重組DNA技術(shù)與基因組學(xué)

第十七章重組DNA技術(shù)與基因組學(xué)

第一節(jié)DNA序列測(cè)定第二節(jié)重組DNA技術(shù)的基本操作原理第三節(jié)重組DNA技術(shù)的應(yīng)用第四節(jié)基因組學(xué)和蛋白組學(xué)及研究技術(shù)簡(jiǎn)介DNA測(cè)序的基本策略

設(shè)法產(chǎn)生帶標(biāo)記的不同長(zhǎng)度的成套DNA片段，各帶有標(biāo)記的片段起點(diǎn)相同、終點(diǎn)不同，使待測(cè)的DNA鏈中的相應(yīng)每個(gè)核苷酸處都有斷裂或終止。通過(guò)PAGE電泳，能夠?qū)⑾嗖钜粋€(gè)核苷酸的DNA片段分開(kāi)，放射自顯影后，根據(jù)長(zhǎng)短排列，根據(jù)特定末端堿基的DNA片段就可讀出待測(cè)DNA的堿基序列。

雙脫氧末端終止法

化學(xué)法

測(cè)序技術(shù)進(jìn)展+-MarkDNA測(cè)序的基本策略

設(shè)法產(chǎn)生帶標(biāo)記的不同長(zhǎng)度的成套DNA片段，各帶有標(biāo)記的片段起點(diǎn)相同、終點(diǎn)不同，使待測(cè)的DNA鏈中的相應(yīng)每個(gè)核苷酸處都有斷裂或終止。通過(guò)高分辨率的電泳，能夠?qū)⑾嗖钜粋€(gè)核苷酸的DNA片段分開(kāi)，根據(jù)DNA片段長(zhǎng)短排列順序及其末端堿基就可讀出待測(cè)DNA的堿基序列。

雙脫氧末端終止法

化學(xué)法

測(cè)序技術(shù)進(jìn)展+-Mark有相同的起點(diǎn),不同終點(diǎn)的一套DNA片段示意圖電泳圖譜

雙遺脫閉氧賢末維端激終抗止凡法敵測(cè)欣序賄原鑰理酶鞏反史應(yīng)電頃泳架方乎向模板CCGGTAGCAACT3′5′GG5′3胡′引予物d流A拘T低P薯d泛C乒T愧P困d部G打T血P販d底T傘T喝P+d故d進(jìn)A繡T總Pd或A缺T肅P循d溉C朝T產(chǎn)P紋d鵝G國(guó)T摔P奴d枕T賤T拒P+d券d貝T剖T魂P(guān)d融A邊T崗P裳d想C絮T條P逐d充G葡T化P任d判T旱T夢(mèng)P+d必d品G抖T禿Pd撲A桿T余P旦d鑄C丘T可P證d芬G裳T葉P礎(chǔ)d雄T喬T董P+d謙d蘭C罩T怠PG睬G蠅C公C鵝AG娃G頑C赤C很A啄T圈C雜G宗T駐T士G邁AG聞G臭CG垃G奸C協(xié)CG閉G膜C雨C曲A使T掙CG筐G身C厭C拾A巾T逼C棄G學(xué)T憐T租GG得G衡C土C件A療T忽C市GG墳G穗C讀C腥A述TG灶G短C這C私A達(dá)T志C茂G倡TG巴G失C朗C衰A緩T銷C反G絡(luò)T輛TA籍C猾G翻TAGTTGCTACC3′5′TCAACGATGG5′3′讀出模板互補(bǔ)序列讀出模板序列G芹G銜C筆C俯A沙T定C泛G辦T嗽T朱G送AG型G肝C疫C餐A晉T配C朝G襪TG牲G填C挺C討A困T遠(yuǎn)C圾G扶T皂T撤GG暫G例C怒C漠A藏T那C靜G洪T嚇TG親G鏟C譯C炮A絞T趙C準(zhǔn)GG吧G灘C貨C擇A駁T造CG職G諸C輪C儀AG可G厚C光C抄A院TG圈G扭C背CG察G宮C雙原脫輔氧各末毒端趁終傻止蛙法（太S咱a例n逗g沾e智r嫌測(cè)罷序晉法漫）

讀出模板互補(bǔ)序列d挽N犧T鈴P

凝膠電泳

較大片段

較小片段ddGTPddATPddCTPddTTP反鬧應(yīng)佳混喊合糟物K汁l季e桃n膊o賴w酶未王知慢序約列寬的謹(jǐn)單子鏈盡D臥N啟A

讀出待測(cè)序列C沉T勇G喚A鴉C助T很T枕C歸G梅A律C脹A璃AA達(dá)G拒A即A5′3′放良射仗性曬標(biāo)囑記躁的粗引盲物T桑G邀T葉TACTGddGddGddGddGGACTGAAGCTGTT3′5′CTGACTTCGACAA5′3′D壯N厘A絡(luò)的俊測(cè)扣序伙儀抵示剩意庭圖c與o鴉m津p悼u李t興e提r退a捉n臺(tái)a妥l摧y憶s斗i獅s凝壟膠糕中踏D劍N油A賞移厲動(dòng)奴方捷向樣寒品穗槽激五光鹿器輸跑入尸光味學(xué)粗系質(zhì)統(tǒng)成均象幼透度鏡聚千焦伍透菜鏡高市靈秤敏搭度剛相肢機(jī)旋沖光腳鏡源/糧棱冒鏡間組莫件D女N謹(jǐn)A見(jiàn)的屬化辯學(xué)燒測(cè)盒序指示嶺意方圖反賭應(yīng)慮試之劑G構(gòu)反鍬應(yīng)晝：違硫儲(chǔ)酸帶二避甲厲酯G慕+賞A凍反豎應(yīng)冶：障甲乖酸T桐+馬C分反堅(jiān)應(yīng)地：蘭肼C飲反望應(yīng)恨：穿N筍a詠C肢l籍+飼肼測(cè)樂(lè)序碰技娛術(shù)子進(jìn)捎展同顏位悅素宵標(biāo)吳記貓到縫熒影光津標(biāo)勵(lì)記繡,掉平速板腿電遠(yuǎn)泳都到孩毛壺細(xì)圾管供電墊泳多滿色耍熒太光表標(biāo)強(qiáng)記毛稿細(xì)憂管碼電佛泳單狀色如熒意光巨標(biāo)坊記平線板眨電梨泳同紗位愿素只標(biāo)歐記平押板辨電工泳ACGTACGT測(cè)慶序烈圖砌譜TAT筍TGCAT拳TGTCTGCAT約TGTCT引率物徐標(biāo)忘記萬(wàn)法襯測(cè)祝序(D誼y肺e般P擁r鈴i足m堵e字r)一煌個(gè)潛樣瘡本賀，震4糧個(gè)所反句應(yīng)熄。劈燕4認(rèn)個(gè)欠反收應(yīng)漁中甲引咬物警序縮慧列煙相居同販，冶但鎖分寬別耀標(biāo)均記濤有著不脈同算顏述色朗的勉熒脅光術(shù)。+AmpliTaqFSenzymedCTP,dATP,dGTP,dTTPddATP(terminator)反蒜應(yīng)黎結(jié)容束曾后交，盯將佩4君管別反瞇應(yīng)茶液趙混欄合植，輕經(jīng)冰乙劃醇翠沉極淀列后柱上曬樣+AmpliTaqFSenzymedCTP,dATP,dGTP,dTTPddGTP(terminator)+AmpliTaqFSenzymedCTP,dATP,dGTP,dTTPddCTP(terminator)+AmpliTaqFSenzymedCTP,dATP,dGTP,dTTPddTTP(terminator)終火止棟法像測(cè)銷序(件D核y擺e督T坦e治r史m萌i套n辛a洲t磚o照r購(gòu))一它個(gè)瘦樣匙本吩，國(guó)1做個(gè)訴反惠應(yīng)根。歪反莊應(yīng)果中壟包區(qū)含糟分聰別創(chuàng)帶余4必色怒熒手光扯標(biāo)平記質(zhì)的廉d鳥(niǎo)d處N做T離P艱(鳴終暖止師子韻)u品n飼l潤(rùn)a搬b某e奇l沉e談d粱p弓r嶼i槍m飽e撿rt駝e奧m甚p暖l手a宗t避e功D速N第A+A德m雹p蠢l拔i鎮(zhèn)T謊a肆q秒F遍Sd另A掘T供P輪,資d南C所T適P版,旬d數(shù)G慣T萍P露,逃d慚T薪T雙Pd宵d蠟C敘T辮Pd駁d攏A中T孫Pd醒d嘆G跪T仰Pd相d撞T泥T父P測(cè)件序深反催應(yīng)興結(jié)明束年后攀，灘采豎用捎乙慚醇黎沉過(guò)淀盼法鍵進(jìn)億行疫純鬧化拆，基除畫(huà)去設(shè)過(guò)綿量鈴的雕d絕d鐘N間T塔P抵后科上棵樣晨。第勸二遲節(jié)美重迎組D緊N津A技雞術(shù)存的?；蟊鞠共俎Z作葬原遷理重皂組功D刊N萌A智是翻基飾因鹽工陽(yáng)程百的警核禾心學(xué)技扭術(shù)女，畫(huà)即晨把瘦D罩N治A艙作塊為慨組攪件喚，犧在輩細(xì)猴胞駱外吵將淚一鑄種回外蠅源掌D畝N創(chuàng)A瞧（摸目案的活基曾因祖）淡和濤載取體蒼D證N完A喘重方新透組害合均連罷接化（芬重沉組丘）媽，歡最班后勺將撤重悉組字體熔轉(zhuǎn)矩入駕宿粘主肌細(xì)第胞史，均使遣外紫源絹基令因揚(yáng)D系N念A(yù)俘在津宿隆主孫細(xì)雅胞吊中鮮隨拍細(xì)窯胞鳳的錯(cuò)繁滿殖海而厘增糊殖釋（柴c元l厚o忽n竟i概n屋g皺，析克洗隆括）臥，程或凱最頁(yè)后后得稀到箏表虛達(dá)匹，吧最宿終膏獲爪得千基肌因陷表黃達(dá)憂產(chǎn)牌物艱或謎改碧變潮生田物右原賓有辭的料遺漿傳螺性芝狀幕。一顫、D叔N勵(lì)A(yù)生重憤組遙技絹術(shù)重紐奉要腸的鼓工滋具害酶二亡、重普組檢D叮N濤A快技籍術(shù)率的酒基脾本訂操蘆作未原量理返任回一講、重僑組屋D腹N蘋A晌的爬重合要尺的奏工蝕具矛酶1昨、限原制谷性煌內(nèi)著切茫酶2按、D碗N攔A連援接虹酶3警、逆飛轉(zhuǎn)墓錄鞋酶常邀用烈的訂D喝N峽A憤限顛制項(xiàng)性史內(nèi)攻切便酶巡壽的鹽專廈一扶性酶辨萍認(rèn)搬的炊序禍列施和流切所口特踢點(diǎn)‥腎‥燥A品G罪C院T至‥妄‥‥推‥勞T沸C閘G醒A倆‥追‥‥伙‥寫G挑G棗A乓T疼C犯C裝‥悉‥‥貓‥旁C瘦C朝T再A伏G陽(yáng)G霉‥隱‥‥飽‥君A圖G艦A擴(kuò)T幟C喇T狂‥繁‥‥妨‥繳T副C據(jù)T普A脆G笛A飯‥似‥‥許‥日G滾A碧A嚷T吵T爆C礎(chǔ)‥楊‥‥僑‥紅C劃T棟T叫A仗A括G熔‥站‥‥腹‥煙A榨A瓣G方C漸T瘡T去‥濱‥‥王‥仁T蠅T姻C鵝G精A芒A采‥捉‥‥及‥蒜G辰T每C爆G帳A鐵C前‥葡‥‥鞠‥淘C沸A鬧G忍C洽T墓G脂‥沖‥‥成‥身C寸C房誠(chéng)C精G期G易G庭‥書(shū)‥‥段‥頁(yè)G薦G煩G利C集C娘C秋‥且‥B旬a(chǎn)冠m冷H容IA缸l權(quán)u汁IB蠢g鄙l耀I(xiàn)E討c默o乓R丈IH悉i笛n追d設(shè)ⅢS杠a攪l民IS貪m租a祝I四木核貴苷墾酸牢，彈平脾端夾切睬口六唇核蹤蝶苷銳酸收，率平介端追切貨口六犁核文苷劉酸偷，傳粘押端昂切嘩口六冒核止苷挖酸涉，宰粘睬端燒切謙口六茶核逗苷叼酸溪，魄粘攏端臺(tái)切悲口六個(gè)核聽(tīng)苷箭酸宅，噸粘結(jié)端敵切必口六摘核辣苷屬酸崖，濱粘戀端鼠切濫口連趣接禿酶稀連增接公切墳口M碼g2火+連跑接牙酶ATP或NAD＋AMP+PPi或NMN+AMPTCPTTPPPGAPACPPPPO付HGATCGPTTPPPAACCTGAPACPPPTGGP缺裕口3晌'AGAACCTTG3'5'5憲'5孕'5稿'3鳥(niǎo)'3運(yùn)'模療板本鏈模年板晴鏈反投轉(zhuǎn)喚錄挑酶場(chǎng)的鉤三縫種佩催簽化眨功福能依賴RNA的DNA聚合酶核糖核酸酶H活力依賴DNA的DNA聚合酶重典組叔D貌N葬A弟技悉術(shù)申基隨本漲操柴作市原汪理ForeignDNAtobeinsertedPlansmidvectorJoiningRecombinantDNAmoleculeIntroductionintohostcellsbytransformationofviralinfectionHostchromatemeSlectionforcellscoteiningarecombinantDNAmoleculeCloning+1青、目蒜的扒基培因的本獲紹取2凝、載肯體的昌構(gòu)斃建3題、置目勤的姓基貝因架與相載肝體直的吉重勒組4爺、零重導(dǎo)組昏體導(dǎo)庸入宿蘭主頁(yè)細(xì)偉胞殃進(jìn)懲行串?dāng)U霉增5績(jī)、篩館選杯克鉆隆移細(xì)發(fā)胞目瞞的邪基徹因憂的哥獲晝?nèi)?杜、惹建暫立D受N玩A襪和莫c橋D醉N訪A裕文戰(zhàn)庫(kù)2垂、宿體朝外夠擴(kuò)書(shū)增注—拒P痰C錦R畏技限術(shù)3陽(yáng)、近人蹤蝶工蟲(chóng)合儀成重軌組黃D港N夸A呈技螺術(shù)欲路息線摘—姥1基柜因來(lái)文忍庫(kù)睜(鐵D男N婦A哪l控i滅b裳r聾a欄r茄y搶)基史因墳文既庫(kù)驗(yàn)是伍指螺整神套燥由罪基蓋因櫻組要D規(guī)N甩A倦片剛段姿插喚入遵克縣隆合載蓄體統(tǒng)獲紅得穴的妹分戰(zhàn)子勻克停隆商之灶總跳和尖。雕應(yīng)刊用輕D口N泥A鈔重園組檢技剃術(shù)茄，俱可祖以新將破各潤(rùn)種跌生提物惑體晨全惱部旗基愚因殼組浪的轉(zhuǎn)遺逝傳貓信姿息倆，腸貯早存柏在北可抽以構(gòu)長(zhǎng)瓦期傳保蟲(chóng)存出的絲式穩(wěn)鴿定誤重脊組爛體翠中燙，扶以溫備程需吼要櫻時(shí)蔬應(yīng)蓮用喪。巡壽好討象寒將智文悅獻(xiàn)渴資禍料盤貯媽存低于安圖偽書(shū)嘗館壺一秀樣徒，畜所般以預(yù)稱索其筑為狐g否e萄n圈o著m知i韻c躍l郵i擔(dān)b訪r路a章r孕y杏。c猛D話N肌A棵文館庫(kù)避（則c日o忘m開(kāi)p座l驅(qū)e吊m糊e恐n迷t款a板l逝D撕N渠A或l絲式i駱b榆r育a東r吳y揭）將烈細(xì)熱胞嘩全筍部蝕m差R巡壽N導(dǎo)A凍反決轉(zhuǎn)棵錄每成開(kāi)c晶D擊N禁A奪并怪被蝴克茂隆證的釘總姑和汗稱隸為潮c缺D食N邁A為文洪庫(kù)?；I因仙文更庫(kù)蛾和鐵c島D允N趁A腳文好庫(kù)血的煮建酒立可載克貪隆南之減D跪N還A載近體D江N提Ac榆D擠N片Am東R緣瑞N遼A部型分誤或豪完誦全記酶許解匆D掛N筐AD按N杯A悔長(zhǎng)有度基分成級(jí)甲妖基減化駕，麗雙蹲鏈旅接惡頭佛D舅N咽AD學(xué)N強(qiáng)A任與旅載伴體咐連仔接引壤入噸大拿腸郵桿唉菌鑒晉定喇文刷庫(kù)候的般滴執(zhí)度汪和防特罩性擴(kuò)怒增衣后雨供撓長(zhǎng)盯期生儲(chǔ)跳存篩混選嶄出港所肺需仔要鋸的抬克鄉(xiāng)豐隆組萬(wàn)織D笛N嫩A克掌隆別的賀載截體1鎖、質(zhì)航粒2槐、噬益菌貝體3夾、動(dòng)犯物么病葛毒4塘、植考物寸寄皺生維菌重高組每D宋N蔑A序技恥術(shù)饅路枝線洪—慰2重狐組臟D觀N娘A底轉(zhuǎn)苗移愚技奶術(shù)1白、中轉(zhuǎn)拳化新(級(jí)t獲r陷a海n吸s淹f罵o丘r砍m微a播t猛i悔o灰n離)舅：經(jīng)以黃質(zhì)榮粒申為儀載暮體邀構(gòu)道建乒的幣重陸組淋D范N兩A遲分慮子架導(dǎo)蔥入訪受慚體媽細(xì)柱胞某的落過(guò)執(zhí)程虎。2舞、在轉(zhuǎn)益染艷(T前r輪a川n史s谷f(wàn)頓e肺c沸t敬i蘿o析n)議:命以疊噬徑菌跌體虎或路真占核添病士毒汗為因載政體紐奉構(gòu)欣建詳?shù)呐恐氐敖M遵體輝依體靠撿對(duì)水細(xì)愿胞菌的聲感奧染杠功惕能低導(dǎo)濟(jì)入岸受貞體聰細(xì)嚴(yán)胞鏈的顫過(guò)悔程熊。3浮、電研穿乞孔薯法(導(dǎo)e雅l譽(yù)e劇c僅t況r斥o設(shè)p方o退r錦a友t教i仁o根n腿)諒:由高專壓扁脈銀沖廳電兔流民使視細(xì)屬胞揮產(chǎn)突生向臨鮮時(shí)跳的昌通番透擁性?shī)^以舌吸緩收壁D鳴N殺A宅。4杜、具微壯注驚射認(rèn)法象(血m構(gòu)i疼c軋r良o(jì)趴i勻n摟j嗽e漿c艱t賀i同o妙n桿)否:易借壘助任極皂細(xì)筋針座管銅的零幫砌助元把懲D但N器A夕注親射捷入瞧細(xì)踩胞結(jié)核疫的第方恰法拍。重丹組發(fā)D黃N概A斜技季術(shù)敘路趙線塔—蜓4電煤穿擾孔燙法貨示當(dāng)意鏟圖細(xì)滑胞叛壁原屢生癢質(zhì)糾膜纖滔維沉素軍酶電殿穿控孔細(xì)青胞期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