新項目方法驗證總結-GB57504-揮發(fā)酚類4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法直接分光光度法

****方法驗證報告方法名稱:《生活飲用水標準檢驗方法感官性狀和物理指標》GB/T5750.4-2006揮發(fā)酚4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法、直接分光光度法項目負責人：報告編寫人：報告日期：目錄1方法概要31.1目的31.2測定原理32儀器與化學試劑32.1儀器32.2試劑33簡要操作步驟44方法確認程序54.1標準曲線的繪制：54.2方法檢出限：64.3方法精密度實驗64.4方法準確度實驗：75評價與驗證結論95.1評價95.1.1空白值最低檢出限評價95.1.2精密度評價95.1.3準確度評價95.2結論91方法概要1.1目的根據(jù)實驗室的檢測能力和條件以及檢測檢驗機構資質(zhì)認定評審準則的要求，確認開展揮發(fā)酚類《生活飲用水標準檢驗方法感官性狀和物理指標》GB/T5750.4-2006項目的檢測能力，通過試驗進行分析總結，編制此方法驗證報告。1.2測定原理在PH=10±0.2和有氧化劑鐵氰化鉀存在的溶液中，酚與4-氨基安替吡啉形成紅色的安替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。酚的對位取代基可阻止酚與安替吡啉的反應，但羥基（—OH）、鹵素、磺?；ā猄O2H）、羧基（—COOH）、甲氧基（—OCH3）除外。因此，鄰位硝基也阻止反應，間位硝基部分地阻止反應。2儀器與化學試劑2.1儀器儀器名稱規(guī)格型號儀器出廠編號性能狀況（計量/校準狀態(tài)、量程、靈敏度）有效期全玻璃蒸餾器500mL分液漏斗500mL具塞比色皿10mL容量瓶250mL分光光度計2.2試劑名稱生產(chǎn)廠家純度/規(guī)格氫氧化鈉三氯甲烷五水硫酸銅氯化銨氨水ρ20=0.88g/mL4-氨基安替吡啉鐵氰化鉀溴化鉀溴酸鉀可溶性淀粉水楊酸氧化鋅硫酸溶液1+9苯酚鹽酸ρ20=1.19g/mL碘化鉀硫代硫酸鈉重鉻酸鉀溶液c（1/6K2Cr2O7）=0.1000mol/L3簡要操作步驟4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：取樣250mL水樣，置于500mL全玻璃蒸餾瓶中。以甲基橙為指示劑用硫酸溶液調(diào)PH至4.0以下，使水樣由桔黃色變?yōu)槌壬?，加?mL硫酸銅溶液及數(shù)粒玻璃珠，加熱蒸餾。待蒸餾出總體積的90%左右，停止蒸餾。稍冷，向蒸餾瓶內(nèi)加入25mL純水，繼續(xù)蒸餾，知道收集250mL餾出液為止。注：由于酚隨水蒸氣揮發(fā)，速度緩慢，收集餾出液的體積應與原水體積相等。試驗證明接受的餾出液體積若不與原水樣相等，將影響回收率。比色測定將水樣餾出液全部轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗中，另取酚標準使用溶液0mL，0.5mL，1.00mL，2mL，4mL，6mL，8mL和10mL，分別置于預先盛有100mL純水的500mL分液漏斗中，最后補加純水至250mL。向各分液漏斗中加入2mL氨水-氯化銨緩沖液，混勻。再各加1.5mL的4-氨基安替吡啉溶液，混勻，最后加入1.50mL鐵氰化鉀溶液，充分混勻，準確靜置10min。加入10.0mL三氯甲烷，振搖2min，靜置分層。在分液漏斗頸部塞入濾紙卷將三氯甲烷萃取溶液緩緩放入干燥比色管中，用分光光度計，于460nm波長，用2cm比色皿，以三氯甲烷為參比，測量吸光度。繪制標準曲線，從標準曲線上查處揮發(fā)酚的質(zhì)量。直接分光光度法：水樣處理同上。吸取50mL蒸餾液（或取適量用純水稀釋至50mL）于50mL具塞比色管中。另取50mL比色管7支，分別加入每毫升含10μg酚（以苯酚計）的標準使用液0mL、0.5mL，1.00mL，3.00mL，5.00mL，7.00mL和10.00mL，用純水稀釋至50mL。向水樣及標準中各加入0.5mL緩沖液，搖勻。加1.0mL4-氨基安替吡啉溶液混勻。最后加入1.0mL鐵氰化鉀溶液，充分混勻，準確放置10min。于510nm波長，用2cm比色皿，以空白管為參比，測量吸光度。繪制標準曲線，從標準曲線上查處揮發(fā)酚的質(zhì)量。用（1）式計算。計算（1）式中：ρ（C6H5OH）水樣中揮發(fā)酚（以苯酚計）的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）m從標準曲線上查得的樣品管中揮發(fā)酚的質(zhì)量(以苯酚計)，單位為微克（μg）V水樣體積，單位為毫克（mL）4方法確認程序4.1標準曲線的繪制：4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：濃度點1#2#3#4#5#6#7#8#體積（mL）00.501.002.004.006.008.0010.00吸光度校準曲線線性相關系數(shù)直接分光光度法濃度點1#2#3#4#5#6#7#體積（mL）00.501.003.005.007.0010.00吸光度校準曲線線性相關系數(shù)4.2方法檢出限：參考《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制修訂技術導則》（HJ168-2010），根據(jù)扣除空白值后的與0.01吸光度相對應的濃度值作為檢出限，根據(jù)（2）式計算MDL=0.01/b(2)4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法檢出限為：直接分光光度法檢出限為：4.3方法精密度實驗配制6份濃度為0.1C、0.5C、0.9C的樣品溶液，（C即標準曲線最高濃度點），按照給定分析方法的全過程進行處理和測定，記錄6個平行樣的測定結果，統(tǒng)計其相對標準偏差。4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：平行號試樣0.1C0.5C0.9C測定結果（mg/L）123456平均值（mg/L）標準偏差S（mg/L）相對標準偏差RSD(%)注1：0.1C，0.5C，0.9C中的C即標準曲線最高濃度點配制6份濃度為0.1C、0.5C、0.9C的樣品溶液，（C即標準曲線最高濃度點），按照給定分析方法的全過程進行處理和測定，記錄6個平行樣的測定結果，統(tǒng)計其相對標準偏差。直接分光光度法：平行號試樣0.1C0.5C0.9C測定結果（（mg/L））123456平均值（mg/L）標準偏差S（mg/L）相對標準偏差RSD(%)注1：0.1C，0.5C，0.9C中的C即標準曲線最高濃度點4.4方法準確度實驗：（1）采用水中揮發(fā)酚成分分析標準物質(zhì)，進行準確度實驗。有證標準物質(zhì)/標準樣品測試數(shù)據(jù)平行號有證標準物質(zhì)/標準樣品備注測定結果（mg/L）123456平均值（mg/L）有證標準物質(zhì)/標準樣品濃度（含量）μa（mg/L）相對誤差REa國家有證標準物質(zhì)/標準樣品的標準值±不確定度。（2）分別取三種不同的水樣進行實際樣品測試和加標實驗。分別取三個樣品500mL,在樣品中分別添加水中揮發(fā)酚成分分析標準物質(zhì)mL、mL、mL，按全程序每個樣品平行測定6次，分別計算每個樣品的加標回收率，統(tǒng)計其相對標準偏差。4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：實際樣品加標測試數(shù)據(jù)平行號實際樣品備注樣品1樣品2樣品3樣品加標樣品樣品加標樣品樣品加標樣品測定結果（mg/L）123456平均值、（mg/L）加標量μ（mL）加標回收率P注1：為實際樣品測試均值，為加標樣品測試均值。直接分光光度法：平行號實際樣品備注樣品1樣品2樣品3樣品加標樣品樣品加標樣品樣品加標樣品測定結果（mg/L）123456平均值、（mg/L）加標量μ（mL）加標回收率P注1：為實際樣品測試均值，為加標樣品測試均值。5評價與驗證結論5.1評價5.1.1空白值最低檢出限評價本方法的最低檢出限為；本實驗的最低檢出限為,符合方法要求。5.1.2精密度評價本方法揮發(fā)酚濃度在時，相對標準偏差為。本實驗的相對標準偏差（變異系數(shù)）在，符合規(guī)范要求。5.1.3準確度評價根據(jù)方法條件，檢測環(huán)標準物質(zhì)揮發(fā)酚含量，其結果均在其不確定度范圍內(nèi)。5.2結論本次方法驗證，所有參加人員均經(jīng)培訓持證上崗；所用儀器設備均經(jīng)檢定并在有效期內(nèi)；檢測方法為有效版本；實驗過程中本