珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選課件

珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選1、戰(zhàn)鼓一響，法律無聲?！?、任何法律的根本；不，不成文法本身就是講道理……法律，也----即明示道理?！獝邸た瓶?、法律是最保險的頭盔?！獝邸た瓶?、一個國家如果綱紀不正，其國風一定頹敗?！麅?nèi)加5、法律不能使人人平等，但是在法律面前人人是平等的?！蹇酥楹＜t樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選1、戰(zhàn)鼓一響，法律無聲。——英國2、任何法律的根本；不，不成文法本身就是講道理……法律，也----即明示道理。——愛·科克3、法律是最保險的頭盔?！獝邸た瓶?、一個國家如果綱紀不正，其國風一定頹敗?！麅?nèi)加5、法律不能使人人平等，但是在法律面前人人是平等的?！蹇酥楹＜t樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活性篩選答辯人：吳水平指導老師：蔡小玲講師中山大學化學與化學工程學院第八屆創(chuàng)新化學實驗與研究基金項目結(jié)題答辯化學與化學工程學院海洋天然有機物研究室研究背景和意義海洋微生物天然產(chǎn)物是近年來尋找新藥的國際研究熱點，從海洋微生物的天然產(chǎn)物中篩選具有活性的化合物成為先導化合物，具有重大的理論意義和應用價值。紅樹林作為海洋與陸地植物圈的接合部，其伴生的微生物類群屬海洋微生物，又具有植物內(nèi)生微生物的特點，這也造就了紅樹林內(nèi)生真菌具有獨特的代謝途徑和遺傳背景，因此對它們的代謝產(chǎn)物進行活性物質(zhì)的篩選研究可能會有可喜的發(fā)現(xiàn)。對于大多數(shù)學生來說，初中階段是他們學習英語真正的開始，因此這一階段的英語學習對于其日后學習和工作有著相當重要的奠基作用。在當代注重學生綜合素質(zhì)與實用能力提升的背景下，我們進行英語教學的著重點應放在能夠幫助學生實現(xiàn)對英語的靈活運用而非單純是對中考中取得理想成績。然后由于一些因素的影響，現(xiàn)階段的初中英語課堂教學仍舊存在著一些比較嚴重的問題。一、提升初中英語課堂教學活動實用性的重要意義英語課堂教學活動是鏈接教師與學生的重要環(huán)節(jié)，提升其有效性、實用性就意味著學生能夠在課堂中接受更多的有效信息。而要想實現(xiàn)這個目標，就要求英語教師能夠充分整合手中現(xiàn)有的教育?Y源，以英語教學規(guī)律與初中生的認知規(guī)律為基礎，靈活運用多種教學方式及教學手段，創(chuàng)造出富有活力且高效的英語課堂，這對于提高學生對于英語的學習興趣、減輕學習負擔并未今后英語應用都能夠打下堅實的基礎，因此具有極為積極的意義。二、現(xiàn)階段初中英語課堂教學中存在的問題盡管近年來廣大英語教師在思想轉(zhuǎn)換、活動設計的多樣化等方面取得了非常喜人的進步。但是其中仍舊存在著一些缺點和不足。1.課堂活動的濫用導致課堂教學偏離中心。受情節(jié)模式理念的影響，初中英語課堂上，每節(jié)課教師都必然要組織學生來一次互動活動，使得課堂上氣氛熱烈，表面看學生的參與度與積極性都非常高，可是從學生的學習效果卻并不理想。2.多媒體設備的應用效果亟待提升?，F(xiàn)階段初中英語課堂在多媒體的應用效果方面比較差強人意。這里的效果并非指使用多媒體設備的熟練程度，而是對如何使其與課堂教學相結(jié)合的認識不夠，也就是多媒體與課堂教學的契合度不高，導致設備的使用效率低下。例如一部分教師，直接采取網(wǎng)上下載或者使用同事制作的成品課件，并將其紋絲不動地應用在自己的課堂上。在這種情況下所使用的課件與其授課風格必然存在著一定的“不合”，從而使多媒體的應用效果大打折扣。3.教學模式過于固定，缺乏靈活運用。現(xiàn)階段有許多英語教師在授課過程中教學方式比較僵化，恪守著既定課堂模塊。例如在當代頗為流行的“校本課程體系”，不少初中學校的英語教研組為了彰顯業(yè)績，會推出“某某某課堂教學模式”，并要求英語教師在上課過程中予以執(zhí)行。導致教師在進行授課時不能根據(jù)課程的內(nèi)容進行合理設置在課堂教學中。三、提升初中英語課堂教學效率的建議針對上文提出的問題，筆者經(jīng)過深入分析，提出以下幾點富有解決性的建議。1.圍繞教學重點組織教學活動。初中生在生理發(fā)育上雖然較小學生有了很大進步，但是仍舊屬于未成年人范疇，他們的思維注意力也同樣非常容易因為外界事物的干擾而發(fā)生轉(zhuǎn)移。因此在我們的初中英語課堂中，教師一定要注意對課堂教學目標的把握并進行重點。教學活動首先要符合初中生的生理特點以及接受領悟能力；其次是教學活動的設計要具備一定的趣味性。例如在進行初中英語三年級上冊Unit2―Wondersoftheworld部分的教學時，可以在前幾天分成若干小組，每個小組負責指定區(qū)域內(nèi)名勝古跡或者著名人文景觀的收集，然后在課堂上進行小組展示，這樣既增強了學生們的知識面，并且真正突出了本節(jié)課的教學目標。2.大力提升多媒體的應用效果。多媒體作為當代信息技術(shù)飛速發(fā)展的產(chǎn)物，可以將我們上課時所需要的視頻、音頻、動畫等要素進行統(tǒng)一和融合。這種模式不僅體現(xiàn)在教學方法上，還應該全方位地體現(xiàn)在教學思路和教學理念之中。教師對于多媒體的應用既要防止淺嘗則止，又要杜絕一味依賴，而是要力爭實現(xiàn)充分利用、突出效果，使其成為我們提升課堂教學效率的強大助力。例如在九年級下冊的《Myfuturelife》授課時，教師可以從網(wǎng)上下載既體現(xiàn)正能量又符合初中生審美習慣的素材做成PPT，并用語言將這些素材貫穿起來，從而使整堂課顯得更加流暢，多媒體的應用也更加有的放矢。3.實施多元化教學方式，引起學生學習興趣。不可否認，校本課程模式的確在一定程度上體現(xiàn)了集體智慧的結(jié)晶，它對于那些授課風格尚未固定、授課時間較短的青年教師的確能夠起到幫助他們快速成長之目的，但必須引起我們注意的是，校本課程體系不等于抹殺教師的個性，因為每名英語教師的優(yōu)勢和劣勢都是不盡相同的。這就要求我們要給予教師充分的自主權(quán)，使他們能夠針對每節(jié)課的授課內(nèi)容與重點的不同，靈活多變地對教學方式與流程進行排列組合，揚長避短，使每堂課都充滿新意，從而進一步吸引學生的注意力，為課堂教學效率的提升提供幫助?？偠灾?，在新課程標準下，學生對于英語的實際能力被高度強調(diào)，加上“減負”的時代背景，使得初中英語課堂的教學效率提升成為了學界關注的重點。只有在課堂中圍繞教學中心合理搭配教學活動，充分發(fā)揮多媒體在授課過程中的輔助作用，尊重每位教師的授課風格和差異化，盡可能使其揚長避短，才能使我們初中英語的教學效率得到切實地提高。初中化學教學是化學教育的啟蒙階段。新課程標準要求貫徹全面發(fā)展的方針，著眼于提高全民族的素質(zhì)，要以化學基礎知識教育學生，培養(yǎng)學生的基本技能和能力，為學生參加社會主義建設和進一步學習打好基礎。在農(nóng)村尤為如此，要實現(xiàn)這一目標，提高教學質(zhì)量，就必須以提高課堂教學效率和質(zhì)量為中心，從以下幾個課堂教學策略入手。一、明確教學目的和具體任務教無定法，但教有定規(guī)，這是教學的根。教學大綱就是教學的根。教師首先要組織一堂課，根據(jù)教學大綱、教材和學生實際，確定教學目的和任務。教學目的和任務是教學的綱，一要具體明確，二要全面恰當。明確哪些知識技能應該理解或掌握，以及通過哪些內(nèi)容、活動或練習，培養(yǎng)學生的能力和思想品德。同時，要全面考慮發(fā)展雙基和教育的各項任務以及能力的培養(yǎng)如何貫穿在學習知識、技能的過程中。二、教學方案設計化學教學方案的設計是教師上好課的前提條件，是根據(jù)化學教學目的、教學任務和教學目標，結(jié)合化學教學內(nèi)容、學生的實際水平和具體情況，以及教學條件和環(huán)境，并預測在教學過程中可能引起的教與學的效果。要設計好教學方案必須做到以下幾點：1.備教材。教材是課堂教學的主要依據(jù)，教師只有對教材的高度熟悉，對教材相關的知識點做到博學精通，心中有數(shù)，以及注意對教材內(nèi)容的前后聯(lián)系，這樣才能回答和處理學生就教材內(nèi)容提出的疑問，自如地駕馭課堂教學。2.備學生。要知道學生的實際情況，了解學生的知識能力及興趣愛好、課外閱讀等方面的情況，把握學生的思維動向。要注意把握學生思維的脈搏，關注學生認知發(fā)展的動向。3.備習題。化學習題浩如煙海。教師在習題中應有目的、有計劃地去精心選題，善于分析其中的因果關系，讓學生掌握題目所給的條件，明確要求，并由表及里地指導學生從不同角度去考慮化學問題，從而使學生獲得解決化學問題的正確思路。4.備學法。老師的備課要探討學生如何學，指導學生如何進行預習、聽課、記筆記、做實驗、做復習、做作業(yè)等，要考慮到學生觀察能力、想象能力、思維能力、推理能力及總結(jié)歸納能力的培養(yǎng)。5.備課堂。備課堂實際上是在腦海里活現(xiàn)上課情景，既要把講課的內(nèi)容、方法、步驟仔細推敲、揣摩，又要在頭腦中裝著學生，形成一個在腦海中上課的情景。多從學生方面考慮，才有利于提高教師的應變能力。6.備演示實驗。演示實驗是化學課堂教學中非常重要的一個環(huán)節(jié)，演示實驗的成功與否將直接影響教學進度和教學效果。這就要求教師必須對所演示實驗的目的要求、儀器裝置、實驗藥品等做到心中有數(shù)，確保準確無誤，并在保證實驗效果的直觀性強、簡易快捷以及實驗安全等前提下做好預備實驗。三、運用適當?shù)慕虒W方法教學方法，是完成教學任務所采用的手段，是使教學過程達到優(yōu)化的一種推動力?；瘜W教學要從學生實際出發(fā)，從學科的特點出發(fā)。初中生剛剛開始學習化學時，對實驗現(xiàn)象興趣很濃，但并沒有因此形成穩(wěn)定發(fā)展的內(nèi)在動機。初中生關于化學的準備知識是薄弱的，加上化學運動形態(tài)較物理運動形態(tài)更復雜、更抽象，一般難以直接地、簡明地重現(xiàn)，這就給學生化學思維能力的發(fā)展，帶來了較大的困難。再加上初中階段的學習內(nèi)容受學習水平的限制，描述性知識偏多，概念多，而且集中。所以，教師要有針對性地下工夫，在教學中隨時向?qū)W生指明需要記憶的內(nèi)容、記憶的方法，要努力化難為易，多聯(lián)系學生熟悉的常識和日常生活中的實際，多設計一些生動形象化的教學方式，多引導學生議論、討論和練習。在學生認識水平的基礎上，引導其得出結(jié)論，并將該結(jié)論上升為概念和理論。運用多媒體和實驗等為學生創(chuàng)設更好的學習情境，針對初中學生的心理特征，最主要的是激發(fā)和發(fā)展學生探索、求知的內(nèi)在動機。通過實驗教學激發(fā)學生學習的興趣，幫助學生形成概念，獲得知識和技能，培養(yǎng)觀察能力和實驗能力，同時便于學生記憶和再現(xiàn)化學知識。因此，教師一定要加強演示實驗和學生實驗的教學。四、讓化學教學回歸生活化學新課程標準對教材編寫的主要特點就是：結(jié)合學生熟悉的生活情景和已有的實際經(jīng)驗，提煉學習素材，從豐富、生動的現(xiàn)實生活素材中設計學習主題，激發(fā)學生學習化學的興趣，使學生逐步認識化學對日常生活和社會發(fā)展的重要影響?；瘜W知識需要溶入現(xiàn)實生活之中，才能顯示出活力，才能激發(fā)學生的學習欲望。因此，在農(nóng)村初中化學實驗設備有限的條件下，要讓化學回歸生活，重視學生已有的經(jīng)驗和體驗，把課堂知識與學生日常生活、社會生產(chǎn)等聯(lián)系起來，把理論和實際結(jié)合起來，活學活用，學生才學得有趣，才會感覺到化學就在身邊，化學與日常生活關系密切，學有所用，進而激勵學生學好化學。教學是一門藝術(shù)，教師的教要落實到學生的學上。教師的教學策略要得當，課堂教學要合乎科學性、系統(tǒng)性、趣味性，充分調(diào)動學生學習的主動性，讓學生積極參與到教學的各個環(huán)節(jié)，從而提高教學質(zhì)量。珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選1、戰(zhàn)鼓一響，法律無聲。1珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活性篩選答辯人：吳水平指導老師：蔡小玲講師中山大學化學與化學工程學院第八屆創(chuàng)新化學實驗與研究基金項目結(jié)題答辯化學與化學工程學院海洋天然有機物研究室珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活性篩選答辯人：吳水平中2珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選課件3珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選課件4珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選課件5珠海紅樹林海洋真菌代謝物抗腫瘤活篩選課件6代謝物對hTopoⅠ抑制活性篩選獲取海洋真菌代謝粗提物終止反應，用1％瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后，genegenius全自動凝膠成像分析系統(tǒng)分析測試結(jié)果

制備超螺旋質(zhì)粒DNA、hTopoⅠ在共20μLhTopoⅠ樣品反應體系中，加有4μL反應緩沖液，0.5μg負超螺旋pBR322、1U的hTopoⅠ及0.5μL測試樣品。同時做空白對照，陰性對照、陽性對照以及DMSO溶劑對照。37℃反應30分鐘代謝物對hTopoⅠ抑制活性篩選獲取海洋真菌代謝粗提物終止7木欖從左到右依次為：ZH45、ZH15、ZH50、ZH51、ZH68、ZH164、ZH58、陰性對照、ZH44、陽性對照、DMSO對照、空白對照鹵蕨從左到右依次為：ZH71、ZH55、ZH30、ZH218、ZH154、ZH11、陰性對照、陽性對照、DMSO對照、空白對照木欖鹵蕨8桐花樹從左到右依次為：ZH63、ZH64、ZH93、ZH2、ZH65、ZH97、ZH81、ZH135、ZH208、ZH209、ZH10、ZH14、陰性對照、陽性對照、DMSO對照、空白對照海桑從左到右依次為：陰性對照、陽性對照、DMSO對照、空白對照、ZH116、ZH117、ZH173、ZH61、ZH87、ZH88、ZH91、ZH178、ZH57、ZH4、ZH62、ZH111、ZH222、ZH75桐花樹海桑9闊苞菊從左到右依次為：陰性對照、陽性對照、DMSO對照、空白對照、ZH79、ZH177無瓣海桑從左到右依次為：陰性對照、陽性對照、DMSO對照、空白對照、ZH80、ZH131秋茄從左到右依次為：陰性對照、陽性對照、DMSO對照、空白對照、ZH9、ZH82、ZH83、ZH151銀葉樹從左到右依次為：陰性對照、陽性對照、DMSO對照、空白對照、ZH73、ZH74、ZH228、ZH34、ZH72、ZH182闊苞菊無瓣海桑秋茄銀葉樹10統(tǒng)計結(jié)果篩選出ZH116、ZH178、ZH71、ZH11、ZH154、ZH55、ZH30、ZH15、ZH50、ZH45、ZH44、ZH58、ZH151、ZH93、ZH34、ZH228、ZH74、ZH182和ZH72共19株海洋真菌的代謝物有較強的hTopoⅠ抑制作用；另外有ZH61、ZH88、ZH79、ZH218、ZH68、ZH82、ZH83、ZH64、ZH10、ZH135、ZH209、ZH81和ZH164共13株菌的代謝物也對hTopoⅠ有一定的抑制活性；剩余22株菌的代謝物要么沒有抑制活性，要么抑制作用太弱。統(tǒng)計結(jié)果篩選出ZH116、ZH178、ZH71、ZH11、Z11收集對數(shù)生長期的受試靶細胞，接種于96孔板，每孔190μL（約1×104個細胞/孔），24小時后加入不同梯度濃度藥物10μL，每一濃度3個重復孔。同時設置調(diào)零孔、對照孔。培養(yǎng)68小時后加入MTT10μL（濃度為5mg/mL）。繼續(xù)培養(yǎng)4小時后棄上清，每孔加入DMSO100μL后用酶聯(lián)免疫檢測儀測定492nm處吸光度OD值，以藥物濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制抑制曲線。對照組吸光值減少一半時所需的藥物濃度為IC50濃度。體外腫瘤細胞毒性實驗（MTT法）收集對數(shù)生長期的受試靶細胞，接種于96孔板，每孔190μL12細胞毒實驗結(jié)果表2篩選樣品對KBv200的IC50菌株編號IC50（μg/mL）菌株編號IC50（μg/mL）ZH1127ZH6812ZH111205ZH71＜＜11ZH116＜＜11ZH7231ZH11724ZH73456ZH13115ZH7422ZH16425ZH75＜＜11ZH3427ZH79100ZH5161ZH8022ZH5538ZH8142ZH5723ZH82＜＜11ZH6118ZH83133ZH6224ZH8732ZH6334ZH9119ZH64＜＜11ZH9331ZH6523

細胞毒實驗結(jié)果表2篩選樣品對KBv200的IC50菌株編13表3篩選樣品對MDA-MB435的IC50（μg/mL）菌株編號IC50（μg/mL）菌株編號IC50（μg/mL）ZH251ZH135＜＜11ZH436ZH151＜＜11ZH938ZH154＜＜11ZH1065ZH17315ZH1427ZH177＜＜11ZH15＜＜11ZH17849ZH30＜＜11ZH18266ZH44＜＜11ZH208205ZH4598ZH209201ZH5052ZH21848ZH58＜＜11ZH22256ZH88＜＜11ZH228＜＜11ZH97＜＜11一共篩選得16株有強烈腫瘤細胞毒作用的海洋真菌。表3篩選樣品對MDA-MB435的IC50（μg/mL）1419株代謝物對hTopoⅠ有較強抑制作用的海洋真菌中，有ZH228、ZH116、ZH151、ZH58、ZH30、ZH44、ZH71、ZH15、ZH154共9株真菌的代謝物能強烈抑制腫瘤細胞的生長。據(jù)此可以確定這9株真菌的代謝物中含有以hTopoⅠ為靶位點的強效抗腫瘤化合物，其中以ZH228、ZH116、ZH151、ZH58四株真菌的作用效果最好，應該作為優(yōu)先研究的對象。另外的10株對hTopoⅠ有較強抑制作用的海洋真菌盡管在腫瘤細胞毒試驗也有一定的抑制效果，但不是太強，可能跟其活性化合物的穩(wěn)定性差有關，進入細胞后被代謝成低活性的化合物，抑制效果也相應下降，研究價值不大。結(jié)論119株代謝物對hTopoⅠ有較強抑制作用的海洋真菌中，有ZH1516株具有較強細