微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室革蘭染色標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室革蘭染色標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1．目的規(guī)范革蘭染色標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2．原理細(xì)菌樣本先經(jīng)紫色草酸鹽結(jié)晶復(fù)合物染色，之后用Lugol-PVP媒染劑處理以促進(jìn)燃料與革蘭染色陽性菌結(jié)合。經(jīng)酒精-丙酮的脫色作用，革蘭染色陰性菌中的結(jié)晶紫會被洗脫。番紅精則是作為復(fù)染劑：革蘭染色陰性的細(xì)菌呈現(xiàn)粉紅色，而革蘭染色陽性的細(xì)菌呈現(xiàn)紫色。。3．試劑3.1結(jié)晶紫草酸鹽溶液結(jié)晶紫2%；酒精20%；草酸銨0.8%。3.2穩(wěn)定Lugol-PVP復(fù)合物碘1.3%；碘化鉀2%；PVP（聚乙烯吡咯烷酮）10%。3.3脫色劑95%酒精50%；丙酮50%。3.4番紅精溶液番紅精0.25%；95%酒精10%。4．質(zhì)控4.1采用大腸埃希菌ATCC25922質(zhì)控菌株，每周1次，有室內(nèi)質(zhì)控記錄。4.2采用金黃色葡萄球菌ATCC25923質(zhì)控菌株，每周1次，有室內(nèi)質(zhì)控記錄。。5.操作步驟5.1初染第一液初染劑（結(jié)晶紫）染色1分鐘，水洗。5.2媒染第二液媒染液（碘液）染色1分鐘，水洗。5.3脫色第三液脫色劑（95%酒精）用到無紫色脫落為止，水洗。5.4復(fù)染第四液復(fù)染劑（石碳酸復(fù)紅或沙黃）染色30秒，水洗。自然干燥后鏡檢。6.結(jié)果判斷革蘭陽性菌呈紫色，革蘭陰性菌呈紅色。7.注意事項(xiàng)7.1染色的結(jié)果常受操作者技術(shù)的影響，尤其是容易過度脫色，往往陽性染成陰性。7.2在同一載玻片上，需用已知金黃色葡萄球菌及大腸埃希菌作革蘭陽性及陰性對照。7.3染色關(guān)鍵在于涂片和脫色，涂片不宜過厚，固定不宜過熱，脫色不宜過度。7.4菌齡為18～24小時(shí)為佳。8.臨床意義8.1鑒定細(xì)菌可將細(xì)菌分為陽性和陰性兩大類，因而可以初步識別細(xì)菌，縮小范圍，有利于進(jìn)一步鑒定。8.2選擇藥物革蘭陽性菌與陰性菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)有很大差別，因而抗菌藥物有差異。參考文獻(xiàn)[1]周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2007[2]王欽升，周正明，高屹主編.實(shí)用醫(yī)學(xué)培養(yǎng)基手冊.北京：人民軍醫(yī)出版社，1999（周庭銀）編寫人：AAA