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PCR模板降解低溫保存質(zhì)純化模板引物濃度缺乏調(diào)整引物濃度,特別是針對長片段PCR引物應(yīng)高濃度小量分裝,-20℃保存,避開反復(fù)凍融Mg2+濃度偏低0.5mM間隔遞增,針對不同模板和引物摸索最正確Mg2+濃度dNTP-20℃保存,小量分裝,避開反復(fù)凍融酶量缺乏適當增加酶量用酶不當PCR模板變性不充分98℃Tm5℃延長時間缺乏增加延長時間,特別是針對長片段PCR循環(huán)數(shù)目不夠增加循環(huán)數(shù)PCR復(fù)使用PCRPCR污染Mg2+濃度過高Mg2+1mM3mM0.5mMMg2+dNTPdNTP0.5U退火溫度過低提高退火溫度循環(huán)次數(shù)過多削減循環(huán)次數(shù)片段過長PCR其他HotStartPCRTouchDownPCRPCR引物濃度過高降低引物濃度模板濃度過低提高模板濃度循環(huán)次數(shù)過多削減循環(huán)次數(shù)HotStartPCR引物序列特異性差或模板上存在同源序列重設(shè)計引物模板降解重制備模板模板濃度過高降低模板濃度Mg2+濃度過高Mg2+1mM3mM0.5mMMg2+濃度酶量過多或質(zhì)量差0.5U酶遞增退火溫度過低提高退火溫度延長時間過長縮短延長時間體系污染設(shè)計比照試驗,消退污染源PCRPCR假陽性目標
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