉i席s鉗c服o的蘿非特解騎離歪聚填丙轟烯酰過(guò)胺擾凝久膠晃電善泳典結(jié)躲果R佳u巧b商i筐s扯c留o的S悟D賴(lài)S蜻-聚潛丙效烯洲酰乎胺語(yǔ)凝絹膠嗓電榆泳名結(jié)愁果9微7井.絮46級(jí)6提.躍24煙53事12互0咱.鞋11排4乞.百4大饒亞著基小漆亞焰基R膽u衣b梅i考s登c葬o標(biāo)光準(zhǔn)翁蛋豎白分細(xì)子震量（束×抹1妨0君0衫0挪）我愈們由得拳到展高狠純護(hù)度挺的R吸u愿b譜i飛s菌c博o后害，途就?？煞乙陨熘浦葌浒⑵浞羻尉蚩藶a隆惜抗怨體設(shè)了愉，板下煤面皺先妥跟富大撐家巧介震紹滔一守下膛單罷克楊隆在抗朝體比制慢備躲的裕技掛術(shù)涌?？官t體蔬是宣機(jī)秩體聲在蝴抗橡原爬刺最激揭下勻產(chǎn)身生挪的含能橡與蝦該云抗踩原兩特舞異豎性字結(jié)妻合觸的梨免東疫腰球務(wù)蛋倡白蠻。謙常饒規(guī)令的們抗牌體密制州備討是氣通梅過(guò)艱動(dòng)輝物象免鼠疫誕并監(jiān)采志集鉤抗杠血浪清灰的柳方嚇?lè)ㄨF產(chǎn)溉生向的圓，益因滿(mǎn)而歲抗甘血搏清隆通毅常賺含濃有肌針固對(duì)帶其奸他評(píng)無(wú)榨關(guān)磁抗舉原促的能抗咸體柱和畏血絲式清攝中沫其碌他躺蛋萍白脅質(zhì)季成貼分財(cái)。浴一回般津的弄抗傻原翁分撿子內(nèi)大緒多箭含錯(cuò)有始多榆個(gè)升不瓦同幟的搶抗津原罷決出定仿簇晨，嗎所負(fù)以棋常診規(guī)案抗藏體暑也飲是津針企對(duì)教多讓個(gè)最不風(fēng)同敢抗銅原止決墻定嗽簇站抗戚體段的顧混著合繁物知。游即蚊使界是騙針琴對(duì)貨同白一蕉抗土原釣決弦定逐簇艘的辱常旱規(guī)鋼血妹清甜抗清體蛋，里仍壁是賊由很不劍同B細(xì)卷胞投克梳隆曠產(chǎn)耕生黃的喬異話(huà)質(zhì)妖的碎抗詳體綁組芹成英。率因鏡而業(yè)，蒸常夏規(guī)射血掉清簽抗咱體佩又號(hào)稱(chēng)多彎克竟隆抵抗自體（p漏o鋤l荷y舅c晃l鉤o說(shuō)n援a(chǎn)裁l蒼a暮n秀t疫i柏b逃o憑d雪y仔）慘，簡(jiǎn)敢稱(chēng)轟多笑抗申。援由貍于館常寶規(guī)御抗肉體蒸的鮮多撿克鏡隆望性隱質(zhì)坦，羨加肉之般不每同盡批蓮次篇的劑抗讀體盲制形劑軋質(zhì)醋量榜差沸異膀很鼓大北，便使蝕它纖在辭免斑疫宜化漢學(xué)找實(shí)興驗(yàn)駛等諷使孝用百中艱帶碰來(lái)傍許萬(wàn)多殘麻師煩秀。統(tǒng)因塔此涉，堆制訊備束針迷對(duì)雨預(yù)碗定求抗茫原士的偷特濫異曠性男均臺(tái)質(zhì)縮慧的脹且壇能舌保懶證飼無(wú)測(cè)限巡壽量甚供希應(yīng)惹的麥抗夸體境是凳免裂疫曉化怨學(xué)脫家蓄長(zhǎng)姿期散夢(mèng)澆寐微以騎求奇的醉目磨標(biāo)論。修隨村著污雜臭交睜瘤辦技申術(shù)膀的匯誕獲生貨，考這螞一害目糊標(biāo)梁得達(dá)以痕實(shí)拍現(xiàn)勝。單定克窯隆琴抗耳體野產(chǎn)篩生滋的電背泛景1恭9奸7迎5時(shí)年傭，K訴o沉h士l脹e柿r和M穩(wěn)i紹l都s壺t韻e裂i柏n大妻膽婆地羨把很喪喝失指合惹成爛次智黃剛嘌河呤-鳥(niǎo)易嘌轉(zhuǎn)呤汪磷項(xiàng)酸犯核鼻糖煮轉(zhuǎn)匠移動(dòng)酶你（h降y營(yíng)p靈o勿x省a塌n遭t狠h憐i掠n傍e渾g桌u果a遮n賽o宋s侄i泊n娛e斷p絮h腿o廊s量p圍h道o殼r發(fā)i追b青o累s住y炒l懇t兩r畏a四n烘s淚f脫e欄r吐a極s蕉e，H廈G卵P鎖R牛T）的造骨夠髓腦瘤凱細(xì)仗胞速與希經(jīng)架綿供羊陸紅值細(xì)蔑胞扭免冒疫蜓的熊小翠鼠律脾洲細(xì)帶胞定進(jìn)妖行救融吧合獨(dú)。匆融卻合啟由匠仙責(zé)臺(tái)融病晨毒牌介盡導(dǎo)健，厭雜撫交限細(xì)污胞抗通揭過(guò)繪在途含畜有租次鈔黃雁嘌凈呤畫(huà)（h誰(shuí)y饑p巴o爹x裝a叼n慮t頌h膨i添n痛e，H）券、氨淹基敘喋抽呤葡（a奴m信i牧n買(mǎi)o罩p瘡t盯e賠r諷i早n，A）和罩胸辛腺院嘧幟啶刊核倉(cāng)苷甩（t閉h寬y獎(jiǎng)m找i數(shù)d軋i鞠n客e，T）的制培本養(yǎng)浪基懷（H舊A然T）中系生泡長(zhǎng)膨進(jìn)邊行槳選賞擇眾。紀(jì)在映融翻合薪后與的險(xiǎn)細(xì)妹胞襲群侵體閘里辦，應(yīng)盡爹管未至融秒合回的犁正單常嫩脾筐細(xì)予胞和相爪互腳融笑合紐奉的頓脾要細(xì)頁(yè)胞是H里G厭P賊R孔T徐+，但鍬不萄能捧連艘續(xù)來(lái)培百養(yǎng)粥，旦只歸能貫在鍋培跑養(yǎng)炎基來(lái)中可存牽活搏幾北天列，閣而未蘭融堆合形的H耐G澇P兄R具T掠-骨抄髓秀瘤旁細(xì)止胞和相但互失融跌合怠的H錄G斬P樹(shù)R辣T祖-骨罰髓態(tài)瘤領(lǐng)細(xì)臂胞不巾能徹在H易A嫁T培抹養(yǎng)巖基瞧中游存捏活稀，多只蓋有骨捧髓拿瘤雹細(xì)乳胞螺與堡脾暴細(xì)燥胞角形弟成局的徹雜炒交啞瘤趴細(xì)貪胞因藥得橋到攀分拋別惜來(lái)握自缺親秘本辨脾跪細(xì)燦胞得的H閣G墨P溉R粗T和路親羽本碗骨臺(tái)髓泛瘤錦細(xì)毒胞坡的嚼連金續(xù)命繼內(nèi)代夾特僚性陪，抬而市在H腔A昆T培春養(yǎng)溉基嗎中及存桐活俘下筐來(lái)肅。判實(shí)屆驗(yàn)頁(yè)的鉆結(jié)榨果鉤完被全皇像抽起斯始涉設(shè)貫計(jì)棄的艘那爛樣外，瘡最縣終耍得疼到饅了喪很贏(yíng)多凍分退泌交抗餅綿御羊齒紅文細(xì)無(wú)胞鍵抗微體蘆的姑克質(zhì)隆雹化賴(lài)雜殿交碑瘤伐細(xì)廳胞你系掩。用南這膊些乒細(xì)脾胞惰系口注持射菠小真鼠碰后芒能準(zhǔn)形遠(yuǎn)成節(jié)腫僚瘤茄，緣瑞即啄所滅謂愿雜痛交青瘤孔。壇生壩長(zhǎng)強(qiáng)雜創(chuàng)交匙瘤眾的止小兄鼠舍血端清戚和投腹圣水忠中昨含售有娘大波量元同伐質(zhì)秧的集抗質(zhì)體眠，鳥(niǎo)即艘單糖克扎隆溝抗塌體圖。單或抗覺(jué)制穗備坊的再原匠理單仿克休隆臘抗速體閉概敗念1誘9踏7胃5恭年掙，K漏o泡h優(yōu)l亦e適r和M好i非l久s鹿t材e標(biāo)i名n建堂立死了描淋遇巴街細(xì)著胞患雜趨交潑瘤賴(lài)技戶(hù)術(shù)囑，午他援們?cè)臧淹糜锰最A(yù)刻定居抗撒原手免籃疫鏟的拿小天鼠謊脾嘆細(xì)翠胞遣與尚能罩在朱體根外姑培續(xù)養(yǎng)雖中瘡無(wú)眉限字制耀生親長(zhǎng)培的繩骨焰髓頓瘤副細(xì)顏胞粥融哈合巾，宮形暖成B細(xì)床胞襯雜妖交刃瘤串。衡這苗種館雜貸交器瘤厘細(xì)沿胞谷具禾有兄雙劇親姻細(xì)獄胞瓦的臥特籍征細(xì)，炒既儉像族骨驢髓廁瘤詢(xún)細(xì)老胞網(wǎng)一叛樣餅在赴體抵外屢培鍬養(yǎng)帶中葡能查無(wú)輸限羅地殊快蒸速蒙增追殖脖且求永挨生右不隙死注，虧又狡能掀像枯脾強(qiáng)淋已巴鏈細(xì)序胞竭那衰樣嘉合敵成妻和繭分播泌顏特凳異呈性?xún)?yōu)抗塊體揉。訂通仰過(guò)衡克法隆振化宣可耀得夕到葉來(lái)斑自輪單條個(gè)獸雜叛交丈瘤逮細(xì)碑胞霸地璃單旁克信隆帝系醫(yī)，草即激雜亭交澤瘤姨細(xì)嬸胞懷系述，摘它航所餓產(chǎn)撕生肯的啦抗鳳體療是昨針短對(duì)肚同塘一雹抗泰原畫(huà)決喚定鍬簇凳的擾高旦度時(shí)同困質(zhì)蓮的言抗活體鍛，總即屈所火謂單扎克咬隆龜抗芹體（m湊o秘n范o奇c旗l向o脾n侮a額l從a祝n估t扯i窯b買(mǎi)o搜d狀y瞞）果，簡(jiǎn)拘稱(chēng)單度抗。單泰抗慎與能多曲抗菜的功比氧較優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)單抗針對(duì)單一抗原純度高專(zhuān)一性強(qiáng)重復(fù)性好能持續(xù)地?zé)o限量體外繁殖獲得高效價(jià)的單抗往往需要耗費(fèi)較多的人力物力與時(shí)間，因此其價(jià)格也較高

,適應(yīng)性窄

多抗識(shí)別的適應(yīng)性寬，制備價(jià)格相對(duì)較低

針對(duì)多個(gè)抗原純度不高專(zhuān)一性不強(qiáng)重復(fù)性較好每次都要從動(dòng)物血清中提取雜回交妙瘤別細(xì)既胞女的奸篩之選方本法脖：1貓、免示疫責(zé)酶暢技害術(shù)2瞇、免流疫怪熒洗光翁技軋術(shù)3刪、間瓣接詢(xún)血蓮凝止試粱驗(yàn)4脖、放楊射易免幟疫倍測(cè)湊定免仍疫畫(huà)酶印技和術(shù)恥是粘將信抗賭原糊抗攔體拉反選應(yīng)示的卷特搬異誓性侵和板酶借對(duì)池底塊物談顯悶色貨反閃應(yīng)球的基高甩效炭催惕化右作杜用被有繼機(jī)扁結(jié)知合念而誼成眼的疾免減疫院學(xué)夜技詞術(shù)瀉。宅由島于接它值特棵異取性輛高喝，鼻靈猴敏例度尺高償，鄰現(xiàn)煌已六廣淚泛拆用搶于告篩用選禽和貧鑒搞定怎單潔抗糞。間恒接廢血氧凝念試價(jià)驗(yàn)濤又應(yīng)稱(chēng)忠被同動(dòng)撒血昏凝古試聽(tīng)驗(yàn)織（P獨(dú)H塌A）尤，是磨目葉前加應(yīng)短用盯較述廣宴的傅檢駛測(cè)亭方哲法原之標(biāo)一閣。津本小試奏驗(yàn)接是族以恐包倍被舅可判溶壟性閃抗恢原堡的絮紅亦細(xì)掃胞久作洲為鋸指嘉示搖系爛統(tǒng)善，同當(dāng)光被各檢那抗摧體育與婦包扶被泳在筒紅高細(xì)選胞刻上倦的旨抗紐奉原黨產(chǎn)窮生斥特量異搭性略反雀應(yīng)疤時(shí)稅，唐導(dǎo)納致膽紅仁細(xì)距胞竊凝袍集億現(xiàn)沖象憂(yōu)。襖可班見(jiàn)念，略該拜法叫具成有菜靈得敏并、忠快葛速侵、溉容報(bào)易沃操俯作替和麻無(wú)未需掛昂城貴浩儀命器刪等他優(yōu)萄點(diǎn)肌，輔而卵且潮經(jīng)哪改把用茅醛愛(ài)化液紅攻細(xì)桐胞哭以崇后臟，飛克辨服述原標(biāo)來(lái)蒸重銷(xiāo)復(fù)諒性筒差刷的裳缺濫點(diǎn)飲。放惕射第免旦疫俘測(cè)扯定經(jīng)是時(shí)用救放輝射頂性毒同削位除素泄標(biāo)聞?dòng)浄部寡鲈蚍龟庴w徒，吃以柏檢測(cè)測(cè)最相全應(yīng)紅抗緩原縱或靠抗良體越的芽定碧量跑方那法黎。搶在尋篩君選捷和堤鑒廣定系單轉(zhuǎn)抗行時(shí)伴常努用怎抗膠原遞固起相者法捆，噸即圓用傭抗神原匙包公被材聚狗乙周烯港微匹板調(diào)，噸借站以賊檢若測(cè)欠樣凳品站中議的M滴c柏A抬b包積被洗納滌封英閉洗線(xiàn)滌加賽一槐抗用先碳顆酸否鹽B清u駱f載f莫e訂r將捕兩炊酶蘭抗裳原委稀瓦釋頓到則所系需退濃令度蚊，動(dòng)每劑孔魔加供入轎1先0構(gòu)0μ切L稿，乎4設(shè)℃包妄被交過(guò)店夜榮。每尤孔驕加爺入智保渣溫劫液曠2閑0論0μ切L微，悟3吳7蛛℃孵偷育瓶3h壤（或輸4還℃算過(guò)邪夜酸）莊。每持孔龍加校入擊經(jīng)賀稀蛛釋衫液平稀偽釋池的噸待方測(cè)托抗引血你清拆樣甩品鎖1急0論0μ狗L瀉，同癢時(shí)考設(shè)炸立蜻陰寶性?xún)S對(duì)最照撐，墨3頓7注℃泥孵風(fēng)育蓋2h巷。單資抗統(tǒng)檢讓測(cè)（金間底接E暈L袋I僻S委A甩）用P輛B執(zhí)S重T洗顆滌黨3鹿次節(jié)，未每議次剪洗逝浸善泡申5弓分控鐘裙后成拍逮干疑。結(jié)若果縫判鉤定洗易滌終司止顯正色洗刪滌加推二架抗每照孔邁加抖入付稀壘釋容至依工狠作險(xiǎn)濃但度任的吊羊都抗佛鼠I斜g科G二有抗君1戒0唐0μ逐L夸，診3腿7射℃孵城育坦2h姻。每籮孔剩加喊入O蛋P攝D底餅物勿溶池液返1政0姑0μ雷L配，趣3寄7輸℃避易光箏反蒙應(yīng)蜂1般5m森i敞n左演右使。在耽4伶9敏0n洗m波趣長(zhǎng)眠下勝測(cè)衡定昏樣說(shuō)品拋的O撿D值斷，遼結(jié)片果次以P朵／燥N比汗值揪表回示融，容即順將柱樣冠品贏(yíng)的O拾D值崇與算陰榨性裕樣舞品O衫D值鍵的凡均遭值花相批比懸，悅?cè)粽写蠹斡谑?療.歷5們倍孫，渾即稼判問(wèn)為狼陽(yáng)公性道。用側(cè)2m子o茫l夸/遍L(zhǎng)的卡硫非酸渣溶年液頌終氣止罵。雜露交逗瘤宅細(xì)嚴(yán)胞鞏的觀(guān)克具隆蛾化a、制乳備簽小鞏鼠圈腹蕉腔飲細(xì)件胞按。演同此“粥細(xì)煎胞甘融芹合良”份一役節(jié)費(fèi)中綿的級(jí)方葛法狂。b真、制執(zhí)備辛待解克笑隆笑的咱雜吃交底瘤品細(xì)降胞估懸厭液季，棵用壤含大2解0剪%付血倒清罵的H奸T(mén)培血養(yǎng)察基司稀容釋杰至晃每鳥(niǎo)毫默升伍含謠2既.粗5懷、糞1算5本和鞏5百0紀(jì)個(gè)顆細(xì)稿胞丹3掀中鼠不合同敗的歇稀池釋校度智。c需、按晚每谷毫擺升棄加握入內(nèi)5喬×裕1鹿0頑4聚-本1俊×茂1檔0愉5欄細(xì)你胞涌的監(jiān)比盤(pán)例茫，扯在傳上宏述籮雜護(hù)交稀瘤跑細(xì)狹胞攝懸作液余中河分舍別葬加施入駛腹臥腔報(bào)巨去噬消細(xì)殲胞件。d香、每瘡種梁雜豈交洽瘤垂細(xì)逢胞飯分磁裝地9永6幣孔士板客一無(wú)塊琴，萄每碰個(gè)鼻稀往釋尺度驚3設(shè)2雹孔猾，田每?？姿髁烤€(xiàn)為木0黑.厘2m腳l捏，每常孔寇的清雜忠交抗瘤兆細(xì)輛胞忍數(shù)撐分辜別捏為坊0芬.揚(yáng)5柏、煩3鈔和嗓1旨0惱。e負(fù)、泉3某7融℃石、拴7局.辮5灰%堵C測(cè)O間2濕廟潤(rùn)順培遺養(yǎng)圓7辯-件1鳳0券天幸，鍛出鐘現(xiàn)戲肉哪眼惡可劣見(jiàn)他的遍克叫隆古即澡可絨檢蓋測(cè)悶抗賢體桃；殺在誰(shuí)倒外置趟顯涼微萬(wàn)鏡方下丙觀(guān)梢察著，州標(biāo)減出預(yù)只亮有碌單傾個(gè)歌克葉隆乳生測(cè)長(zhǎng)號(hào)的債孔蜻，伴取泳上看清繳作勢(shì)抗員體康檢流測(cè)壩。f滔、取狡抗榆體循檢襲測(cè)壯陽(yáng)坐性城孔售的姥