EHS-M-W-0020生活飲用水中大腸菌群檢測(cè)細(xì)則(多管發(fā)酵法)

適用范圍及標(biāo)準(zhǔn)適用于生活飲用水、水源水、游泳池水中大腸菌群的測(cè)定。技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5749-2023《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB/T 5750.12-2023DB 31/890-2023《公共游泳場(chǎng)所衛(wèi)生治理標(biāo)準(zhǔn)》檢測(cè)原理總大腸菌群指一群在37℃、24h培育能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。44.5℃仍能生長(zhǎng)且發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。大腸埃希氏菌是指一群能生長(zhǎng)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣且在含有熒光底物的培育基上44.5℃培育24h產(chǎn)生β-外光下產(chǎn)生特征性熒光的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。儀器和設(shè)備高壓蒸汽滅菌器3.2 冰箱：2℃—8℃3.3 恒溫培育箱：36℃±1℃天平PH試紙3.6 恒溫水槽：44.5℃生物安全柜紫外光燈：6W、波長(zhǎng)366nm平皿：直徑為9cm試管刻度吸管小倒管金屬接種環(huán)培育基和試劑20min〔注：雙料乳糖蛋白胨〕15ml。4℃冰箱保存，待用。革蘭氏染色液〔染色方法見(jiàn)試劑使用說(shuō)明書(shū)〕 PH6.9±0.2，分裝到帶有10ml)，12120min，備用。10%〔m/m〕硫代硫酸鈉溶液：12120min。乳糖膽鹽發(fā)酵培育管：稱取乳糖膽鹽，加熱溶解，調(diào)PH7.4，分裝到帶有倒管15min〔注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管即蒸餾〕EC-MUG管：稱取本培育基干粉，加熱溶解，在366nm紫外光下檢查無(wú)自發(fā)熒光后分裝于試管中，11520minPH6.9±0.2。操作步驟總大腸菌群1ml水樣參加9ml101出廠自來(lái)水，需常常檢驗(yàn)或每天檢驗(yàn)一次的，可直接接種五管雙料培育基，每管接種10ml水樣。515管。接種1ml101ml接種。36℃±124h。變黃且有氣體產(chǎn)生則為試驗(yàn)陽(yáng)性，需做進(jìn)一步的證明試驗(yàn)。36℃±118～24h，觀看菌落形態(tài)，典型的大腸菌群菌落為黑紫色或紅紫色，具有金屬光澤。作業(yè)指導(dǎo)書(shū)·檢測(cè)細(xì)則生活飲用水/游泳池水中大腸菌群檢測(cè)細(xì)則

編號(hào)：EHS-M-W-0020次修訂37頁(yè)36℃±124h。腸菌群陽(yáng)性。登記試驗(yàn)的陽(yáng)性管數(shù)，查表得出100ml水樣中總大腸菌群的MPN值。15全部乳糖發(fā)酵管陰性，則報(bào)告總大腸菌群未檢出。耐熱大腸菌群〔產(chǎn)酸產(chǎn)氣1~2接種環(huán)菌液〔水浴箱的水面〕44.524±2h。酵試驗(yàn)時(shí)按《水中總大腸菌群檢測(cè)細(xì)則〔多管發(fā)酵法》5.2.15.2..2接種乳糖蛋白44.5℃±0.5℃18~24h5.2.1。則為試驗(yàn)陽(yáng)性，需做進(jìn)一步的證明試驗(yàn)。平板分別：自試驗(yàn)陽(yáng)性管中取一接種環(huán)培育液，接種到伊紅美蘭瓊脂平板上，置44.518～24h，觀看菌落形態(tài)。44.524h。44.5℃仍能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢100ml水樣中耐熱大腸菌群的〔MPN〕數(shù)值。大腸埃希氏菌接種：從測(cè)總大腸菌群多管發(fā)酵初發(fā)酵試驗(yàn)中產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的試管中無(wú)菌取1~2EC-MUG管中，或者是按總大腸菌群多管發(fā)酵初發(fā)酵試驗(yàn)方法將1~2EC-MUG管中。輕搖〔水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培育基的液面〕44.524±2h。培育：將已接種的EC-MUG管輕搖試管，使液體充分混勻，接種后30min內(nèi)置恒溫水浴箱中〔水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培育基的液面〕44.5℃培育 24±2h。EC-MUG366nm6W的紫外燈照耀，如有藍(lán)色熒光產(chǎn)生則表示水樣中含有大腸埃希氏菌。結(jié)果報(bào)告：計(jì)算EC-MUG陽(yáng)性管數(shù)，查對(duì)應(yīng)的最可能數(shù)〔MPN〕表得出大腸埃希氏菌的最可能數(shù)，結(jié)果以MPN/100mL報(bào)告。留意事項(xiàng)本試驗(yàn)要在二級(jí)生物安全試驗(yàn)室中進(jìn)展。試驗(yàn)室成員應(yīng)知曉潛在危害，生疏試驗(yàn)室安全操作規(guī)程和技術(shù)。試驗(yàn)室人員要防止針/銳器損傷，使用銳器容器勿斷裂、彎折或者重套上或重復(fù)使用注射器、針頭；制止用手接觸裂開(kāi)的玻璃器皿，盡量使用塑料器皿。工作完畢后消毒工作臺(tái)面。相關(guān)記錄M-W-00201-2023《生活飲用水中大腸菌群原始記錄〕附表1 總大腸菌群〔MPN〕檢索表〔15管法〕〕接種量/mL 總大腸菌群/接種量/mL 總大腸菌群/1010.1 〔MPN/100mL〕1010.1〔MPN/100mL000<21002001210140024102600351038004710410005910512010211040114111601261128013711310014911412015111151402041206021612180227122100239123120241112415025131251703061308031713110032913212作業(yè)指導(dǎo)書(shū)·檢測(cè)細(xì)則生活飲用水/游泳池水中大腸菌群檢測(cè)細(xì)則

編號(hào)：EHS-M-W-0020次修訂57頁(yè)〕〕033111331503413134170351513519040814011041914113042111421504313143170441514419045171452205091501305111151150521315217053151531905417154220551915524附表1 總大腸菌群〔MPN〕檢索表〔15管法〕續(xù)接種量/mL 總大腸菌群/接種量/mL 總大腸菌群/1010.1 〔MPN/100mL〕1010.1〔MPN/100mL20053008201730111202930213203123031620414304202051630523210731011211931114212123121721314313202141731423215193152722093201422112321172221432220223173232422419324272252232531230123301723114331212321733224233203332823422334322352533536240153402124117341242422034228243233433224425344362452834540250173502525120351292522335232253263533725429354412553235545附表1 總大腸菌群〔MPN〕檢索表〔15管法〕續(xù)接種量/mL 總大腸菌群/接種量/mL 總大腸菌群/1010.1 〔MPN/100mL〕1010.1〔MPN/100mL40013500234011750131402215024340325503584043050476405365059541017510334112151146412265126341331513844143651411041542515130420225204942126521704223252294423385231204244452415042550525180430275307943133531110432395321404334553318043452534210〕〕作業(yè)指導(dǎo)書(shū)·檢測(cè)細(xì)則生活飲用水/游泳池水中大腸菌群檢測(cè)細(xì)則

編號(hào)：EHS-M-W-0020次修訂77頁(yè)435595352504403454013044140541170442475422204435454328044462544350445695454304504155024045148551350452565525404536455392045472554160045581555>1600附表2 總大腸菌群〔MPN〕檢索表〔5管法〕510ml管中