微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)培訓(xùn)課件

微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)2、倒平板熔化已滅菌的上述4種培養(yǎng)基并冷卻至45oC左右倒平板，凝固待用，每種培養(yǎng)基每個(gè)稀釋度各三只平板。2微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)3微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)8.計(jì)數(shù)選菌落分散、菌落數(shù)適量且各平行皿菌落數(shù)接近的稀釋度的平皿計(jì)數(shù)，通常細(xì)菌和放線菌選取菌落數(shù)在30～300之間的平皿，霉菌選菌落數(shù)在10～100之間的平皿，最后換算成每克干土所含菌數(shù)。同一稀釋度的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)每克干土含菌數(shù)=1－土壤含水量％4微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)一、水樣采集5微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)自來水水樣：先將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌，再開放水龍頭使水流5min（經(jīng)常用水的水龍頭放水1～3min）后，采集水樣于無菌錐形瓶，約占瓶容量80%，以便搖勻水樣。水源水水樣：選有代表性的地點(diǎn)及可疑地方，一般距水面下10～15cm采樣。采樣后，將瓶塞蓋好，再從水中取出。6微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)注意事項(xiàng)嚴(yán)格無菌操作。做好標(biāo)記：采得水樣后應(yīng)立即記錄水樣名稱、地點(diǎn)、時(shí)間等項(xiàng)目。從速送檢。水樣從采集到檢驗(yàn)不應(yīng)超過2h，在0～4℃下保存不應(yīng)超過24h。7微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)二、菌落總數(shù)的測定—平板菌落計(jì)數(shù)法8微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)[方法]

稀釋水樣：無菌吸10ml混勻水樣注入90ml滅菌水瓶中,混勻成1:10水樣。取1:10水樣1ml注入9ml滅菌試管中混勻成1:100水樣。同法稀釋成1:1000,1:10000水樣。9微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)[方法]

傾注培養(yǎng)：用1ml無菌吸管吸取2~3個(gè)適當(dāng)濃度的稀釋液1ml,分別注入無菌平皿中，每個(gè)稀釋度應(yīng)同時(shí)做2個(gè)平皿，另取一平皿作空白對(duì)照。再做傾注培養(yǎng)(方法同飲用水)。菌落計(jì)數(shù)：方法同飲用水。10微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)菌落總數(shù)測定11微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)[結(jié)果分析與報(bào)告]計(jì)算不同稀釋度的平均菌落數(shù)：稀釋度的選擇和菌落總數(shù)報(bào)告方式：首先選擇平均菌落在30～300之間者進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算方法和報(bào)告方式如表1所示。12微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)由表2可判定水質(zhì)被污染的程度。表2一般水源水中菌落總數(shù)與水清潔程度的關(guān)系

水的類別最清潔水清潔水不太清潔水不清潔水極不清潔水菌落總數(shù)

cfu／m110~100100~10001000~1000010000~100000＞10000013微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)1.9滅菌與消毒消毒：是指應(yīng)用物理或化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的病原微生物，而對(duì)非病原微生物及其芽孢并不嚴(yán)格要求全部殺死。用于消毒的化學(xué)物質(zhì)，稱為消毒劑。滅菌：是指殺死一切病原菌和非病原菌及其芽孢，使物體上無任何存活的微生物14微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)消毒與滅菌的區(qū)別消毒一般是指消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體.滅菌是指殺滅一切微生物的營養(yǎng)體,芽孢和孢子.15微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)干熱滅菌法

灼燒滅菌法：利用火焰直接把微生物燒死。此法徹底可靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合于接種針、環(huán)、試管口及不能用的污染物品滅菌。干熱空氣滅菌法：這是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種方法，即把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中，升溫至160℃，恒溫1小時(shí)即可。此法適用于玻璃皿、金屬用具等的滅菌。

16微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)濕熱滅菌法:

在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因?yàn)橐环矫婕?xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含水量高，容易變性。另一方面高溫水蒸汽對(duì)蛋白質(zhì)有高度的穿透力，從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡。17微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)18微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)圖4－12細(xì)菌菌落形態(tài)。（a）肉眼觀察的細(xì)菌菌落形態(tài)的多變性。菌落總體形狀和邊緣狀況可由菌落上方俯視觀察。而菌落高度則由平板邊緣水平觀察。

19微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)1、簡單染色(四）實(shí)驗(yàn)方法：制片→染色→水洗→干燥→鏡檢（1）制片：取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片、自然干燥、加熱固定；注意無菌操作20微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)芽孢有的長在中央或近中央，圓形或橢圓形，芽孢的大小，位置，在分類鑒定上有一定的意義，它僅僅是芽孢細(xì)菌生活史的一個(gè)環(huán)節(jié)，它還是檢驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌徹底不徹底的依據(jù)。21微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)中央芽孢偏端芽孢游離芽孢末端芽孢22微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一層粘液狀或膠狀物質(zhì)，其成分為多糖、糖蛋白或多肽。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可以溶于水，易在用水沖洗時(shí)被除去。莢膜雖不是細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)，但它是細(xì)胞外碳源和能源性貯藏物質(zhì)，并能保護(hù)細(xì)胞免受干燥的影響，同時(shí)能增加某些病原菌的致病能力，使之抵御宿主吞噬細(xì)胞的吞噬。23微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)莢膜染色結(jié)果背景灰色，菌體較暗，在其周圍呈現(xiàn)一明亮的透明圈即莢膜。24微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（二）實(shí)驗(yàn)原理放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體帶一類革蘭氏陽性細(xì)菌。25微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)放線菌菌落形態(tài)26微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（二）實(shí)驗(yàn)原理

酵母菌是多形的、不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物。無性繁殖主要是出芽生殖。27微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)本實(shí)驗(yàn)通過用美藍(lán)染色浸片來觀察生活的酵母形態(tài)和出芽生殖方式。28微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)美藍(lán)（氧化型）藍(lán)色美藍(lán)（還原型）無色還原劑氧化劑

美藍(lán)是一種無毒性染料，它的氧化型是藍(lán)色的，而還原型是無色的，用它來對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色。29微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)死活細(xì)胞鑒別原理美藍(lán)（氧化型）藍(lán)色美藍(lán)（還原型）無色酵母活細(xì)胞新陳代謝還原能力30微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ǘ?shí)驗(yàn)原理（三）實(shí)驗(yàn)器材（四）實(shí)驗(yàn)方法（五）實(shí)驗(yàn)作業(yè)培養(yǎng)基的制備與滅菌實(shí)驗(yàn)五31微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、明確培養(yǎng)基的配制原則；2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；3、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍；4、掌握高壓蒸汽滅菌技術(shù)，了解幾種常用滅菌方法。32微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（二）實(shí)驗(yàn)原理

培養(yǎng)基是按照微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的一種基質(zhì)。它包括碳源、氮源、能源、生長因子、無機(jī)鹽和水六類營養(yǎng)要素。由于不同微生物細(xì)胞組成不同，因而所需營養(yǎng)基質(zhì)不同，為了分離、培養(yǎng)和鑒定不同的微生物，必須根據(jù)其需要，配制合適的培養(yǎng)基.培養(yǎng)基的種類繁多，根據(jù)培養(yǎng)基的成分、物理性狀不同，可分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基33微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)常用加熱滅菌法：1、干熱滅菌：用火焰燒灼或電熱干燥箱內(nèi)高溫?zé)峥諝鉁缇?、濕熱滅菌⑴高壓蒸汽滅菌法⑵間歇滅菌法⑶煮沸消毒法

滅菌是指應(yīng)用物理或化學(xué)的方法，殺滅物體表面和內(nèi)部一切微生物營養(yǎng)體、芽孢和孢子。滅菌方法很多，可分為加熱、過濾、照射和化學(xué)藥品法等。34微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（三）實(shí)驗(yàn)器材1.藥品和試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％NaOH溶液、10％鹽酸溶液。2.器材：天平、藥匙、瓷缸、玻璃棒、電爐、PH試紙、試管、三角瓶、分裝漏斗、牛皮紙、棉花、線繩、干燥箱、高壓鍋。35微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)1.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱量各成份放于瓷缸中。配方：牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,瓊脂20.0g,蒸餾水1000ml,pH7.0。（四）實(shí)驗(yàn)方法

培養(yǎng)基的制備過程

稱量---溶解----調(diào)節(jié)pH值----過濾----分裝及包扎----滅菌----滅菌后試管擺放斜面36微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)2.溶解向上述瓷缸中加入所需要的水量，攪拌，加熱使其溶解。如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化過程中，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補(bǔ)足所失水分。3.調(diào)節(jié)pH值用玻璃棒沾少許液體，測量PH值。用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)PH。37微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)4.過濾

用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。5.分裝及包扎根據(jù)不同的需要，可將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)（用分裝漏斗）或三角瓶內(nèi)，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮紙將棉塞部分包好。38微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)6.滅菌：高壓蒸汽滅菌，1210C滅菌20分鐘。39微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)7.滅菌后試管擺放斜面40微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)41微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)42微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)注意事項(xiàng)1、稱取藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙稱一種藥品；2、蛋白胨極易吸濕，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速；2、配制固體培養(yǎng)基時(shí)，先將其他藥品加熱溶解到快沸時(shí)，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至瓊脂完全熔化，此過程要不斷攪拌，以免瓊脂糊底，并控制火力，防止沸騰外溢；4、分裝量根據(jù)試管大小和實(shí)際需要而定，固體培養(yǎng)基裝量約為管高的1/5，液體培養(yǎng)基的裝量約為管高的1/4，三角瓶的裝量不超過瓶體的1/2；5、分裝過程中注意不要將培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。返回43微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ǘ?shí)驗(yàn)原理（三）實(shí)驗(yàn)器材（四）實(shí)驗(yàn)方法（五）實(shí)驗(yàn)作業(yè)微生物的分離與純化實(shí)驗(yàn)六44微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（四）實(shí)驗(yàn)方法（一）、稀釋混合平板法圖14-1從土壤中分離微生物操作過程45微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)46微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（三）平板劃線分離法交叉劃線法連續(xù)劃線法47微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ǘ?shí)驗(yàn)原理（三）實(shí)驗(yàn)器材（四）實(shí)驗(yàn)方法（五）實(shí)驗(yàn)作業(yè)微生物數(shù)量的測定實(shí)驗(yàn)七48微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)（二）實(shí)驗(yàn)原理

利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，是微生物實(shí)驗(yàn)中一種十分重要的常用微生物計(jì)數(shù)方法。此法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速，不論微生物的生理狀況如何，都可以在顯微鏡下一一計(jì)數(shù)。由于此法得到的是活菌和死菌的總和，故又稱為總菌計(jì)數(shù)法。

49微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3（微生物的分離—平板劃線法）制平板。凝固后，用接種環(huán)取相應(yīng)的菌液一環(huán)（10-1）在平板上劃線。

1.連續(xù)劃線法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面作連續(xù)劃線。完畢后，倒置于28～300C溫室培養(yǎng)。

2.分區(qū)劃線法：用接種環(huán)以無菌操作挑取土壤稀釋液1環(huán)，先在培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3—4條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約600C角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次劃線會(huì)，同法依次作第三次和第四次劃線。劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。挑取單個(gè)菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，如果不純，再移植純化，最后得到純培養(yǎng)。50微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)51微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)平板劃線菌落分離效果圖52微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)土壤里的微生物53微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)土壤中的微生物主要有細(xì)菌、放線菌、真菌等。它們能夠分解植物的枯枝爛葉、動(dòng)物的遺骸等，使土壤變得更加肥沃。閱讀課本P102，回答下列問題：1、土壤里的微生物主要有哪些種類？3、微生物的作用有哪些？54微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)認(rèn)識(shí)細(xì)菌細(xì)菌的三種形態(tài)球形、桿形、螺旋形55微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)觀看動(dòng)畫56微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞57微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)討論：細(xì)菌細(xì)胞與植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞的異同處細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、沒有成形的細(xì)胞核、鞭毛（有的細(xì)菌有）組成。與植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞相比較，它們都具有細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜；植物細(xì)胞和細(xì)菌細(xì)胞具有細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞沒有；細(xì)菌細(xì)胞具有沒有成形的細(xì)胞核，植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞有成形的細(xì)胞核。58微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)認(rèn)識(shí)放線菌放線菌是一種具有分枝的絲狀體。由于菌絲內(nèi)沒有橫隔，也沒有成形的細(xì)胞核，所以一般認(rèn)為放線菌是一種特殊的細(xì)菌。59微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)60微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)放線菌的菌絲分為營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和孢子絲。

營養(yǎng)菌絲生長在營養(yǎng)物質(zhì)內(nèi)，吸收其中的營養(yǎng)。

氣生菌絲生長在空氣中。當(dāng)放線菌生長發(fā)育到一定階段，氣生菌絲的頂端形成孢子絲。孢子絲生長到一定階段就產(chǎn)生孢子。孢子在適宜的條件下萌發(fā)，形成新的菌絲體。61微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)認(rèn)識(shí)真菌

酵母菌、霉菌和蘑菇都是一些常見的真菌。

霉菌的種類很多，最常見的有青霉和匍枝根霉。62微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)觀察青霉和匍枝根霉橘皮上的青霉63微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)青霉的形態(tài)64微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)

青霉的種類很多，從有些青霉中可以提取青霉素。青霉素是一種常用的抗生素，對(duì)治療肺炎、腦膜炎等疾病具有顯著效果。閱讀P111資料“青霉素和弗萊明”65微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)匍枝根霉的形態(tài)67微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)P105討論：青霉和匍枝根霉在形態(tài)上呈絲狀，它們依靠孢子進(jìn)行繁殖。青霉的直立菌絲內(nèi)有橫隔，頂端呈掃帚狀，成熟的孢子呈青綠色；匍枝根霉的直立菌絲內(nèi)無橫隔，頂端呈球狀，成熟的孢子呈黑色。它們細(xì)胞內(nèi)沒有葉綠體。是通過營養(yǎng)菌絲從營養(yǎng)物質(zhì)內(nèi)吸收水分和獲得有機(jī)養(yǎng)料，進(jìn)行腐生生活。68微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)香茹69微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)平菇70微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)食用菌名貴中藥材名貴食用菌劇毒真菌71微生物實(shí)驗(yàn)常識(shí)真菌的主要特征

真菌的