無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗培訓課件

培訓目的評估無菌生產模擬試驗（培養(yǎng)基灌裝或肉湯灌裝）了解在培養(yǎng)基灌裝試驗方案設計過程中的關鍵點，以符合法規(guī)要求

學會如何對失敗進行評估，以及可能帶來的后果

在團隊中進行討論1無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023無菌生產工藝:培訓目的2無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023培養(yǎng)基灌裝的原則為什么無菌工藝的驗證必須符合制藥行業(yè)的規(guī)范？

“無菌藥品”的含義是“沒有活體微生物”

在無菌檢測過程中，實際上并沒有對每個產品進行檢測，所以應采取所有努力減少污染的風險(潔凈廠房、HVAC、壓差、清洗程序、監(jiān)測計劃)

盡管采取這些措施，但污染永遠是一個潛在的風險，因為無菌工藝操作是在一個受控但是非滅菌的環(huán)境中進行的，并且樣品取樣數量太小，所以只有嚴重污染才可能被發(fā)現。3無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023培養(yǎng)基灌裝的原則制藥相關法規(guī): -法規(guī)：FDA“,無菌生產工藝生產無菌藥品的行業(yè)指南–cGMP”- -EUGMPPartI附錄1– -PIC/SPI007-2“無菌生產工藝驗證指南”雖然培養(yǎng)基灌裝試驗必須復制無菌生產條件，但是模擬試驗與藥品實際生產過程采取完全相同的方式是不可能的。

什么培養(yǎng)基？灌裝多少數量？多長時間？

4無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023培養(yǎng)基灌裝的原則在無菌生產工藝中，最大的風險來源于潔凈室中人員的操作，所以操作人員必須參加培養(yǎng)基灌裝試驗。

操作人員需要什么樣的資質？以及什么時候可以確認操作人員的合格性？

在無菌灌裝操作中，應進行環(huán)境監(jiān)測。

是否需要額外的監(jiān)測措施？

5無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023培養(yǎng)基灌裝的原則通常情況下，應該包括產品實際操作過程中可能發(fā)生的“最差條件”

必須考慮可能采取那些干預措施?6無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023清洗設備隧道烘箱灌裝設備壓塞機壓蓋機模擬試驗:液體無菌灌裝生產線7無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023模擬試驗:培養(yǎng)基灌裝方案需要考慮的關鍵因素:

試驗的數量和頻率

培養(yǎng)基(產品的替代品)

灌裝的數量

容器(玻璃瓶)體積

灌裝體積

生產速度(或灌裝速度)

灌裝過程的持續(xù)時間

工作班次

監(jiān)測措施

干預措施–常規(guī)的和非常規(guī)的

培養(yǎng)方法

可接受標準8無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023模擬試驗:培養(yǎng)基灌裝方案9無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:試驗的次數和頻率

培養(yǎng)基模擬試驗的初始驗證，至少需要成功的連續(xù)進行3次獨立的模擬試驗（建議在不同的工作日進行試驗）。

首次驗證后，培養(yǎng)基模擬試驗通常每年進行2次。

當生產線發(fā)生變更，并且經過評估可能對無菌生產工藝有潛在危險時，應當進行額外的培養(yǎng)基灌裝試驗。

培養(yǎng)基灌裝方案10無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:培養(yǎng)基(1/3)

培養(yǎng)基必須適應廣譜微生物的生長，包括需氧菌、酵母菌和霉菌（非選擇性培養(yǎng)基）。

推薦使用大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基(SCD)，以及大豆胰蛋白胨肉湯(TSB).

如果產品在缺氧條件、通常在氮氣保護下灌裝時，需要使用厭氧培養(yǎng)基:液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM).

培養(yǎng)基灌裝方案11無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:培養(yǎng)基(2/3)

培養(yǎng)基必須適應微生物的生長（促生長試驗）。被試驗的微生物可以從藥典(美國、歐盟、日本)中選擇。另外推薦使用1~2種最常見的環(huán)境分離菌。通常情況，在培養(yǎng)結束后，一些玻璃瓶（從生產開始、中間、結束時取樣）進行微生物接種，接種量＜100CFU，分別培養(yǎng)3天（細菌）和5天（酵母菌和霉菌）。培養(yǎng)基灌裝方案12無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:培養(yǎng)基(3/3)

如果培養(yǎng)基中含有動物源性成分，可能導致朊蛋白污染。那么很重要的是，培養(yǎng)基供應商能夠提供證明，確認相關物質來源于沒有牛海綿狀腦?。˙SE-free）的國家

。

另一種方法是可以使用從植物中提取的TSB培養(yǎng)基。

SDC粉末通常遭受支原體的污染，并且無法在無菌過濾中去除。在這種情況下，可以在粉末灌裝前，對粉末進行滅菌（使用γ射線）。培養(yǎng)基灌裝方案13無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:灌裝數量

灌裝的數量應該能夠真實的反應批量；但允許根據需要，采取最低灌裝數量，前提是應足以反應操作員工疲勞時對產品質量潛在的影響，并且足以體現了盡可能發(fā)生的干預措施。

一些法規(guī)中建議應該根據批量確定灌裝的數量。

培養(yǎng)基灌裝方案14無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:容器體積(1/2)

應該考慮到灌裝容器的極端尺寸。

最大的容器（通常由于充填體積較大而導致最小的充填速度）通常開口較大，所以從環(huán)境中微生物侵入的潛在風險是最大的。

最小的容器（通常由于充填體積較小而導致最大的充填速度）體現了最大的操作難度；小的容器更容易破碎，穩(wěn)定性差，在設備中更容易破裂或堵塞。

培養(yǎng)基灌裝方案15無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:容器體積(2/2)

在最初的驗證中，可以二次選用最大的容器，第三次選用最小的容器。

在日常的評估中，其它規(guī)格尺寸的容器也應該包括在驗證計劃中。

不能使用琥珀色的容器，而應該使用透明的容器，保證可以目視檢測到微生物的生長。

培養(yǎng)基灌裝方案16無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:灌裝體積

培養(yǎng)基灌裝體積不需要與現實中常規(guī)的灌裝體積一致。

應確定足夠的灌裝體積，保證可以充分接觸到容器密封部位的表面(當它倒置和旋轉時)，并且足以目視檢測到微生物在培養(yǎng)后的生長情況。

較小的容器不能灌裝的太滿，因為容器上部的空間中應保持足夠的空氣，以支持需氧微生物的生長（通常應該保留25%的空間）。培養(yǎng)基灌裝方案17無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:生產線(或灌裝)速度

培養(yǎng)基灌裝的速度，應符合實際生產的灌裝速度范圍。如果超過了限度，應該進行評估。

每次模擬試驗中確定的速度應該是符合要求的。

較高的生產速度，可以適用于生產過程中經常受到干擾或手工操作較多的生產工藝。較低的生產速度，可以應用于在無菌區(qū)域中無菌部件長時間暴露的生產工藝。

在灌裝生產線的起始驗證中，一次可以選用最低速度，另外二次可以選用最高速度。

在生產線的日常評估中，模擬試驗的速度應該進行變換。

培養(yǎng)基灌裝方案18無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:灌裝的持續(xù)時間

即使使用最精確的模型模擬實際生產運行，其他的因素也需要考慮，以確保其合理性。

通常情況，培養(yǎng)基灌裝的時間應該足夠長，能夠包括所有的必需的干擾、生產中斷，以及反應出潛在的人員疲勞，一個典型的培養(yǎng)基灌裝可以至少是3-4小時。一次理想的培養(yǎng)基灌裝應該灌裝比實際產品生產時更多的數量（所有的批次均應大于5000個單位）。對于非常大的批量或較長的生產過程，通常使用一些空白樣品（空的或者灌水）以維持模擬試驗的動態(tài)環(huán)境。這些技術可以應用于持續(xù)多個工作日的工藝驗證，用于驗證可以批準的最長的生產周期。

培養(yǎng)基灌裝方案

19無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:工作班次

需要進行無菌工藝操作的每個操作員工都必須參與培養(yǎng)基灌裝試驗。

設備和生產線的操作員工應該每年參加不少于一次的模擬試驗；其它操作員工比如設備工程師和環(huán)境取樣人員也應該采取相同的方式。

應該確定無菌操作間可以最多容納的操作人員數量。

當一個公司有多個班次工作時，第二個班次、第三個班次也應該包括在培養(yǎng)基灌裝試驗的計劃中。

如果手工操作（灌裝），每條生產線的員工都應該參加開始的三次驗證；在再驗證（每6個月1次）過程中，至少有一條生產線的員工參加。

培養(yǎng)基灌裝方案

20無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:環(huán)境監(jiān)測措施

在許多法規(guī)和制藥規(guī)范中，都提出了對微生物的要求。

在試驗過程中，可以使用主動采樣或被動采樣的方法進行空氣采樣；表面采樣最好在無菌操作結束后進行。另外還應該對操作人員進行監(jiān)測。

在培養(yǎng)灌裝過程中，微生物監(jiān)測（空氣、表面、人員）和懸浮粒子監(jiān)測應該按照各自的操作規(guī)程有效的進行。

有時候，取樣點的數量可以較日常監(jiān)測適當增加。培養(yǎng)基灌裝方案

21無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:干預措施–常規(guī)的和非常規(guī)的-

干預措施應該模擬實際運行時可能發(fā)生的情況；培養(yǎng)基灌裝記錄中應該記錄所有發(fā)生的干預措施，以及被移走產品的數量。

常規(guī)的干預措施：對于無菌生產線的安裝，如果已經滅菌的部件脫離保護措施而被安裝的話，是一個潛在危險。因此，開始灌裝的容器更容易反映出無菌設備裝配的潛在問題。

其它的常規(guī)干預措施：膠塞供給，

移走掉落的玻璃瓶,移走堵塞的膠塞，人員的停頓，換手套，環(huán)境的監(jiān)測。

非常規(guī)的干預措施（意外發(fā)生）：玻璃瓶破裂，灌裝針頭的更換或重新安裝，稱量調整的干預，傳感器故障，傳輸帶的調整。

培養(yǎng)基灌裝方案

22無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:培養(yǎng)方法

任何灌裝的產品都應該在培養(yǎng)前進行檢查，發(fā)現任何不合格品（如容器密封性存在問題或完整性不好）時，都應該被剔除并記錄。

行業(yè)規(guī)范中不同的要求:全部樣品應在20-35℃(±2.5℃)下培養(yǎng)14天。通常在20-25℃下培養(yǎng)7天，然后在30-35℃下培養(yǎng)7天；或者在30-35℃培養(yǎng)7天后，再轉移到20-25℃培養(yǎng)7天。

關于培養(yǎng)條件的選擇，補充一個沒有形成共識的建議，在培養(yǎng)過程的前半個周期，將所有產品進行倒置后培養(yǎng)；然后在剩余時間內，將產品恢復直立位置后進行培養(yǎng)。

培養(yǎng)基灌裝方案

23無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:可接受標準

試驗的目標是不出現長菌（陽性為0），但置信度為95％時，污染率應小于0.1%

(在5000個灌裝單位中，大約有1個被污染)。 FDA和PDA要求，不管試驗的數量，被污染的產品數量都應該是0。

很重要的一點，培養(yǎng)基灌裝試驗的失敗是十分罕見的。

發(fā)生任何微生物污染時，均應進行調查。培養(yǎng)基灌裝方案

24無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023關鍵因素:可接受標準培養(yǎng)基灌裝方案

FilledunitsperrunContaminatedunitspermitted(actionlevel)30000475016300277503915041051051184061315071443081571091696010表格顯示了培養(yǎng)基灌裝試驗中，不同灌裝數量時，按照置信度為95％、污染率應小于0.1%計算，可以允許的最大污染數。加拿大衛(wèi)生部HealthCanada25無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023污染發(fā)生失敗(污染)時，必須確定最根本的原因，或者至少是最可能的原因。能夠對微生物進行分離和鑒別（鑒定到種），這一點非常重要。

實施適當的糾偏措施和預防措施

必須評估失敗對已經放行批次（如果有的話）的影響

當糾偏措施實施后，應該進行一次新的培養(yǎng)基灌裝試驗，以確認其有效性

26無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023污染

率灌裝過程(時間或灌裝量)污染在灌裝過程中污染率上升

這表明污染可能來源于液體培養(yǎng)基(如與培養(yǎng)基貯罐非無菌連接，在循環(huán)管路中受到污染)。很重要的是，在灌裝結束后，保持培養(yǎng)基貯罐處于無菌狀態(tài)，當等到培養(yǎng)基灌裝結果時，可以核實這樣的假設。27無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023污染率灌裝過程(時間或灌裝量)污染在灌裝過程中污染率下降這表明污染發(fā)生于生產設備中（

膠塞容器/軌道,

計量泵/針頭)，在灌裝過程中污染被部分或全部“清洗掉”。28無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023污染率灌裝過程(時間或灌裝量)污染在灌裝過程中污染率出現尖峰一個尖峰（在短時段的一些產品被污染）可能與在灌裝過程中不正確操作導致的關鍵失誤有關。對于這個原因，很關鍵的是必須知道被污染產品灌裝的準確時間，以及當時實施的干預措施（灌裝操作過程的錄像是非常有用的）29無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023污染率灌裝過程(時間或灌裝量)污染污染率出現尖峰后，呈上升趨勢

與前面的例子相同，但如果錯誤的干預措施能夠影響到液體的管路/回路時（如培養(yǎng)基貯罐的變化，泵或針的替換）30無菌工藝驗證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗7/21/2023污染率灌裝過程(時間或灌裝量)污染孤立事件(試驗中少數污染)不幸的是，這