微生物生長(zhǎng)與培養(yǎng)技術(shù)-常用微生物培養(yǎng)方法

平板劃線(xiàn)法

在無(wú)菌環(huán)境下，用接種環(huán)蘸取少許樣品，以平行劃線(xiàn)、扇形劃線(xiàn)或其他形式在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)，微生物細(xì)胞數(shù)量隨著劃線(xiàn)次數(shù)逐漸減少，形成單菌落。稀釋到平板法通過(guò)液體稀釋的方法分散樣品中的微生物細(xì)胞，常用十倍梯度稀釋法。隨著稀釋次數(shù)的增加，單位體積中菌體數(shù)量減少，細(xì)胞得以分散。選取適宜的稀釋進(jìn)行倒（涂）平板，經(jīng)過(guò)適宜的培養(yǎng)可以獲得單菌落。單孢子或單細(xì)胞分離法

采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得單菌落。利用選擇培養(yǎng)基分離法

微生物對(duì)不同的化學(xué)試劑、抗生素等具有不同的抵抗力，利用這些特性配制合適某種微生物生長(zhǎng)而限制其他微生物生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基，從而獲得特定微生物的純培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)基物理狀態(tài)不同，微生物培養(yǎng)技術(shù)分為固體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法。固體培養(yǎng)法多在試管斜面、平板、克氏扁瓶、茄子瓶中進(jìn)行。液體培養(yǎng)基多在試管、三角瓶中進(jìn)行，將接種后的培養(yǎng)器皿在適宜條件下進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)目的微生物的增殖。

謝謝觀看所謂接種（inoculation）就是將一定量的純種微生物在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移至另一已滅菌且適宜于該菌生長(zhǎng)繁殖所需的培養(yǎng)基上的過(guò)程。微生物接種技術(shù)是進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)。

接種工具：接種工具即微生物分離、移接時(shí)所用的工具。首先我們一起認(rèn)識(shí)幾種常用的接種工具吧。接種概念接種工具1.接種針；2.接種環(huán)；3.接種圈；4.接種刀；5.接種耙；6.玻璃涂棒1．接種針用于挑取細(xì)小菌落和從菌褶中挑取孢子。

2．接種環(huán)接種針先端用尖嘴鉗彎制成一個(gè)圓圈。用于銀耳芽孢分離轉(zhuǎn)管或蘸取孢子懸液在斜面、平板上拖制、分離用。

3．接種圈接種針先端用尖嘴鉗纏繞成圓形扁平狀。用于蘸取孢子，抖落于斜面或平板上。

4．接種刀用于縱切斜面菌種和挑取菌絲體轉(zhuǎn)管，也可用于組織分離時(shí)切割、移接組織塊。

5．接種耙接種耙材料制法與接種刀相似，僅前端彎制成90°角呈耙形，先端需挫鋒利。用于橫切斜面菌種或直接切斷母種斜面移接入二級(jí)菌種料瓶?jī)?nèi)。

6．玻璃涂棒用于菌種分離，把稀釋菌液在平板上涂布均勻獲得單菌落。接種方法：微生物接種是微生物學(xué)研究中最常用的基本操作，主要用于微生物的分離純化。不同的培養(yǎng)基，接種方法也不同，主要有以下幾種方法：

1．試管斜面接種方法：即將單一菌落或一支已長(zhǎng)好的斜面菌種轉(zhuǎn)移至另一支斜面培養(yǎng)基上的接種方法。該方法主要用于純菌的增殖、鑒定和保存。2固體平板接種方法：平板接種法可分為平板劃線(xiàn)法、傾注平板法和涂布平板法。

平板劃線(xiàn)法示意圖傾注法示意圖涂布法示意圖謝謝一、涂布平板法即將菌體樣品均勻地涂布于固體培養(yǎng)基表面。該方法適合菌體的分離、純化、計(jì)數(shù)。1．融化牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，制備培養(yǎng)基平板。并標(biāo)記3個(gè)10-5，3個(gè)10-6，3個(gè)10-7。2.選取10-5，10-6，10-7三個(gè)稀釋度。用無(wú)菌吸管吸取0.1ml10-5稀釋液滴加到編號(hào)10-5的3個(gè)培養(yǎng)基表面。3.將玻璃涂布棒在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒，待冷卻后，用涂布棒將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面。10-6，10-7兩個(gè)稀釋液按上述方法進(jìn)行涂布。4.玻璃涂布棒使用后，進(jìn)行灼燒滅菌，以免造成污染。5.待培養(yǎng)基表面菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平皿倒置于37℃下培養(yǎng)1-2d，定期觀察，記錄結(jié)果并進(jìn)行計(jì)算。二、傾注法即將菌體樣品在溶化的固體培養(yǎng)基中充分混勻，倒入培養(yǎng)皿中冷卻凝固。經(jīng)培養(yǎng)后，菌體細(xì)胞在培養(yǎng)基內(nèi)部和表面形成肉眼可見(jiàn)的菌落。該方法適合兼性厭氧菌的培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。1．選取10-5,10-6，10-7三個(gè)稀釋度。用無(wú)菌吸管吸取0.5mL10-5稀釋液放入編號(hào)10-5的3個(gè)平皿中，同法分別吸取10-6,10-7的稀釋液，放入編號(hào)10-6,10-7的3個(gè)平皿。2．然后在9個(gè)平皿中分別倒入15mL已融化并冷卻至45℃的培養(yǎng)基，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平板，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷凝后倒置。3.將培養(yǎng)皿倒置于37℃下培養(yǎng)1-2d，定期觀察，記錄結(jié)果并進(jìn)行計(jì)算。涂布和傾注接種示意圖三、平板劃線(xiàn)法即把雜菌樣品通過(guò)在平板表面劃線(xiàn)稀釋獲得單菌落的方法。1．接種前使用酒精棉球擦拭雙手，要在待接平皿上做好標(biāo)簽，注明菌株名稱(chēng)和接種日期。2.點(diǎn)燃酒精燈，燈焰周?chē)s1-2cm處的空間為無(wú)菌區(qū)，所以在酒精燈燈焰旁進(jìn)行無(wú)菌操作法接種，可以避免污染。3.右手持接種環(huán)，將接種環(huán)的金屬絲直立于酒精燈外焰外，灼燒至紅透，然后略?xún)A斜接種環(huán)，灼燒金屬桿。注意灼燒時(shí)要將金屬絲與金屬桿的連接部分充分灼燒。4.左手持斜面的底部，將管口置于火焰的無(wú)菌區(qū)，右手小指打開(kāi)試管塞，將接種環(huán)深入斜面，待稍涼，刮去少量菌體。5.左手取平皿一個(gè)，用拇指和食指控制皿蓋，其余幾指控制皿底，打開(kāi)皿蓋，使開(kāi)口角度小于30°，將接種環(huán)上的菌種按圖示進(jìn)行劃線(xiàn)。A區(qū)法要求連續(xù)劃線(xiàn)，且線(xiàn)的邊緣應(yīng)劃至培養(yǎng)皿的內(nèi)緣，線(xiàn)要緊密但不相連。C區(qū)或D區(qū)要求每劃完一區(qū)，都應(yīng)灼燒接種環(huán)，后一區(qū)要求與前一區(qū)首尾相連，但不得與其他區(qū)域搭在一起。6.劃線(xiàn)結(jié)束，接種環(huán)要灼燒滅菌，才能放回原處，以免污染。7.將接種完畢的平板置于37℃下培養(yǎng)1-2d，定期觀察，記錄結(jié)果。劃線(xiàn)接種示意圖謝謝病毒的繁殖：病毒體在細(xì)胞外是處于靜止?fàn)顟B(tài)，基本上與無(wú)生命的物質(zhì)相似，當(dāng)病毒進(jìn)入活細(xì)胞后便發(fā)揮其生物活性。由于病毒缺少完整的酶系統(tǒng)，不具有合成自身成份的原料和能量，也沒(méi)有核糖體，因此決定了它的專(zhuān)性寄生性，必須侵入易感的宿主細(xì)胞，依靠宿主細(xì)胞的酶系統(tǒng)、原料和能量復(fù)制病毒的核酸，借助宿主細(xì)胞的核糖體翻譯病毒的蛋白質(zhì)。病毒這種增殖的方式叫做“復(fù)制”。病毒復(fù)制的過(guò)程分為吸附、侵入脫殼、生物合成及裝配釋放四個(gè)步驟，又稱(chēng)復(fù)制周期。病毒繁殖過(guò)程動(dòng)物接種：這是最原始的病毒培養(yǎng)方法。常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔，有時(shí)也用猴、猿、猩猩等。對(duì)于動(dòng)物的選擇，應(yīng)滿(mǎn)足一下標(biāo)準(zhǔn)：①大動(dòng)物應(yīng)來(lái)源于非疫區(qū)，最好是未接種過(guò)相應(yīng)病毒疫苗的健康動(dòng)物；②對(duì)相應(yīng)病毒易感，并十分敏感；③家兔、小鼠、大鼠等應(yīng)符合普通級(jí)或清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)；雞應(yīng)屬非免疫雞或SPF級(jí)標(biāo)準(zhǔn)；犬和貓應(yīng)品種明確，并符合普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)；④動(dòng)物的體重、年齡要基本一致，個(gè)體差別不宜過(guò)大。病毒。按病毒侵襲部位不同選擇適當(dāng)?shù)慕臃N途徑，有鼻內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈等，如嗜神經(jīng)病毒接種在小鼠的腦內(nèi)。接種后通常以動(dòng)物發(fā)病、死亡作為感染指標(biāo)。此接種方法不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，且結(jié)束簡(jiǎn)單，易成功，然而其存在個(gè)體差異大、價(jià)格昂貴、需要隔離畜舍等缺點(diǎn)。禽胚培養(yǎng)法：雞胚接種該方法是用來(lái)培養(yǎng)某些對(duì)雞胚敏感的動(dòng)物病毒的一種培養(yǎng)方法，可用以進(jìn)行多種病毒的分離、培養(yǎng)，毒力的滴定，中和試驗(yàn)以及抗原和疫苗的制備等。根據(jù)病毒種類(lèi)不同，可將病毒樣本接種于雞胚的羊膜腔、絨毛尿囊膜、尿囊腔、卵黃囊中。①羊膜腔接種，應(yīng)用于從臨床材料中分離流感病毒等，病毒感染后可收集羊水和尿囊液。②絨毛尿囊膜接種，常用于牛痘病毒、天花病毒、單純皰疹病毒的分離，這些病毒能夠在絨毛尿囊膜上可形成肉眼可見(jiàn)的斑點(diǎn)或痘皰狀病灶。另外，病毒可在絨毛尿囊膜上進(jìn)行滴定，通過(guò)產(chǎn)生的班和痘來(lái)計(jì)算病毒顆粒的數(shù)目。③尿囊腔接種，應(yīng)用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的適應(yīng)和傳代培養(yǎng)。這些病毒被接種到尿腔囊后，可在內(nèi)皮細(xì)胞中復(fù)制，復(fù)制的病毒被釋放到尿囊液中。因此，在尿囊液中含有大量的病毒。④卵黃囊接種，主要用于蟲(chóng)媒病毒、衣原體及立克次體等的分離和繁殖。這些大的病原體主要在卵黃囊的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，且生長(zhǎng)速度很快，立克次體染色后也可看到。禽胚接種部位細(xì)胞培養(yǎng)法：細(xì)胞培養(yǎng)是指利用機(jī)械、酶或化學(xué)方法使動(dòng)物組織或傳代細(xì)胞分散成單個(gè)乃至2~4個(gè)細(xì)胞團(tuán)懸液進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞的來(lái)源，染色體特性及傳代次數(shù)可以將細(xì)胞分為原代細(xì)胞、細(xì)胞株、傳代細(xì)胞。原代細(xì)胞是指新鮮組織經(jīng)剪碎和胰酶消化制備的細(xì)胞，此類(lèi)細(xì)胞最適合分離病毒，然而易含有潛伏病毒；細(xì)胞株，又稱(chēng)二倍體細(xì)胞，指自繼代培養(yǎng)的細(xì)胞中選育出具有特殊生物性質(zhì)和標(biāo)記的細(xì)胞。這類(lèi)細(xì)胞能保持原來(lái)的二倍染色體數(shù)目。此類(lèi)細(xì)胞碎片少，細(xì)胞均勻，潛伏病毒易發(fā)現(xiàn)，對(duì)病毒的敏感性與原代細(xì)胞相似；傳代細(xì)胞，能在體外無(wú)限傳代，應(yīng)用方便，其染色體數(shù)目及增殖特性均類(lèi)似于惡性腫瘤細(xì)胞，多源于癌細(xì)胞。此類(lèi)細(xì)胞容易培養(yǎng)，且生長(zhǎng)迅速、易得，然而其對(duì)分離病毒不敏感，且對(duì)設(shè)備要求高。謝謝試管斜面接種的概念：斜面接種是從已長(zhǎng)好微生物的菌種管移接到另一斜面的方法，是微生物學(xué)中最常用、最基本的技術(shù)之一。該方法主要用于純菌的增殖、鑒定和保存。試管斜面接種的操作步驟及要求：1．接種前使用酒精棉球擦拭雙手，要在待接種試管上做好標(biāo)簽，注明菌株名稱(chēng)和接種日期。2.點(diǎn)燃酒精燈，燈焰周?chē)s1-2cm處的空間為無(wú)菌區(qū)，所以在酒精燈燈焰旁進(jìn)行無(wú)菌操作法接種，可以避免污染。3．右手拿接種環(huán)，先垂直、后水平方向把接種環(huán)放在火焰上灼燒（a）。凡是需進(jìn)入試管的桿部分均通過(guò)火焰灼燒，下端環(huán)心必須燒紅，徹底滅菌。灼燒時(shí)，應(yīng)把環(huán)放在酒精燈的外焰上，因?yàn)橥庋鏈囟雀?，易于燒紅。4．將菌種斜面和新培養(yǎng)基斜面同時(shí)握于左手中，管內(nèi)斜面向上，用右手的小指、無(wú)名指和手掌在火焰旁拔去兩支試管的棉塞（b），并使管口在火焰上通過(guò)（c），以燒死試管口的雜菌，隨后把管口移至火焰近旁約1-2cm。試管斜面接種的操作步驟及要求：5．將燒過(guò)的接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，先使接觸斜面上端的培養(yǎng)基或管壁，使接種環(huán)充分冷卻，待培養(yǎng)基不再被接種環(huán)融化時(shí)，可將接種環(huán)伸向斜面中部蘸取少量菌體，然后小心從試管中抽出（d）。注意不能讓環(huán)心接觸管壁和管口。取出后接種環(huán)不能通過(guò)火焰。接種環(huán)不能通過(guò)火焰，在火焰旁迅速伸入新培養(yǎng)基斜面，在斜面下1/5處，由下至上輕輕劃線(xiàn)（e）。注意不要講培養(yǎng)基劃破，也不要將菌體沾在管壁上。6.接種完畢，試管口必須迅速通過(guò)火焰滅菌，在火焰旁塞入棉塞（f,g）。注意不要使試管離開(kāi)火焰去迎棉塞，以免進(jìn)入帶菌空氣。操作中如果不慎使棉塞著火，要迅速塞入試管內(nèi)，由于缺氧火自然就會(huì)熄滅；若棉塞外端任然著火，也不要用嘴吹，迅速用手捏幾下，即可熄滅。7.劃線(xiàn)結(jié)束，接種環(huán)要灼燒滅菌（h），才能放回原處，以免污染。放回接種環(huán)后，將斜面置于37℃下培養(yǎng)1-2d，定期觀察，記錄結(jié)果。試管斜面接種法謝謝工業(yè)規(guī)?；囵B(yǎng)方法工業(yè)中固體培養(yǎng)法分為淺盤(pán)法、轉(zhuǎn)桶法和厚層培養(yǎng)法。固體發(fā)酵具有操作簡(jiǎn)便、能耗低、發(fā)酵過(guò)程易控制，對(duì)無(wú)菌要求相對(duì)較低，不易發(fā)生大面積的污染等優(yōu)點(diǎn)，然而僅適用于真菌發(fā)酵。工業(yè)中液體培養(yǎng)常使用液體靜置培養(yǎng)法、深層通氣培養(yǎng)法。液體靜置培養(yǎng)法多見(jiàn)于工業(yè)生產(chǎn)中厭氧微生物的培養(yǎng)。深層通氣培養(yǎng)法是基于發(fā)酵罐進(jìn)行的培養(yǎng)方法。常用的發(fā)酵罐：通用型攪拌發(fā)酵罐、氣升式型發(fā)酵罐。圖5-5微生物工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程工業(yè)生產(chǎn)中，微生物的培養(yǎng)過(guò)程大致可以分為四個(gè)階段，即：菌種階段、種子擴(kuò)大培養(yǎng)階段、發(fā)酵階段和提煉階段

謝謝觀看原理

在土壤環(huán)境中存在著大量的微生物，且絕大多數(shù)都是混雜生活在一起。為了獲得某種微生物的純培養(yǎng)，一般是根據(jù)其特定的生長(zhǎng)條件（如營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、氧等），供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑造成只利于此菌生長(zhǎng)，而抑制其他微生物的生長(zhǎng)，再通過(guò)稀釋涂布法或稀釋倒平板法分離純化微生物。不同種類(lèi)的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)需求各不相同，培養(yǎng)基是人工將多種物質(zhì)按照特定微生物生長(zhǎng)需要配制而成的一種混合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)細(xì)菌常用的培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基適合培養(yǎng)放線(xiàn)菌；PDA培養(yǎng)基適宜真菌的生長(zhǎng)。土壤中不同種類(lèi)微生物的存在概率不一樣，因此為了得到特定微生物，除了應(yīng)使用相應(yīng)的培養(yǎng)基外，還要選擇合適的稀釋度。如果出現(xiàn)概率較高，則稀釋度要高，反之則低。當(dāng)測(cè)定土壤細(xì)菌數(shù)量時(shí)，多采用10-4，10-5,10-6稀釋度；當(dāng)測(cè)定土壤放線(xiàn)菌和霉菌數(shù)量時(shí)，多采用10-3，10-4,10-5稀釋度。菌落形態(tài)是進(jìn)行微生物分離純化的依據(jù)之一。方法與步驟（一）培養(yǎng)基準(zhǔn)備培養(yǎng)基類(lèi)別培養(yǎng)基原料培養(yǎng)基滅菌適宜微生物種類(lèi)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（200ml）牛肉膏，蛋白胨，NaCl，瓊脂，水，自然PH將牛肉膏、蛋白胨溶入燒杯中，攪拌至溶解，加水至200mL，后加入瓊脂，121℃高壓滅20min。細(xì)菌高氏一號(hào)培養(yǎng)基（200mL）可溶性淀粉，KNO3，K2HPO4，MgSO4·7H2O，NaCl，F(xiàn)eSO4·7H2O，瓊脂，水，pH7.4-7.6首先將FeSO4·7H2O配制為母液。將淀粉加入燒杯攪拌溶解，再依次將KNO3，K2HPO4，MgSO4·7H2O，NaCl，F(xiàn)eSO4溶液。加水至200mL后調(diào)節(jié)pH至7.4-7.6，加入瓊脂，121℃高壓滅20min放線(xiàn)菌PDA培養(yǎng)基（含蔗糖，200mL）馬鈴薯，蔗糖，瓊脂，水，自然PH將稱(chēng)好的馬鈴薯煮30min,用紗布進(jìn)行過(guò)濾，保留濾液。將蔗糖溶于濾液中，加水補(bǔ)至200mL，加入瓊脂，121℃高壓滅20min霉菌PDA培養(yǎng)基（含葡萄糖，200mL）馬鈴薯，葡萄糖，瓊脂，水，自然PH將稱(chēng)好的馬鈴薯煮30min,用紗布進(jìn)行過(guò)濾，保留濾液。將葡萄糖溶于濾液中，加水補(bǔ)至200mL，加入瓊脂，115℃高壓滅20min酵母（二）微生物的分離1．接種前使用酒精棉球擦拭雙手，點(diǎn)燃酒精燈，燈焰周?chē)s1-2cm處的空間為無(wú)菌區(qū)，所以在酒精燈燈焰旁進(jìn)行無(wú)菌操作法接種，可以避免污染。2.倒平板。右手持盛有溶化培養(yǎng)基的三角瓶，置火焰旁邊；左手拿平皿，用手掌邊緣和小指、無(wú)名指拔出瓶塞，然后左手將培養(yǎng)皿蓋在火焰附近打開(kāi)一條縫隙，迅速倒入培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基均勻分布，平置于桌面上，待凝固后備用。3.制備土壤稀釋液。稱(chēng)取土樣5g，放入程又45mL無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，振搖20min，使土樣與無(wú)菌水充分混合，制成土壤懸液。進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)椒▍⒄占寄軐?shí)訓(xùn)6-2，制成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6各種稀釋度4.選取適宜的稀釋度。用無(wú)菌吸管吸取0.1mL稀釋液滴加到不同的培養(yǎng)基表面。將玻璃涂布棒在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒，待冷卻后，用涂布棒將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面。5.玻璃涂布棒使用后，進(jìn)行灼燒滅菌，以免造成污染。6.待培養(yǎng)基表面菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平皿倒置于37℃下培養(yǎng)1-2d，定期觀察。（三）微生物的觀察

1.觀察微生物的菌落特征。2.通過(guò)顯微鏡觀察微生物的形態(tài)。注意事項(xiàng)1．選擇正確的培養(yǎng)基是培養(yǎng)特定微生物的前提。2．整個(gè)操作過(guò)程需要進(jìn)行無(wú)菌操作謝謝平板計(jì)數(shù)原理平板菌落計(jì)數(shù)法，又稱(chēng)活菌計(jì)數(shù)法，是將待測(cè)菌液經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。該方法被廣泛應(yīng)用于生物制品檢驗(yàn)（如活菌制劑），以及食品、飲料和水等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測(cè)平板計(jì)數(shù)的操作步驟梯度稀釋1．接種前使用酒精棉球擦拭雙手，要在試管上做好標(biāo)簽，標(biāo)記10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6等。2.點(diǎn)燃酒精燈，燈焰周?chē)s1-2cm處的空間為無(wú)菌區(qū)，所以在酒精燈燈焰旁進(jìn)行無(wú)菌操作法接種，可以避免污染。3．用移液管吸取4.5mL無(wú)菌水于各個(gè)試管中。用1mL無(wú)菌吸管吸取0.5mL混勻的大腸桿菌菌懸液，精確的放入10-1的試管中，此為10倍稀釋。將10-1試管置于渦旋振蕩器上振蕩，充分混勻菌液。用吸管從10-1試管中吸取0.5mL稀釋液，精確的放入10-2的試管中，充分混勻菌液，此為100倍稀釋。其余以此類(lèi)推。

待測(cè)菌液是適度的選擇應(yīng)根據(jù)樣品的濃度確定。當(dāng)樣品中所含待測(cè)菌的數(shù)量較多時(shí)，稀釋度應(yīng)高，反之則低。通常測(cè)定細(xì)菌菌劑時(shí)，多采用10-7，10-8,10-9稀釋度；當(dāng)測(cè)定土壤細(xì)菌數(shù)量時(shí)，多采用10-4，10-5,10-6稀釋度；當(dāng)測(cè)定土壤放線(xiàn)菌和霉菌數(shù)量時(shí)，多采用10-3，10-4,10-5稀釋度。注意事項(xiàng)1．選擇適當(dāng)?shù)木合♂尪葘?duì)結(jié)果的精確性有重要影響，一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度培養(yǎng)后所出現(xiàn)的而平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。2．混菌法倒培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)當(dāng)注意培養(yǎng)基不能過(guò)燙，否則會(huì)殺死微生物；培養(yǎng)基也不能過(guò)冷，否則不利于菌與培養(yǎng)基混勻，影響計(jì)數(shù)。3．全程需要進(jìn)行無(wú)菌操作謝謝禽胚繁殖病毒原理雞胚接種培養(yǎng)是病毒學(xué)的重要方法之一。來(lái)自禽類(lèi)的病毒，均可在雞胚中繁殖，哺乳動(dòng)物的病毒如藍(lán)舌病病毒、流感病毒等也可在雞胚中增殖。目前雞胚尤其是SPF級(jí)雞胚被廣泛利用于分離病毒、制造疫苗和抗原等，其來(lái)源豐富，操作簡(jiǎn)便。除病毒外，衣原體、立克次氏體也可用雞胚來(lái)培養(yǎng)。禽胚結(jié)構(gòu)雞胚是由三個(gè)胚層發(fā)育而來(lái)的，即外胚層、中胚層和內(nèi)胚層，它們構(gòu)成胚胎的組織與器官。禽胚接種部位可分為尿囊腔接種、羊膜腔接種、卵黃囊接種和絨毛尿囊膜接種。不同雞胚接種途徑的應(yīng)用接種途徑病毒的適用范圍尿囊腔接種流感病毒、新城雞瘟病毒、腮腺炎病毒羊膜腔接種臨床材料（如患者的鼻洗液及咽漱液）分離病毒卵黃囊接種抗流感病毒藥物絨毛尿囊膜流感病毒滴定、中和試驗(yàn)、藥物實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)方法與步驟（一）雞胚的孵化1.雞胚