動(dòng)物細(xì)胞工程-課件

2.2動(dòng)物細(xì)胞工程“溫故知新”1.植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)、植物體細(xì)胞雜交離體的植物器官、組織或細(xì)胞（外植體）愈傷組織胚狀體或叢芽完整植株脫分化再分化植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合正在融合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞愈傷組織雜種植株去細(xì)胞壁纖維素酶果膠酶物理方法化學(xué)方法：離心振動(dòng)電刺激聚乙二醇(PEG)脫分化植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞融合酶解法人工誘導(dǎo)方法過程：意義？克服不同生物遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙！原理？細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞的全能性。再分化融合完成的標(biāo)志2.動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體——其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展歷史”20世紀(jì)初，人們不知道神經(jīng)纖維是由神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)向外突出形成的，還是由神經(jīng)細(xì)胞周圍的其他細(xì)胞融合而成的。生物學(xué)家們就這個(gè)問題展開了激烈的爭論。1907年，美國生物學(xué)家哈里森(Harrison)從蝌蚪的脊索中分離出神經(jīng)組織，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培養(yǎng)。蝌蚪的神經(jīng)組織存活了好幾周，并且從神經(jīng)細(xì)胞中長出了神經(jīng)纖維。哈里森的實(shí)驗(yàn)不僅解決了神經(jīng)纖維的起源問題，而且開創(chuàng)了動(dòng)物組織培養(yǎng)的先河。此后，在許多科學(xué)家的不懈努力下，動(dòng)物組織培養(yǎng)不斷改進(jìn)并逐漸發(fā)展成為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。問題討論:取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)胞后構(gòu)建人造皮膚再移植。燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對(duì)于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來治療該病人？圖2-15用培養(yǎng)的人細(xì)胞構(gòu)建的人造皮膚一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出

，

將它分散成

，然后，放在適宜的

中

，讓這些細(xì)胞

。相關(guān)的組織單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)基生長和增殖1.概念：2.原理：細(xì)胞的增殖一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)幼齡動(dòng)物3、過程：取動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞的獲取細(xì)胞懸浮液的制取細(xì)胞的傳代培養(yǎng)細(xì)胞的原代培養(yǎng)1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因？“想一想”胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官分裂、增殖旺盛

2、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？沒有3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程是否將組織分散成單個(gè)細(xì)胞了呢？是單個(gè)細(xì)胞的獲?。?、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？５、胰蛋白酶有什么作用呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成份？６、細(xì)胞膜的主要成份是什么？剪刀剪碎,然后用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)和磷脂細(xì)胞間的成份主要是蛋白質(zhì)“知識(shí)拓展”動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。單個(gè)細(xì)胞的獲取７、胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞有損傷作用嗎？８、既然胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞有損傷作用，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞時(shí)我們應(yīng)該注意什么問題呢？有注意時(shí)間的控制９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？不能，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2-7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。單個(gè)細(xì)胞的獲取()()單個(gè)細(xì)胞“試一試”取動(dòng)物組織塊剪碎胰蛋白酶處理細(xì)胞懸浮液的制取制成細(xì)胞懸液用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞如何制取細(xì)胞懸浮液呢？用培養(yǎng)液將分散的細(xì)胞稀釋制成細(xì)胞懸浮液細(xì)胞的原代培養(yǎng)人們通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？培養(yǎng)貼壁性細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞要能夠貼附于底物上才能夠生長增殖接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。2.在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中為何將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖疑問？細(xì)胞在原代培養(yǎng)時(shí)，發(fā)生了細(xì)胞接觸抑制現(xiàn)象，而此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦呢？將貼滿瓶壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。傳代培養(yǎng)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)1.傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？2.那為什么還是有些能一直傳下去呢？4.人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？3.那我們動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是為了得到這些細(xì)胞嗎？不都能發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展不是保存10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?0－50代部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)

細(xì)胞加培養(yǎng)液細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)10代細(xì)胞細(xì)胞貼壁50代細(xì)胞剝離、分瓶部分細(xì)胞“癌變”，無限傳代細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)我們所學(xué)知識(shí)，思考并討論以下問題：1、體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)？2、體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？問題探討二、細(xì)胞培養(yǎng)的條件1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿等）3、溫度和pH36.5+（-）0.5℃，PH為7.2-7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2）三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用

1、大規(guī)模生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品2、為燒傷病人提供可供移植皮膚3、用于檢測有毒物質(zhì)4、為基因工程提供受體細(xì)胞5、用于科學(xué)研究2.2動(dòng)物細(xì)胞工程二、細(xì)胞培養(yǎng)的條件三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用單個(gè)細(xì)胞的獲取細(xì)胞懸浮液的制取細(xì)胞的原代培養(yǎng)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1、概念：2、原理：細(xì)胞的增殖3、過程：概念圖細(xì)胞工程“練一練”1．在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中正確的是（）A.細(xì)胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、生長素和動(dòng)物血清等C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培育的細(xì)胞會(huì)衰老死去D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前和培養(yǎng)過程中都要用胰蛋白酶處理2．用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異B.具有更強(qiáng)的全能性

C.取材十分方便D.分裂增殖的能力強(qiáng)隨堂練習(xí)3.右圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本示意圖。請(qǐng)據(jù)此回答。(1)容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自

。(2)容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是

，然后用

酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來。這樣做的目是

。(3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和

等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老死