生化干擾試驗(yàn)-課件

實(shí)驗(yàn)十VC對(duì)酶法測(cè)定（CHOD-PAP法）

膽固醇

的干擾

臨床生化教研室：

雷燕

鄒家瓊實(shí)驗(yàn)十VC對(duì)酶法測(cè)定（CHOD-PAP法）

1干擾試驗(yàn)是測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法特異性誤差和干擾引起的誤差首先確定被試物質(zhì)是否引起誤差，再探討誤差的來源是方法特異性差還是干擾是衡量方法準(zhǔn)確度的方法學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)之一，在加入一定濃度干擾物的條件下,形成恒定誤差,干擾物濃度不同,誤差大小不同.干擾試驗(yàn)是測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法特異性誤差和干擾引起的誤差2目的要求掌握：干擾試驗(yàn)的原理和用途熟悉：1.干擾試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與具體操作2.干擾值和干擾率的計(jì)算了解：注意事項(xiàng)和消除干擾的常用方法目的要求掌握：干擾試驗(yàn)的原理和用途3檢測(cè)原理干擾試驗(yàn)對(duì)干擾物不作分析，只測(cè)定它對(duì)方法的

干擾作用，以評(píng)價(jià)分析方法的準(zhǔn)確性。干擾物產(chǎn)生的誤差屬恒定系統(tǒng)誤差，它的大小隨

干擾物的濃度而異。常見干擾物有：血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素、肌酐、防腐劑、抗凝劑、藥物如

VC等。檢測(cè)原理干擾試驗(yàn)對(duì)干擾物不作分析，只測(cè)定它對(duì)方法的4

本實(shí)驗(yàn)選用VC做酶法測(cè)定（CHOD-PAP法）的干擾試驗(yàn)，因VC可與CHOD催化生成的H2O2發(fā)生反應(yīng)，使第二步POD的偶聯(lián)反應(yīng)顯色強(qiáng)度減弱，產(chǎn)生負(fù)的測(cè)定誤差。檢測(cè)原理本實(shí)驗(yàn)選用VC做酶法測(cè)定（CHOD-PA5

膽固醇酯+H2OCEH膽固醇+脂肪酸膽固醇+O2COD△4膽甾烯酮+H2O22H2O2

+4-AAP+酚POD

醌亞胺+4H2O特異性膽紅素、維生素C、尿酸、Hb負(fù)干擾特異性膽紅素、維生素C、尿酸、Hb負(fù)干擾6實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備標(biāo)本

：肝素抗凝血漿校準(zhǔn)品：膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液5.17mmol/L干擾物：

VC溶液1.濃度50.0mg/dl

2.濃度100.0mg/dl

3.濃度200.0mg/dl儀器：半自動(dòng)生化分析儀(型號(hào))實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備標(biāo)本：肝素抗凝血漿校準(zhǔn)品：膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液5.17【器材】半自動(dòng)生化分析儀、試管、吸管、加樣器【器材】8【試劑】1.試劑組成R1：酚12mmol／L

膽酸鈉 1.20mmol／L

抗壞血酸氧化酶 ≥1.0KU／LPOD ≥12.0KU／LR2：

CEH≥1.0KU／LCOD≥0.5KU／L4-AAP1.20mmol／L【試劑】9樣品制備基礎(chǔ)樣品：血漿450ul+H2O50ul干擾樣品1：血漿450ul+濃度1VC50ul干擾樣品2：血漿450ul+濃度2VC50ul干擾樣品3：血漿450ul+濃度3VC50ul樣品制備基礎(chǔ)樣品：血漿450ul+H2O50ul10實(shí)驗(yàn)操作取6支試管分別標(biāo)明空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、基礎(chǔ)樣品、干擾樣品1、干擾樣品2、干擾樣品3

分別吸取相應(yīng)的樣本各10ul向各管加工作液1.0ml，混勻置37℃恒溫10min505nm波長(zhǎng)測(cè)定各管的吸光度實(shí)驗(yàn)操作取6支試管分別標(biāo)明空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、基礎(chǔ)樣品、干擾樣11計(jì)算干擾率（％）＝(干擾值÷基礎(chǔ)值)×100％干擾值＝干擾管測(cè)定值干擾物加后濃度＝V干V總×干擾物加前濃度基礎(chǔ)管測(cè)定值計(jì)算干擾率（％）＝(干擾值÷基礎(chǔ)值)×100％干擾值＝干擾管12干擾試驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理干擾試驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理13結(jié)果判斷

當(dāng)干擾物引起的偏差＜1/4總允許誤差（TEA）時(shí)，則不會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的臨床應(yīng)用價(jià)值，可近似地認(rèn)為當(dāng)干擾物濃度低于該濃度時(shí)不影響測(cè)定結(jié)果。

注明:TC的TEA：10％（參照美國CLI88標(biāo)準(zhǔn)）結(jié)果判斷當(dāng)干擾物引起的偏差＜1/4總允14注意事項(xiàng)★加入量要準(zhǔn)確?！锛尤胛矬w積應(yīng)只占很小的比例（小于1/10）。★可疑干擾物濃度，加入的干擾物的濃度明顯干擾常見濃度上限，尤其是達(dá)到病理標(biāo)本最高值?！锓治鑫锶芤嚎墒褂脴?biāo)準(zhǔn)液，最好采用病人標(biāo)本?！镌黾訙y(cè)定次數(shù)，減少隨機(jī)誤差。注意事項(xiàng)★加入量要準(zhǔn)確。15消除干擾的常用方法設(shè)立試劑空白和標(biāo)本空白用物理或化學(xué)方法，除去干擾物雙波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)檢測(cè)排除干擾誤差較大又無法消除，則需對(duì)方法進(jìn)行改進(jìn)或