《生物化學(xué)》實驗講義

試驗一蛋白質(zhì)及氨基酸的顏色反響一、目的意義1、學(xué)習(xí)幾種鑒定氨基酸與蛋白質(zhì)的一般方法及其原理。2、學(xué)習(xí)和了解一些鑒定蛋白質(zhì)的特別顏色反響及其原理。二、試驗原理1、雙縮脲反響180℃左右時，21分子氨而形成雙縮脲。雙縮脲在堿性溶液中與銅離子結(jié)合生成簡單的紫紅色化合物，這一呈色反響稱為雙縮脲反響。蛋白質(zhì)分子中含有多個與雙縮脲相像的鍵，因此也具有雙縮脲的顏色反響。借此可以鑒定蛋白質(zhì)的存在或測定其含量。應(yīng)當(dāng)指出，雙縮脲反響并非蛋白質(zhì)的特異顏色反響，由于凡含有肽鍵的物質(zhì)并不都是蛋白質(zhì)。2、茚三酮反響蛋白質(zhì)與茚三酮共熱，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，此反響為一切蛋白質(zhì)及氨基酸〔除脯氨酸和羥脯氨酸〕所共有。含有氨基酸的其他化合物也呈此反響。該反響格外靈敏，1:1500000濃度的氨基酸水溶液就能呈現(xiàn)反響。因此，此反響廣泛用于氨基酸的定量測定。3、黃色反響含有苯環(huán)側(cè)鏈的〔特別是含酪氨酸〕蛋白質(zhì)溶液與硝酸共熱時，呈黃色〔硝基化合物再加堿則變?yōu)槌赛S色，此反響也稱為黃蛋白反響。OH+ HNO HO NO +HO3 2 2OHHONO2 + NaOH1 ONOHOH10三、儀器與試劑1、試劑蛋白質(zhì)溶液：取10mL雞蛋清，用蒸餾水稀釋至100mL，攪拌均勻后用紗布過濾得上清液。0.3%色氨酸溶液、0.3%酪氨酸溶液、0.3%脯氨酸溶液、0.5%甘氨酸溶液、0.5%苯酚溶液。0.10.1g100mL95％乙醇。10％NaOH1％硫酸銅溶液、尿素、濃硝酸。2、儀器：試管及試管夾、酒精燈。四、操作方法1、雙縮脲反響取一支枯燥試管，參加少量尿素，用微火加熱使之熔化，待熔化的尿素開頭變硬時停頓加〔可由氣味區(qū)分1mL10％NaOH溶液，振蕩使其溶解，再參加11％硫酸銅溶液?；靹蚝笥^看消滅的粉紅色。11mL2mL10％NaOH21％的硫酸銅溶液。搖勻觀看其顏色變化。留意事項參加的硫酸銅不行過量，否則會產(chǎn)生藍(lán)色的氫氧化銅，從而掩蓋了雙縮脲反響的粉紅色。記載上述試驗過程和結(jié)果，并解釋現(xiàn)象。2、茚三酮反響30.3%0.5%1mL，再加0.5mL0.1％茚三酮－乙醇溶液，混勻后在小火上加熱煮沸1－2min，放置冷卻，觀看顏色變化。在濾紙的不同部位分別滴上一滴0.3%脯氨酸溶液、0.5%甘氨酸溶液，風(fēng)干后再在原處滴0.1％茚三酮－乙醇溶液，在微火旁烘干顯色，觀看斑點消滅及其顏色。記載上述試驗過程和結(jié)果，并解釋現(xiàn)象。3、黃色反響6個試管中按下表加試劑，觀看現(xiàn)象并記錄。管號123 4 56材料蛋白質(zhì)溶液指甲頭發(fā) 0.5%苯酚 0.3%色氨酸0.3%酪氨酸參加量〔滴〕4少許少許 4 44濃硝酸〔滴〕22020 4 4酒精燈加熱煮沸4現(xiàn)象逐滴加10%NaOH后現(xiàn)象試驗二蛋白質(zhì)的沉淀反響蛋白質(zhì)是親水膠體，當(dāng)其穩(wěn)定因素被破壞或與某些試劑結(jié)合成不溶性鹽類后，即自溶液中沉淀析出〔渾濁現(xiàn)象，此現(xiàn)象叫蛋白質(zhì)的沉淀反響?！惨弧车鞍踪|(zhì)的鹽析作用一、目的意義了解鹽析法及可逆沉淀的原理，學(xué)習(xí)用鹽析法沉淀分別蛋白質(zhì)。二、試驗原理鹽析現(xiàn)象是指—般蛋白質(zhì)在高濃度鹽溶液中溶解度下降，故向其溶液中參加中性鹽至肯定濃度時，蛋白質(zhì)即自溶液中沉淀析出。鹽析作用與兩種因素有關(guān)：①蛋白質(zhì)分子被濃鹽脫水；②分子所帶電荷被中和。鹽溶現(xiàn)象為低鹽濃度可使蛋白質(zhì)的溶解度增加，試驗時要加足夠量的鹽。蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程，用鹽析方法沉淀蛋白質(zhì)時，較少引起蛋白質(zhì)變性，經(jīng)透析或用水稀釋時又可溶解。三、儀器與試劑1、試劑10mL100mL，攪拌均勻后用紗布過濾得上清液。⑵飽和硫酸銨溶液；⑶10%氫氧化鈉溶液；⑷1%硫酸銅溶液。四、操作方法12mL3分鐘則析出沉淀?！捕持亟饘冫}類沉淀蛋白質(zhì)一、目的意義了解重金屬鹽類沉淀法的原理，學(xué)習(xí)用重金屬鹽類沉淀法沉淀分別蛋白質(zhì)。二、試驗原理pH在蛋白質(zhì)等電點以上時，重金屬鹽類〔如Pb2+、Cu2+、Hg2+Ag+等〕易與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶性鹽而沉淀。重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)通常比較完全，故常用重金屬鹽除去液體中的蛋白質(zhì)。但應(yīng)留意，在使用某些重金屬鹽〔如硫酸銅或醋酸鉛〕沉淀蛋白質(zhì)時，不行過量，否則將引起沉淀再溶解，此時的溶解為生成憎水膠體的原因。三、儀器與試劑1、試劑⑴蛋白質(zhì)溶液〔與雙縮脲反響一樣；⑵5%CuSO4⑶3%AgNO3

溶液；溶液。四、操作方法121mL。22－35％CuSO4

溶液、3％AgNO3

溶液，觀看各管所生成的沉淀。3、在硫酸銅產(chǎn)生蛋白質(zhì)沉淀的試管中，倒掉大局部沉淀，留少量沉淀，連續(xù)參加5％CuSO4溶液，觀看沉淀的溶解?！踩秤袡C酸沉淀蛋白質(zhì)一、目的意義了解有機酸沉淀法的原理，學(xué)習(xí)用有機酸沉淀法沉淀分別蛋白質(zhì)。二、試驗原理生物堿是植物中具有顯著生理作用的一類含氮的堿性物質(zhì)。凡能使生物堿沉淀，或能與生物堿作用產(chǎn)生顏色反響的物質(zhì)，稱為生物堿試劑。如鞣酸、苦味酸和磷鎢酸等。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液pH值低于其等電點時，蛋白質(zhì)為陽離子，能與生物堿試劑的陰離子結(jié)合成不溶性鹽而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有機酸沉淀，其中以三氯醋酸的作用最為靈敏而且特異，因此廣泛地被用于沉淀蛋白質(zhì)，為首選沉淀劑，只能沉淀蛋白質(zhì)，不能沉淀其水解產(chǎn)物，加熱可除去。三、儀器與試劑1、試劑⑴蛋白質(zhì)溶液〔與雙縮脲反響一樣；⑵5%三氯醋酸溶液；⑶5%單寧酸溶液。四、操作方法11mL于試管中，加數(shù)滴三氯醋酸溶液，觀看現(xiàn)象。21mL于試管中，加數(shù)滴單寧酸溶液，觀看現(xiàn)象。試驗三氨基酸的紙層析一、目的意義1、了解并把握氨基酸紙層析的原理和方法。2、學(xué)習(xí)紙層析的操作技術(shù)，分別鑒定未知樣品的氨基酸成分。二、試驗原理紙層析法屬于安排層析法的一種，是以濾紙作為惰性支持物。濾紙纖維上分布大量的親水性羥基，因此能吸附水作為固定相，通常把有機溶劑作為流淌相。將樣品在濾紙上〔此點稱為原點各種溶質(zhì)在兩相溶劑中的安排系數(shù)不同，因而不同溶質(zhì)隨流淌相移動的速率不等，于是從點樣的一端向另一端開放時，樣品中不同溶質(zhì)被分別開來，形成距原點距離不等的層析點。樣品被分別后在紙層析圖譜上的位置，是用比移值Rf來表示的在肯定條件下〔如溫度、展層劑的組成、層析紙質(zhì)量等不變，某物質(zhì)的Rf數(shù)，借此可作定性分析依據(jù)。三、儀器與試劑1、試劑氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：1%的甘氨酸、脯氨酸。混合氨基酸溶液：將1%的甘氨酸、脯氨酸也按1%濃度制成混合溶液。展層劑：將205毫升的冰醋酸放入分液漏斗中，與15毫升水混合，充分振蕩，靜止后分層，放出下層水層后備用。顯色劑：0.1%茚三酮－正丁醇溶液。2、儀器層析缸〔12*12CM規(guī)格，垂直型、層析濾紙〔華一號濾紙，事先裁成11*11CM規(guī)格、電吹風(fēng)〔學(xué)生自帶，每組一個、三角板、鉛筆和干紙巾〔學(xué)生自帶，每組一套、毛細(xì)管。四、操作方法1、預(yù)備濾紙：三個點，每隔2CM+2CM。23次，每次點完后用電吹風(fēng)吹干。一個樣品用一支毛細(xì)管。310-15ml展層劑，另一側(cè)先不加；讓濾紙都放先放到未加展層劑的枯燥一側(cè)，然后蓋上蓋子平衡飽和20〔可寫試驗報告，簡潔講課〕410-15ml展層劑，然后讓濾紙分別在該側(cè)開頭層析。5、完畢層析：等到展層劑上升到距離濾紙上端3cm左右，就拿出濾紙，用鉛筆劃線描出液體的上邊界，然后用電吹風(fēng)吹干。6、茚三酮顯色：把濾紙放在桌面上，整張紙用滴管滴加滿茚三酮溶液，再用熱風(fēng)吹干，直到有結(jié)果消滅。7、計算RF值：用鉛筆描出每個氨基酸的區(qū)域，測量距離計算甘氨酸和脯氨酸的Rf〔每個組需將該濾紙夾在組長的試驗報告中，并注明是第幾組〕五、結(jié)果計算1、用鉛筆將層析結(jié)果輪廓和中心點描出來，計算各種氨基酸的Rf2、分析混合樣品中未知氨基酸的組分。六、作業(yè)題1、假設(shè)開放劑高于點樣線，對最終的層析結(jié)果有何影響？2、點樣時，樣品濃度太高或斑點之間間距過小，對最終的層析結(jié)果有何影響？試驗四牛奶中酪蛋白的制備一、目的意義1、學(xué)習(xí)從牛奶中制備酪蛋白的原理和方法。2、把握等電點沉淀法提取蛋白質(zhì)的方法。二、試驗原理牛的主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量約為3.5g/100mL。酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物，不溶于水、醇、有機溶劑，等電點為4.7。利用等電點時溶解度最低的原理，將牛乳的pH4.7時，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂類雜質(zhì)后便可得到純酪蛋白。三、儀器與試劑1、試劑(1)95%乙醇；無水乙醚；0.2mol/LpH4.7A液與BA0.2mol/LNaAC·3H2O54.44g2023mL；B0.2mol/L〔99.8%〕12.0g1000mL；A1770mL，B1230mL混合即得pH4.73000mL。=1:V/。10%醋酸溶液2、儀器：穎牛奶；臺式離心機、抽濾裝置、周密pH試紙、恒溫水浴鍋、燒杯、溫度計、50ml大離心管。四、操作方法1、酪蛋白的粗提20mL牛奶加熱至44〔試驗前水浴鍋提前預(yù)熱到4℃pH4.720mL，比照周密pH10%醋酸溶液調(diào)pH4.7〔肉眼可見絮狀物質(zhì)假設(shè)牛奶與緩沖液混合后，絮狀沉淀消滅不充分，需要參加較多的醋酸溶液，否則離心后沒有分層。將上述懸浮液冷卻至室溫。離心10分鐘3000r/mi2、酪蛋白的純化參加40ml蒸餾水?dāng)嚢柘礈斐恋?，直接抽濾〔事先檢查真空泵是否已加滿水。在沉淀中參加30mL乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾〔留意不要沾壁。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次〔不要更換濾紙，最終用乙醚洗沉淀1將沉淀攤開在枯燥濾紙上，電爐上烘干，得酪蛋白純品。準(zhǔn)確稱重，計算含量和得率。五、結(jié)果計算X＝m 100V式中：X──酪蛋白含量，g/100mLV──量取牛奶的體積，mL；m──收獲酪蛋白的質(zhì)量，g。六、留意事項1、由于本法是應(yīng)用等電點沉淀法來制備蛋白質(zhì)，故調(diào)整牛奶液的等電點肯定要準(zhǔn)確。最好用酸度計測定。2、精制過程用乙醚是揮發(fā)性、有毒的有機溶劑，最好在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。3、目前市面上出售的牛奶是經(jīng)加工的奶制品，不是純潔牛奶，所以計算時應(yīng)按產(chǎn)品的相應(yīng)指標(biāo)計算。七、作業(yè)題1、試驗中，分別參加乙醇、乙醚洗滌沉淀的作用是什么？2、試驗中，你覺得影響最終酪蛋白純度和得率的因素可能會有哪些？請簡潔分析試驗五酵母RNA的提取一、目的意義把握稀堿法提取RNA的原理和方法，學(xué)會抽濾操作。二、試驗原理RNA2.67%~10.0%DNA含量較0.03%~0.516%。為此提取RNA多以酵母為原料。工業(yè)上制備RNA多項選擇用低本錢、適于大規(guī)模操作的稀堿法或濃鹽法。這兩種方法所提取的核酸均為變性的RNA，主要用作制備單核苷酸的原料，其工藝比較簡潔。稀堿法是用氫氧化鈉使酵母細(xì)胞壁變性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白質(zhì)和菌體后的上清液用乙醇沉淀RNA或調(diào)pH2.5利用等電點沉淀。提取的RNA有不同程度的降解。濃鹽法是用高濃度鹽溶液處理，同時加熱，以轉(zhuǎn)變細(xì)胞壁的通透性，使核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來。三、儀器與試劑1、試劑⑴0.2%氫氧化鈉溶液；⑵酸性乙醇溶液：30mL0.3mLHCl；⑶95%乙醇；⑷乙醚；2、儀器：酵母粉、量筒、抽濾瓶、布氏漏斗、臺式離心機、天公平。四、操作方法13g干酵母粉于研缽中〔1030克，大研缽中磨，再分裝給各個組〕，參加30mL〔10300mL〕0.2%NaOH溶液中，參加少量石英砂，研10min。2、沸水提?。簩⒔湍竸驖{轉(zhuǎn)入100mL小燒杯中沸水浴〔提前翻開水浴鍋，加熱到95度〕20分鐘，不斷攪拌。冷卻后移到離心管，4000r/min10分鐘后，沉淀棄去，將上清液20mL10min。3、離心：待RNA完全沉淀，移到離心管，4000r/min5分鐘。4棄去上清液，參加30ml95%乙醇洗滌沉淀并攪拌后，轉(zhuǎn)移至布氏漏斗抽濾，繼而再用20ml無水乙醚洗滌，洗滌時可用細(xì)玻璃棒留神攪動沉淀。沉淀在空氣中枯燥。5、稱重計算：稱量所得RNA粗品的重量。五、結(jié)果計算X＝m 100V粗品的質(zhì)量，g。六、作業(yè)題1、RNA的含量測定還有其它方法嗎？試舉例簡潔說明2、沸水浴的作用是什么？試驗六糖的呈色反響和定性鑒定〔一〕Fehling一、目的意義了解鑒定復(fù)原糖的方法及其原理。二、試驗原理費林試劑是含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱，則生成黑色的氧化銅沉淀。假設(shè)同時有復(fù)原糖存在，則產(chǎn)生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。為了防止銅離子和堿反響生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，F(xiàn)ehling試劑中參加酒石酸鉀鈉，它與C2液內(nèi)保持肯定濃度的氫氧化銅。費林試劑是一種弱的氧化劑，它不與酮和芳香醛發(fā)生反響。三、儀器與試劑134.5g500mL蒸餾水中。2125gNaOH137g500mL蒸餾水中，貯存于具橡皮塞玻璃瓶中。臨用前，將試劑甲和試劑乙等量混合成Fehling試劑。3、1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液〔先配好。四、操作方法取試管，編號，各參加Fehling1mL。搖勻后，分別參加4滴待測糖溶液，置沸水浴2~3min，取出冷卻，觀看沉淀和顏色變化。〔二〕Benedict〔班氏試驗〕一、目的意義了解鑒定復(fù)原糖的方法及其原理。二、試驗原理BenedictFehling試劑的改進。Benedict試劑利用檸檬酸作為Cu2+的絡(luò)合劑，其堿Fehling試劑弱，靈敏度高，干擾因素少。三、儀器與試劑1Benedict試劑〔班氏試劑：將170g檸檬酸鈉和100g無水碳酸鈉溶于800mL水中；另將17g100mL熱水中。將硫酸銅溶液緩緩傾入檸檬酸鈉－碳酸鈉溶液中，邊加邊1000mL。該試劑可長期使用。2、1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。四、操作方法2mLBenedict45分鐘，取出后冷卻，觀看各管中的顏色變化。五、作業(yè)題：1、除這兩個試驗方法外，還有其它何種方法鑒別復(fù)原糖和非復(fù)原糖？請簡述試驗七淀粉的提取和性質(zhì)試驗一、目的意義1、生疏淀粉與碘的呈色反響。2、了解淀粉的提取方法和水解條件及產(chǎn)物。二、試驗原理1、淀粉的提取淀粉是一種重要的多糖，是一種相對分子量很大的自然高分子化合物，廣泛分布于植物界，谷類、果實、種子、塊莖中含量豐富。工業(yè)用的淀粉主要從玉米、甘薯、馬鈴薯中制取。淀粉是一種白色粉末，不溶于冷水，在熱水里淀粉顆粒會膨脹，有一局部淀粉溶解在水里，另一局部懸浮在水里，形成膠狀淀粉糊。2、淀粉與碘的顯色反響直鏈淀粉遇碘呈藍(lán)色，支鏈淀粉遇碘呈紫紅色，糊精遇碘呈藍(lán)紫、紫、橙等顏色。這些顯色反響的靈敏度很高，可用作鑒別淀粉的定量和定性的方法，也可用它來分析碘的含量。淀粉和碘的顯色反響除了吸附緣由外，主要是由于生成包合物的原因。直鏈淀粉是由-葡萄糖分子縮合而成螺旋狀的長長的螺旋體，每個葡萄糖單元都仍有羥基暴露在螺旋外。碘分子跟這些羥基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋體的軸心部位。碘跟淀粉的這種作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。淀粉跟碘生成的包合物的顏色，跟淀粉的聚合度或相對分子質(zhì)量有關(guān)。在肯定的聚合度或相對分子質(zhì)量范圍內(nèi)，隨聚合度或相對分子質(zhì)量的增加，包合物的顏色的變化由無色、橙色、淡紅、紫色到藍(lán)色。例如，直鏈淀粉的聚合度是200－98032000－160000時，包合物的顏色是藍(lán)色。分支很多的支鏈淀粉，在支鏈上的直鏈平均聚合度20－28，這樣形成的包合物是紫色的。糊精的聚合度更低，顯棕紅色、紅色、淡紅色等。2－1淀粉的聚合度和生成碘包合物的顏色葡萄糖單位的聚合度3.87.412.918.320.229.334.7以上包合物的顏色無色淡紅紅棕紅紫色藍(lán)紫色藍(lán)色淀粉跟碘生成的包合物不穩(wěn)定，易被乙醇、氫氧化鈉和熱等作用，使顏色褪去，而只在pH=4時最穩(wěn)定，所以它的顯色反響在微酸性溶液里最明顯。3、淀粉的水解淀粉進入人體后，一局部淀粉受唾液中淀粉酶的催化作用，發(fā)生水解反響，生成麥芽糖；余下的淀粉在小腸里胰臟分泌出的淀粉酶的作用下，連續(xù)進展水解，生成麥芽糖。麥芽糖在腸液中麥芽糖酶催化下，水解為人體可吸取的葡萄糖，供人體組織的養(yǎng)分需要。反響過程為：〔CH

O〕m→(CH

O)n→C

O →CH O6 12 5

6 10

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6 12 6三、儀器與試劑1、試劑

淀粉 糊精 麥芽糖 葡萄糖乙醇、0.1％淀粉液〔1mL1%5mL蒸餾水〕、10％NaOH溶液、20％HSO溶2 4液、10％NaCO溶液。2 32%20g10g100mL10班氏〔Benedict〕試劑：見糖的呈色反響試驗。2、儀器：生馬鈴薯、組織搗碎機、紗布、布氏漏斗、抽濾瓶、水浴鍋、試管夾、量筒、燒杯、白瓷板、試管。四、操作方法1、淀粉的提取〔演示，試驗不再做〕生馬鈴薯去皮，切碎，稱取50g，加少量水，搗碎勻漿，用四層紗布過濾，除去粗顆粒，濾液中淀粉很快沉淀，然后用水屢次洗滌淀粉，再抽濾后濾餅放在外表上風(fēng)干即可。2、淀粉與碘的反響取少量自制淀粉于白瓷板孔內(nèi)，加碘液兩滴，觀看顏色。取試管一支，參加0.1％的淀粉液6mL，碘液兩滴，搖勻，觀看顏色變化。另取試管兩支，將前述淀粉液均分為三等份并編號做如下試驗：號管在酒精燈上加熱，觀看顏色變化。然后冷卻，又觀看顏色變化。10％NaOH溶液幾滴，觀看顏色變化號管參加乙醇4mL，觀看顏色變化。記載上述試驗過程和結(jié)果，并解釋現(xiàn)象。3、淀粉的水解14mL20.5g4mL20%的硫酸溶3~4min。23中，留作下一步試驗用。12中參加幾滴碘溶液，觀看現(xiàn)象。320%Na2CO3溶液，中和溶液中的硫酸，把溶液調(diào)呈弱堿性，使溶液pH9~10〔CO2氣泡冒完為止2mL班氏試劑，加熱煮沸后觀看現(xiàn)象。記載上述試驗過程和結(jié)果，并解釋現(xiàn)象。六、作業(yè)題：1、在加熱的過程中，為什么碘與淀粉會呈現(xiàn)不同的顏色反響？試驗八油脂氧化酸敗的定性檢驗及定量測定一、目的意義1、進一步把握油脂氧化酸敗的機理。2、學(xué)會油脂氧化酸敗的定性檢驗及酸值測定的操作技術(shù)。二、試驗原理油脂氧化酸敗的過程是極簡單的化學(xué)變化過程，對食品質(zhì)量影響很大。酸敗的油脂中某些分解產(chǎn)物對人體有害，例如環(huán)氧丙醛。過氧化物是油脂自動氧化的主要初級產(chǎn)物，過氧化物可進一步分解，生成低級的醛、酮和羧酸，通過油脂中過氧化物、醛類的檢出，可定性推斷油脂是否已發(fā)生酸敗。環(huán)氧丙醛在酸敗的油脂中不呈游離狀態(tài)，而是成為縮醛。在鹽酸作用下，環(huán)氧丙醛漸漸釋出，釋出的游離環(huán)氧丙醛與間苯三酚發(fā)生縮合反響，生成紅色的分散物〔酚分散物，由紅色分散物的生成可推斷油脂已發(fā)生酸敗。酸值是評定油品酸敗程度的指標(biāo)之一，它是指中和1g油脂中游離脂肪酸所消耗的氫氧化鉀的質(zhì)量(mg)。油脂中游離的脂肪酸與氫氧化鉀發(fā)生中和反響，從氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗量計算出油脂的酸值。反響如下：RCOOH＋KOH→RCOOK＋H2O三、儀器與試劑1、試劑⑴0.1％間苯三酚乙醚溶液；⑵濃鹽酸；2∶10.1mol/L示劑呈中性；⑷酚酞指示劑：1％乙醇溶液；⑸0.1000mol/L12、儀器：恒溫水浴、錐形瓶、試管及試管架、量筒、25mL比色管、滴定管、容量瓶。四、操作方法㈠油脂氧化酸敗的定性檢驗1、間苯三酚乙醚溶液法〔克萊斯氏環(huán)氧丙醛反響〕2mL2mL，用橡皮塞塞好管口，猛烈振蕩10s0.1％間苯三酚乙醚溶液2mL,加塞猛烈振蕩10s左右，使酸層分別。觀看下層溶液顏色。結(jié)果表示：下層呈桃紅色或紅色表示油脂已酸敗，下層呈淺粉紅色或黃色表示未酸敗。㈡油脂酸值的測定3g30mL〔必要時可置熱水中，溫?zé)崾蛊淙芙猓渲潦覝?。參加酚酞指示?－3滴，用0.1mol/L氫氧化300.1mol/L氫氧化鉀溶液的用量。五、結(jié)果計算VC56.11X= m──試樣的酸值〔以氫氧化鉀計，mg/；V──試樣消耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；C──氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液實際濃度，mol/L；m──試樣質(zhì)量，g；56.111.0mL氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)?shù)臍溲趸浐量藬?shù)。六、留意事項1、間苯三酚乙醚法試驗、酸值測定，切忌明火。2、酸值測定中，如油樣色澤深，可削減試樣用量或適當(dāng)增加混合溶劑的用量；如因色深推斷終點困難，可改換指示劑，用堿性藍(lán)6B、百里酚酞做指示劑或用酚酞試紙作外指示。3、測定蓖蔴油酸度時，只用中性乙醇而不用混合溶劑。4、光線會促進空氣對試劑的氧化，應(yīng)留意避光存放試劑；試驗九維生素C的定量測定一、目的意義2，6－二氯靛酚法測定維生素C的原理和方法。二、試驗原理維生素C又稱抗壞血酸，復(fù)原型抗壞血酸能復(fù)原染料2，6－二氯靛酚鈉鹽，本身則氧化成脫氫抗壞血酸。在酸性溶液中，2，6－二氯靛酚鈉離子呈紅色，被復(fù)原后變?yōu)闊o色。三、儀器與試劑1、試劑2%草酸溶液；0.001N2，6－二氯靛酚鈉溶液：稱取碳酸氫鈉52mg200mL2，6－二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氫鈉溶液中。冷卻定容至250mL，過濾至棕色瓶內(nèi)，保存在冰箱中。每次使用前，用標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸標(biāo)定其滴定度。2、儀器：勻漿機、小錐形瓶、酸式滴定管、研缽、容量瓶、移液管、小離心管等。四、操作方法1、樣液的制備及滴定100g〔x/8，x50；8〕mL50mL220mL2，6－二氯酚靛酚鈉溶液進展滴定呈現(xiàn)淡粉紅色，并在15－30秒內(nèi)不褪色，滴定過程必需快速，222，6－二氯酚靛酚鈉溶液的用量。2、滴定滴定管裝入，滴定至提取液，10mL2%草酸按上法作空白比照試驗，記錄消耗2，6－二氯酚靛酚鈉溶液的用量。五、結(jié)果計算M=[(VA-VB)×C×0.088×100]/〔D×W〕式中：M——100g樣品中含抗